VOGES-PROSKAUER-TESTI: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

Voges-Proskauer testi on biokemiallinen koe käyttää apuna bakteerien tunnistamiseen, jotka kuuluvat Enterobacteriaceae-perheen. Se on erityisen hyödyllinen muun muassa Escherichia coli -kantojen erottamisessa Klebsiellasta ja Enterobacterista.

Testi suoritetaan nestemäisessä elatusaineessa, jonka nimi on Methyl Red - Voges Proskauer, tunnetaan paremmin lyhenteellä RM / VP. Tämä väliaine koostuu puskuroidusta polypeptonista, glukoosista, dikaliumfosfaatista ja tislatusta vedestä.

Metyyli Red-Voges Proskauer (RM / VP) kaupallinen väliaine / VP-testi positiivisesti ja negatiivisesti. Lähde: Kuva kirjoittanut MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, Wikimedia Commonsista

Nykyinen RM / VP-elatusaine on modifikaatio Clark and Lubs-elatusaineesta, joka sisälsi alun perin alhaisemman pitoisuuden peptoneita ja glukoosia. Siten vähemmän vetyioneja, joita tarvitaan positiiviseen Voges-Proskauer-reaktioon, tuotettiin.

Koe perustuu mikro-organismin kykyyn käyttää glukoosia butyleeniglykolireitin kautta ja muodostaa neutraali lopputuote, nimeltään asetoiini, hapen ja emäksisen pH: n läsnä ollessa.

RM / VP-väliaineessa sen lisäksi, että kyetään paljastamaan Voges-Proskauer-testi, voidaan paljastaa myös metyylipunainen testi.

Perusta

Voges-Proskauer-testipohja

Elatusaineessa olevat pluripeptonit tarjoavat välttämättömät ravintovaatimukset bakteerien kasvulle. Sitä vastoin glukoosi on tärkein yhdiste. Monilla bakteereilla on kyky metaboloida glukoosia ja muodostaa pyruvihappoa.

Pyruviinihappo on keskipiste glukoosimetaboliossa ja siitä jokainen mikro-organismi voi kulkea eri reiteillä. Jotkut muodostavat sekoitettuja happoja, kuten maitohappoa, etikkahappoa, muurahaishappoa ja meripihkahappoa, ja toiset muodostavat neutraaleja tuotteita, kuten 2,3-butaanidiolia.

Voges-Proskauer-testi paljastaa mikro-organismin kyvyn muodostaa asetyylimetyylikarbinoolia (asetoiinia), 2,3-butaanidiolin välituotetta, aerobisissa olosuhteissa.

Asetoiini pelkistyy ja muodostaa 2,3-butaanidiolin, mutta tämä reaktio on palautuva, joten jos 2,3-butaanidioli hapetetaan, muodostuu asetoiinia. Siksi happi on välttämätöntä.

Dikaliumfosfaatti on puskuri, joka puskuroi seoksen pH: ssa 6,9 ± 0,2.

Todisteiden paljastaminen ja tulkintaperusteet

Reaktion osoittamiseksi on tehtävä kehitys käyttäen kahta reagenssia (Barrit-reagensseja), jotka tunnetaan nimellä Voges A ja Voges B.

Voges A on 5-prosenttinen a-naftyylin liuos ja Voges B on 40% kaliumhydroksidivalmiste. Jos kaliumhydroksidia ei ole saatavana, se voidaan korvata 40-prosenttisella natriumhydroksidilla.

Α-naftyyli on katalyytti, joka lisää reaktion värin voimakkuutta, mikä tekee testistä herkemmän. Α-naftooli on aina lisättävä ensin, ravistamalla putkea niin, että väliaine on kosketuksessa hapen kanssa. Tällä tavalla läsnä oleva asetoiini hapetetaan diasetyyliksi ja 2,3-butaanidioli hapetetaan muodostamaan asetoiini, kuljettamalla tämä diasetyyliksi.

Näin a-naftyyli sitoutuu diasetyyliin, joka puolestaan ​​on liittynyt arginiinin aminohapossa läsnä olevaan guanidiinin ytimeen, jälkimmäinen tulee pluripeptoneista.

Puolestaan, kalium- tai natriumhydroksidia on vastuussa absorboivat CO ₂ ja reagoimaan peptoneita. Tämä reaktio aiheuttaa lohi-vaaleanpunaisen värin muodostumisen, joka on selvästi nähtävissä putken hyvin ravistamisen jälkeen.

