ELATUSAINEIDEN VALMISTELU: TAVOITTEET JA VAIHEET - BIOLOGIA - 2026

Valmistelu elatusaineita on rutiinia menetelmät, joita käytetään laboratorioissa kasvun haluttua mikro-organismeja. Viljelyalustat ovat kiinteitä, nestemäisiä tai puolikiinteitä valmisteita, joissa on kaikki tarvittavat ravintoaineet mikrobipopulaation kehittymiselle.

Mikro-organismien viljelykeinot ovat yleensä runsaasti proteiineja ja aminohappoja, ja ne sisältävät yleensä jotakin tutkittavan organismin kasvua edistävää komponenttia, kuten vitamiineja, verta, seerumia.

Lähde: pixabay.com

Ei ole yleistä tai universaalia viljelyväliainetta, koska sen koostumus vaihtelee kiinnostuksen kohteena olevan mikro-organismin tarpeiden mukaan. Jotkut bakteerit voivat kasvaa missä tahansa kasvualustassa, mutta toisilla on erityisiä vaatimuksia.

Mistä se koostuu?

Mikro-organismeja, kuten sieniä ja bakteereja, ei voida tutkia erikseen niiden pienen koon vuoksi. Tästä syystä niitä on viljeltävä keinotekoisilla keinoilla, jotka mahdollistavat väestön merkittävän kasvun.

Esimerkiksi, jos haluamme tutkia bakteereja, meidän on tarjottava heille oikeat olosuhteet, jotta ne voivat lisääntyä ja muodostaa pesäkkeen (joka voidaan havaita paljaalla silmällä).

Viljelyalustan valmistus vaihtelee suuresti viljeltävän mikro-organismin tyypin mukaan. Ennen sen valmistamista on välttämätöntä tietää työorganismin perustarpeet ravintotarpeisiin.

Viljelyväliaineissa käytettäviä yleisimpiä komponentteja kuvataan alla, jotta saadaan yleiskuva niiden valmistuksesta:

agar

Sitä käytetään viljelmissä hyytelöimisaineena ja lisätään etsittäessä kiinteää tai puolikiinteää väliainetta. Ensimmäinen väliaineiden valmistuksessa käytetty kiinteyttävä aine oli gelatiini, mutta vuonna 1883 W. Hesse toi agarin bakteriologian maailmaan.

Bakteriologisessa agarissa on pääkomponenttina polysakkaridia, jonka monimutkaiset oksat on uutettu levistä. Tätä yhdistettä käytetään sakeutusaineena tavallisissa ruuissa, kuten jäätelössä ja hilloissa.

Se on erittäin arvokas osa mikrobiologiassa monista syistä. Pääasiassa siksi, että mikro-organismit eivät pysty hajottamaan sitä, se nesteytyy 100 ° C: n lämpötilassa ja pysyy nestemäisessä tilassa, kunnes se saavuttaa 45 ° C tai vähemmän.

Jos haluat valmistaa kiinteän väliaineen, agaripitoisuuden tulisi olla noin 1,5%, kun taas puolikiinteiden aineiden tulisi olla 0,3 - 0,5%.

nesteet

Patogeenisten organismien viljely tarvitsee kehon nesteitä, jotta ne voivat kehittyä kuten luonnollisessa ympäristössään. Tästä syystä koko tai defibrilloitunut veri lisätään. Neste otetaan terveeltä eläimeltä ja steriloinnin jälkeen se lisätään elatusaineeseen.

otteita

Ne saadaan eri eläinosista (kuten lihasta tai maksasta) tai vihanneksista (siemenet) ja prosessoidaan kiinteän tiivisteen saamiseksi pastana tai jauheena. Yleisimmät ovat hiiva, maltaat ja liha.

Peptonit

Nämä orgaaniset yhdisteet saadaan eläin- tai kasvikudosten entsymaattisella tai kemiallisella hydrolyysillä. Tarkoitus on lisätä sisältöä, joka sisältää runsaasti aminohappoja, jotka ovat proteiinien perusyksiköitä.

Iskunvaimentimet

"Puskurit" tai puskurijärjestelmät estävät äkilliset pH: n muutokset ja auttavat ylläpitämään optimaalista aluetta, jonka keho sietää.

