KOAGULAASIKOE: PERUSTEET, MENETELMÄ JA KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2026

Koagulaasinegatiiviset testi on laboratorio tekniikka, jota käytetään paljastamaan entsyymin läsnäolo koagulaasi. Tällä entsyymillä on ominaisuus hyytyä plasma. Loeb vuonna 1903 kuvasi ensimmäisenä tätä entsyymiä.

Tämä testi suoritetaan grampositiivisilla, katalaasipositiivisilla cockeilla, mikä antaa mahdollisuuden erottaa Staphylococcus aureus -kannat muista stafylokokista, koska se on ainoa kliinisesti tärkeä mikro-organismi, joka tuottaa sen.

Molemmat kuvat paljastavat positiivisen koagulaasikokeen. Lähde: Vasen kuva: Philippinjl. Oikea kuva: Kuva kirjoittanut MSc. Marielsa Gil.

Tässä mielessä Staphylococaceae-perheen jäseniä, jotka testaavat negatiivisia, kutsutaan usein koagulaasinegatiiviseksi Staphylococcus-ryhmäksi.

On joitain muita kuin S. aureus -kantoja, jotka voivat tuottaa koagulaasia, kuten Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius ja S. delphini.

Kolmella ensimmäisellä on kuitenkin kliininen merkitys eläinlääkinnällisellä tasolla, ja niitä voidaan hyvin harvoin löytää ihmisten infektioiden aiheuttajana, kun taas S. delphiniä esiintyy vain meriympäristöissä.

Lisäksi ne erottuvat helposti, koska S. hyicus ja S. intermedius eivät fermentoi mannitolia ja S. schleiferi spp -koagulaanit eivät käy ferroosissa maltoosia tai trehaloosia, kun taas S. aureus fermentoi näitä hiilihydraatteja.

Koagulaasientsyymin läsnäolo on kytketty kantojen virulenssiin. Tämä teoria on kuitenkin hajonnut, koska havaitaan muita virulentteja koagulaasinegatiivisia lajeja, jotka kykenevät tuottamaan merkittäviä infektioita.

Perusta

Tulkinta

Agglutinaatio 5-20 sekunnin sisällä (vahva positiivinen testi).

Vaihteleva aglutinaatio, joka tapahtuu 20 sekunnin ja minuutin välillä (positiivinen testi viivästynyt).

Jonkin verran taajamista minuutin kuluttua (epäilyttävät todisteet). On suositeltavaa toistaa testi tai vahvistaa putkimenetelmällä.

Agglutinaatiota ei ole (negatiivinen testi).

Tulos SSF: llä. Sen on aina annettava negatiivinen, jos se antaa positiivisen automaattisesti, testitulos mitätöidään.

-Tube koagulaasikoe

tarvikkeet

-Steriili koeputki

-Plasma

-Maryn kylmä 37 ° C: ssa.

Tekniikka

Pipetoidaan 0,5 ml plasmaa 12 x 75 -koeputkeen steriilillä pipetillä. Lataa platinosilmukka 2 - 4 puhdasta pesäkettä tutkiaksesi kiinteästä viljelmästä 18 - 24 tunnin ajan ja liukene plasmassa. sekoitetaan varovasti ja inkuboidaan 37 ° C: ssa 4 tuntia.

Tutki putkea ensimmäisen tunnin aikana ravistamatta sitä, kallista sitä vain varovasti. Jos hyytymää ei vieläkään näy, sitä voidaan tarkkailla 30 minuutin välein, kunnes 4 tuntia on kulunut loppuun. Jos 4 tunnin kuluttua se on edelleen negatiivinen, se voidaan jättää jopa 24 tunniksi, mutta huoneenlämpötilaan. Tarkkaile ja ilmoita tulos.

Kokemuksen perusteella jotkut mikrobiologit suosittelevat testin suorittamiseen 500 ui bakteerisuspensiota 18 tunnin viljelmästä nestemäisessä väliaineessa.

Se näyttää tarjoavan nopeampia ja luotettavampia tuloksia kuin emulgoimalla pesäkkeitä kiinteistä väliaineista, etenkin jos veripankilta saatua ihmisen plasmaa on käytetty.

Liemistä saatujen kantojen käyttö auttaa laimentamaan ihmisen anti-stafylokokkivasta-aineiden mahdollista läsnäoloa plasmassa, joka voi estää koagulaasin vaikutusta.

Tulkinta

Jos havaitaan hyytymä, joka kattaa kaiken nesteen (täydellinen hyytymä) tai hyytymän, jota ei lainkaan ole jäljellä olevassa nesteessä (osittainen hyytymä), sitä olisi pidettävä positiivisena testinä.

Jos hyytymää ei muodostu, eli suspensio pysyy homogeenisena, testi on negatiivinen.

-Koagulaasikoe käyttäen fibrinogeenia

Fibrinogeeniä käytetään samalla tavalla kuin plasmaa ja sitä käytetään sekä objekti- että putkikokeissa. Toimi plasman kanssa kuvatulla tavalla ja tulkitse samalla tavalla.

Käyttää

Sitä käytetään erottamaan Staphylococcus aureus koagulaasinegatiivisista stafylokokista.

QA

Pitäkää S. aureus -kannan tuoreviljelmiä käytettäväksi positiivisena kontrollina. S. epidermidis -kantaa on saatavana myös negatiivisena kontrollina.

rajoitukset

-Positiivista testiä ei pidä jättää inkubaatioon 24 tunniksi, koska S. aureus tuottaa fibrinolysiinin, joka liuottaa hyytymän.

- Luotettavan testin vuoksi on käytettävä tuoretta tai vastavalmistettua plasmaa, samoin kuin on tärkeää käyttää tuoreita bakteeriviljelmiä (18 - 24 tuntia). Tämä välttää väärät negatiivit.

-Testi on suoritettava yhdessä negatiivisen ja positiivisen kontrollin kanssa.

-Jotkut kiinteät väliaineet voivat häiritä koagulaasitestiä. Suolaisesta mannitoli-agarista koostuvien pesäkkeiden käyttöä ei suositella.

-Jos käytetään sitraattiplasmaa, on suositeltavaa laittaa 5 yksikköä hepariinia millilitraa plasmaa vääriä positiivisten positiivisten kohtien välttämiseksi. Tämä johtuu siitä, että jotkut muut mikro-organismit kuin S. aureus voivat hajottaa sitraatin ja aiheuttaa plasman hyytymisen. Tässä tapauksessa on suositeltavaa tehdä Gram- ja katalaasitesti.

-Putkikokeessa on tärkeää seurata reaktiota 30 minuutin välein, koska on olemassa S. aureus -kantoja, jotka tuottavat suuria pitoisuuksia fibrinolysiiniä ja laimentavat hiljattain muodostuneen hyytymän nopeasti. Vältä vääriä negatiivisia.

- Kun tarkkaillaan testiä, vältä putken äkillistä ravistamista. Tämä voi tuhota hyytymän muodostumisen, jota ei palauteta myöhemmin, aiheuttaen vääriä negatiivisia.

Viitteet

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisesti tärkeiden bakteerien tunnistamiseksi. 3. toim. Toimituksellinen Panamericana. Buenos Aires. Argentiina.
4. Pro-Lab -laboratoriot. Kani hyytyy plasman kanssa. Saatavana osoitteessa pro-lab.com
5. "Koagulaasipositiiviset." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 12. helmikuuta 2019, 04:23 UTC. 22. huhtikuuta 2019, klo 15:50 wikipedia.org.