KAPSELIN VÄRJÄYS: PERUSTEET JA TEKNIIKAT - BIOLOGIA - 2026

Värjäämällä kapseli on erilaisen värjäytymisen tekniikkaa, joka on ominaisuus, stressin polysakkaridin rakenne ympäröivä tietyt bakteerit ja hiivat kutsutaan kapseli. Sitä käytetään kliinisissä laboratorioissa tiettyjen kapseloitujen mikro-organismien aiheuttamien patologioiden diagnosointiin.

Sitä käytetään myös laboratorioiden opettamisessa osoittamaan tämä morfologinen rakenne muun muassa lääketieteen, bioanalyysin, sairaanhoidon tai sytotekniikan opiskelijoille terveystieteiden uran opiskelijoille.

Klebsiella pneumoniae -levitys värjätään kapselivärillä. Intialainen mustemenetelmä safraniinilla. Lähde: А.А.В

Kapselin läsnäolon osoittamiseksi mikro-organismeissa, joissa sitä on, on useita yksinkertaisia ​​tekniikoita, jotka ovat: negatiivinen tahra, Anthony-tahra ja variantti, joka yhdistää kaksi edellistä.

Negatiivista värjäystä käytetään pääasiassa CSF-näytteissä, kun epäillään hiivan Cryptococcus neoformans esiintymistä. Tämä hiiva on yleinen syy aivokalvontulehdukseen.

Tämä tekniikka käyttää nigrosiini- tai Intian mustetta ja perustuu kontrastin luomiseen valmisteen taustan ja mikro-organismin läpäisemättömän kapselin välille. Tausta muuttuu tummaksi ja kapseli on väritön. Tällä tavalla tämä rakenne paljastuu.

Anthony-tekniikan osalta voidaan sanoa, että sitä käytetään lähinnä laboratorioiden opettamisessa polysakkaridien rakenteen osoittamiseen bakteereissa, kuten Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae ja Neisseria meningitidis.

Tämän tekniikan käyttö diagnostisiin tarkoituksiin on hyvin harvinaista, koska on olemassa muita rutiinitestejä, jotka mahdollistavat näiden mikro-organismien tunnistamisen.

Perusta

Kapseli on vahva polysakkaridirakenne. Tämä suojaa mikro-organismeja fagosytoosilta, ja siksi sen rakenne on vaikea tunkeutua.

Siksi kapselin tahrat perustuvat kontrastiin. Väriaineet värjäävät valmisteen pohjan, kun taas kapseli pysyy värittömänä.

Siksi näillä tekniikoilla kapseli on helposti tunnistettavissa. Jos mikro-organismissa ei ole kapselia, se ei ole erotettavissa tämän tyyppisellä värityksellä, koska kaikki värjätään samalla värillä.

Kaikilla kapselin väritykseen käytetyillä tekniikoilla on sama perustelut huolimatta siitä, että käytetään erilaisia ​​väriaineita ja menettelytapoja.

Tekniikat par

-Anthony-tahra

Anthony-tahra käyttää kristalliviolettia tahrana. Tämä värjää bakteerin rungon ja taustan violetiksi.

Toisaalta käytetään 20% kuparisulfaattia. Tämä toimii pesuliuoksena, ts. Se poistaa ylimääräisen violetin kiteen valmisteesta, jolloin kapselit ovat kirkkaita, mutta ilman, että bakteerirunko tai tausta menettävät väriä.

tarvikkeet

- Irisoiva maito.

- Liukumäki.

- 1% violetti kide.

- 20% kuparisulfaattia.

- Optinen mikroskooppi.

- Upotusöljy.

Prosessi

Tämä tekniikka koostuu:

1. Viljele mikro-organismia värikkäissä maidossa 36 tunnin ajan.
2. Aseta tippa viljelmää objektin päähän ja viereen, aseta tippa violettia lasia, sekoita ja levitä toisen objektilasin päähän.
3. Ilmakuivaa ja älä lämmitä.
4. Pese 20-prosenttisella kuparisulfaattiliuoksella, anna kuivua.
5. Tarkkaile mikroskoopin alla upotuskohteella. Etsi kohti levityksen päitä.

On tärkeää, ettei lämpöä käytetä kiinnittämiseen eikä kuivaamiseen, koska tämä vahingoittaa kapselia. Älä myöskään pese vedellä.

Tulkinta

Irissoiva maito on erinomainen elatusaine, koska se tarjoaa tarvittavat ravintoaineet mikro-organismille näkyvän kapselin kehittämiseksi.