Useimmat organismit voivat menestyä hyvin pH: ssa 7, vaikka jotkut bakteerit mieluummin emäksisiä väliaineita. On kuitenkin bakteereja, jotka vastustavat pH: n vaihtelua arvojen 6 ja 9 välillä.

PH-herkillä lajeilla vaurioita ei aiheuta vedyn tai hydroksyyli-ionien liiallinen määrä, vaan heikkojen happojen tai emästen lisääntyminen, jotka voivat päästä soluun.

Samoin lisätään pH-indikaattoreita sen seuraamiseksi ja käymisen tai muiden prosessien aiheuttamien poikkeamien välttämiseksi.

tavoitteet

Kasvatusliuosta valmistettaessa päätavoite on lisätä kaikki tarvittavat komponentit, jotta organismin onnistunut kehitys voidaan eristää. On yksilöitävä tehokkain komponenttien ja ravintoaineiden yhdistelmä halutun väliaineen saavuttamiseksi.

Sekä kasvualustan valmistelu että varastointi ovat kriittisiä onnistuneen kasvun varmistamiseksi, koska kasvualustan koostumus ja ravinteiden saatavuus riippuvat näistä vaiheista.

On otettava huomioon, että mikro-organismien viljely on tehtävä, johon vaikuttavat useat viljelyalustan ulkopuolella olevat tekijät, kuten vastaanotetun valon voimakkuus, lämpötila ja happamuuden tai elatusaineen alkalisuus. Siksi jokainen näistä muuttujista on otettava huomioon.

Mediatyypit

Perustuu sen koostumukseen

Niiden koostumuksen perusteella on kolme päätyyppiä viljelykasveja: luonnolliset tai empiiriset, puolisynteettiset ja määritellyt synteettiset tai kemialliset väliaineet.

Luonnollinen ympäristö

Luonnollisissa ympäristöissä tarkkaa koostumusta ei tunneta. Näitä ovat ainesosat, kuten maito, laimennettu veri, vihannesmehut, uutteet ja liha- ja peptoni-infuusiot. Taloudellisista syistä edullisia komponentteja, kuten soijauute, hera, melassi jne. Lisätään usein.

Puolisynteettinen väliaine

Sitä kutsutaan osittain synteettiseksi väliaineeksi, jos sen koostumus on osittain tiedossa. Mistä tahansa agaria sisältävästä väliaineesta tulee puolisynteettinen väliaine.

Niiden joukossa meillä on muun muassa perunadekstroosi-agar, czapek-dox-agar, kaura-agar, lihapeptoni-agar, muun muassa.

Synteettinen tai kemiallisesti määritelty väliaine

Tässä tapauksessa väliaineen koostumus - hiilen, typen, rikin, fosforin lähteiden määrän ja minkä tahansa muun tarvittavan kasvutekijän perusteella - on täysin tiedossa. On erittäin hyödyllistä, jos haluat saada toistettavia tuloksia muille tutkijoille.

Niin kutsuttuihin "mikro-organismeihin, joilla on erityiset kasvuvaatimukset", on tarpeen lisätä tarvittavat komponentit. Esimerkki tällaisesta tyypistä on Lactobacillus.

Perustuu mikro-organismin tyyppiin

Samoin viljelyväliaineille on olemassa toinen luokittelu sen mikro-organismin tyypin perusteella, joka voi kasvaa siitä. Tämän periaatteen mukaisesti meillä on seuraavat yleiset, rikastuttavat, selektiiviset ja erilaiset keinot. Jokainen niistä on kuvattu alla:

Yleinen media

Nämä tukevat monenlaisten mikro-organismien kehitystä. Jos jokin organismi tarvitsee kasvuaan varten erityiset olosuhteet, se ei kykene kehittymään onnistuneesti tämän tyyppisessä viljelmässä.

Rikastusväliaineet

Rikastusväliaineet tukevat tietyntyyppisten mikro-organismien kasvua, mutta mitään ainetta ei ole lisätty estämään muun tyyppisiä mikrobeja kasvamasta siinä.

Valikoiva media

He etsivät erityistä mikro-organismin kasvua, kutsuvat sitä muun muassa sieniksi, bakteereiksi, alkueläimiksi. Tätä varten ne estävät muiden kehitystä.