Oikeat määrät diasetyyliä, peptonia ja α-naftoolia on sekoitettava, jotta väri tapahtuu heti. Jos näin ei tapahdu, putken annetaan levätä 15 minuutin ajan ennen tulkintaa.

Testi on yleensä positiivinen 2 - 5 minuutin kuluttua, kun vaaleanpunainen väri näkyy. Värin voimakkuus on suurin (voimakas punainen), jos se jätetään seisomaan 30 minuutista 1 tuntiin.

Negatiivinen testi ilmestyy, kun lieme muuttuu keltaiseksi. Yhden tunnin kuluttua, jos testi on negatiivinen, kuparin väri voi muodostua kaliumhydroksidin reaktion seurauksena α-naftoliin.

Valmistautuminen

Medium MR / VP

Punnitaan 17 g dehydratoitua kasvualustaa ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Anna seistä 5 minuuttia. Kuumenna kiehuvaksi liukenemaan kokonaan. Tarjoa 3–4 ml putkissa ja steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Kuivattu kasvualusta on väriltään beige ja valmistettu väliaine on väriltään vaalean keltaista.

Elatusaineen lopullinen pH on 6,9 ± 0,2.

Voges Reagenssi

Punnitaan 5 g a-naftoolia ja liuotetaan 50 ml: aan etyylialkoholia (absoluuttinen). Jatka sitten etyylialkoholin lisäämistä, kunnes se saavuttaa 100 ml.

Voges B -reagenssi

Punnitaan 40 g kaliumhydroksidia ja liuotetaan 50 ml: aan tislattua vettä dekantterilasiin. Lasi on asetettava kylmään vesihauteeseen lämpötilan säätämiseksi, koska valmisteen liuenneessa lämpötila nousee voimakkaasti.

Kun liuos on kylmä, se siirretään mittapulloon ja täytetään 100 ml: ksi tislatulla vedellä.

Voges-Proskauer -testausmenetelmä

Voges-Proskauer-testin suorittamiseksi RM / VP-lieme siirrostetaan tutkittavalla mikro-organismilla puhtaasta viljelmästä 18 - 24 tunnin ajaksi.

Inokulaatin ei tulisi olla kovin tiheää. Sitä inkuboidaan 35 - 37 ° C: ssa 24 - 48 tuntia, vaikka inkubointi useiksi päiviksi on joskus tarpeen. Cowan ja teräs ovat sitä mieltä, että 5 päivää on vähimmäisinkubaatioaika, joka tarvitaan kaikkien Enterobacteriaceae-perheen positiivisten Voges-Proskauer (VP) -lajien havaitsemiseksi.

Testien kehitys

Erota 1 ml: n erä putkeen ja kehitä seuraavasti: Aseta 12 tippaa (0,6 ml) Voges A -reagenssia ja 4 tippaa (0,2 ml) Voges B: tä. Sekoita ilmastettavaksi ja anna asettua. 5-10 minuutin ajan ennen tulkkausta. Jos testi on kuitenkin edelleen negatiivinen, anna sen istua ja tarkkailla putkea 30 minuutin - 1 tunnin kuluttua.

Punertavan punainen väri osoittaa, että Voges-Proskauer-reaktio on positiivinen. Jos väliaine pysyy keltaisena, reaktio on negatiivinen.

Kehittäjien lisääminen ilmoitettuun järjestykseen ja määrään on välttämätöntä väärien negatiivien välttämiseksi.

Käyttää

Voges-Proskauer-testi on hyödyllinen erottamaan toisistaan ​​E. colin kantoja, jotka ovat VP-negatiivisia, muun muassa Klebsiella-, Enterobacter-, Serratia-sukuista, jotka ovat VP-positiivisia.

Lähde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.

QA

Kontrollikantoja, mukaan lukien Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium ja Enterobacter cloacae ATCC 13047, voidaan käyttää valmistetun väliaineen laadun testaamiseen.

Odotetut tulokset ovat positiivisia Voges-Proskauer-reaktioita vain K. pneumoniaelle ja E. cloacaelle. Loput antavat negatiivisia reaktioita.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. MR-VP-väliaine. 2015.Saatavilla osoitteessa: www.britanialab.com
2. Microkit Laboratories. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Saatavana:
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisesti tärkeiden bakteerien tunnistamiseksi. 3. toim. Toimituksellinen Panamericana. Buenos Aires. Argentiina.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.