Tämän tavoitteen saavuttamiseksi voidaan lisätä kemiallisia yhdisteitä, jotka ovat tappavia laajalle mikro-organismien ryhmälle ja vaarattomia kiinnostuksen kohteena olevalle organismille, tai voidaan lisätä energialähteitä, jotka voidaan rinnastaa vain kohdemikrobiin.

Selektiivisiä väliaineita käytetään, kun otetaan lääketieteellisiä näytteitä patogeenisen mikro-organismin viljelyyn. Tässä on tarpeen edistää patogeenin kasvua ja estää potilaan normaalin mikrobifloora kehittymistä.

Esimerkiksi vismuttisulfiittiagar ei salli gram-positiivisten bakteerien ja suuren määrän bakteereiden kasvua ruuansulatuskanavan ontelossa. Tästä syystä sitä käytetään gram-negatiivisten bakteerien viljelyyn, jotka aiheuttavat lavantauti, Salmonella typhi fekaalinäytteissä.

Eri media

Tämä tyyppi käyttää joitain mielenkiinnon kohteena olevan organismin diagnostisia ominaisuuksia (esimerkiksi sen aineenvaihdunnan erityispiirteitä) voidakseen tunnistaa ne toiseen lajiin, joka kasvaa samassa ympäristössä.

Sekä differentiaaliset väliaineet että selektiiviset väliaineet ovat erittäin hyödyllisiä kliinisen mikrobiologian ja kansanterveyden alalla, koska näiden alojen on havaittava patologioihin tai huonoihin hygieniaolosuhteisiin liittyvät erityiset mikro-organismit.

Viljelyyn voidaan lisätä indikaattoriaineita, jotka antavat etsimälle pesäkkeelle erottuvan ominaisuuden. Esimerkiksi laktoosi ja pH-indikaattori lisätään agar-eosiini-metyleenisiniseen (lyhennetty EMB) ja MacConkey-agar-agariin.

Siksi, kun näissä väliaineissa kehittyy pesäke, jolla on kyky fermentoida laktoosia ja tuottaa aldehydejä, ne voidaan havaita erityisvärinä.

Askeleet

Tällä hetkellä viljelyväliaineita voidaan ostaa lyofilisoidussa muodossa. Siksi valmistus on helpompaa ja ainoa jäljellä oleva asia on tuotteen uudelleenhydratointi. Pitoisuus on punnittava (ottaen huomioon valmistettava lopullinen määrä) ja liuotettava tislattuun veteen kaikkien tuotteen merkintöjen mukaisesti.

Nestemäisen väliaineen sisältö on jaettava haluttuihin astioihin (Petri-astiat, putket jne.) Myöhempää sterilointia varten. Kiinteän väliaineen jakamiseksi on tarpeen sulattaa se mikroaaltouunilla tai altistamalla aine vesihauteeseen. Elatusaineen pH on säädettävä.

Yleensä agaria käytetään koeputkissa tai Petrimaljoissa. Jos agar jähmettyy kaltevassa asennossa oikealla kulmalla niin, että lopullinen päätereuna on vinossa, tätä järjestelyä kutsutaan nokka- tai kalteviksi putkiksi. Kun agar jähmettyy täysin pystysuorassa asennossa, sitä kutsutaan "syväksi".

Elatusaineiden steriloinnin jälkeen - autoklaavin avulla - niiden annetaan jäähtyä. Niitä on käsiteltävä ympäristössä, jossa ei ole mikro-organismeja. Yleisin tapa on työskennellä sytytetyllä sytyttimellä, joka varmistaa aseptisen ympäristön lähellä.

Viitteet

1. Celis, JE (2006). Solubiologia: laboratorion käsikirja (osa 2). Elsevier.
2. Finegold, SM, Bailey, WR, paroni, EJ, Fineglod, SM, ja Scott, EG (1991). Bailey Scott: mikrobiologinen diagnoosi. Pan-Amerikan lääketiede.
3. Olivas, E. (2004). Mikrobiologian toimintakäsikirja I ja II sekä parasitologia. Ciudad Juarezin autonominen yliopisto.
4. Schlegel, HG, ja Zaborosch, C. (1993). Yleinen mikrobiologia. Cambridge University Press.
5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Case, CL (2007). Johdatus mikrobiologiaan. Panamerican Medical Ed.