Toisaalta irisoiva maito muodostaa paksun ja tiiviin pohjan, joka värjätään violettilla yhdessä bakteerirungon kanssa, mutta mikro-organismia ympäröivä kapseli pysyy värittömänä. Siksi bakteerirungon ympärillä havaitaan kirkas halo.

Graafinen esitys Anthonyn värjäyksellä värjätyn Klebsiella pneumoniae -pehmennyksen mikroskooppisella havainnoinnilla. Lähde: Tekijä MSc. Marielsa Gil.

Etu

Se on yksinkertainen tekniikka suorittaa. Ei vaadi kiinnitystä.

Lisäksi on huomattava, että muita viljelyväliaineita voidaan käyttää, mutta maitoväliaine on edullinen, koska sen etuna on, että se tarjoaa huomattavampia kapseleita.

haitat

Se on hiukan työvoimavaltaisempi tekniikka kuin negatiivinen värjäys, ja sen visualisointi edellyttää valmisteen kuivumista kokonaan.

-Negatiivinen värjäys

tarvikkeet

- Liukumäet.

- Kasvatusalusta mikro-organismin kanssa.

- kiinalainen muste tai nigrosiini.

- Optinen mikroskooppi.

- Fysiologinen suolaliuos.

Prosessi

Aseta tippa fysiologista suolaliuosta kansilevylle ja liuosta pieni osa mikrobiviljelmästä. On tärkeää, että valmiste ei ole liian paksu. Aseta sitten tippa kiinalaista mustetta tai nigrosiinia ja sekoita.

Suojapeite asetetaan sitten valmisteen päälle ylittämättä nestettä. Se tarkkaillaan mikroskoopin alla keskittymällä ensin 10X-objektiiviin ja siirtymällä sitten 40X: iin.

Tätä tekniikkaa voidaan käyttää myös suoraan CSF-näytteissä. Toisin sanoen sen sijaan, että asetettaisiin tippa mikrobiviljelmää, asetetaan tippa CSF: tä.

Etu

Se on yksinkertainen menetelmä suorittaa ja samalla taloudellinen. Se ei vaadi valmisteen kiinnittämistä tai kuivaamista.

haitat

Haittana on, että se on tarkkailtava mikroskoopilla ennen valmisteen kuivumista, koska jos näin tapahtuu, mikro-organismit supistuvat, mikä vaikeuttaa visualisointia.

Toisaalta vääriä positiivisia voi tapahtua, jos analyytikko ei ole kokenut, koska leukosyytit sekoitetaan usein hiivoihin.

Hiivakapselien havaitsemista kiinalaisella musteella tai nigrosiinitekniikalla olisi pidettävä Cryptococcus neoformansin oletettavana diagnoosina, kunnes se osoitetaan viljelmän kanssa.

Tämä johtuu siitä, että on olemassa muita hiivoja, jotka voivat olla aivokalvontulehduksen aiheuttaja, eikä vain Cryptococcus neoformans, kuten suvun Candida ja Rhodotorula, samoin kuin muut Cryptococcus-lajit.

Tulkinta

Jos kapseloituja mikro-organismeja esiintyy, havaitaan tumma tausta, läpinäkyvien kappaleiden kelluessa nesteessä, mikä korostaa kapselin läsnäoloa.

Kiinan musteella värjätty Cryptococcus neoformans -kapseli. Lähde: Photo Credit: Sisällöntuottajat (t): CDC / Dr. Leanor haley

-Intialainen mustetekniikka

Tämä tekniikka voidaan tehdä myös nigrosiinilla. Se on yhdistelmä aiemmin selitettyjä tekniikoita. Tässä tekniikassa käytetään kristalliviolettia ja intialaista mustetta tai nigrosiinia.

Bakteerirunko muuttuu purppuranpunaiseksi kristallioletista, koska se on negatiivisesti varautunut, kun taas nigrosiini väri levitin pohjan. Jos bakteereilla on kapseli, se näkyy läpinäkyvänä halogeenina mikro-organismin ympärillä.

Kristallivioletti voidaan korvata millä tahansa näistä väreistä: safraniini, emäksinen fuksiini tai metyleenisininen.

tarvikkeet

- Violetti lasi.

- Nigrosiini tai intialainen muste.

- Liukumäet.

- Mikroskooppi.

Prosessi

- Viljellä mikro-organismia elatusaineessa.

- Aseta tippa viljelmää objektin päähän ja viereen, aseta tippa intialaista kristallimustetta tai nigrosiinia, sekoita ja levitä toisen objektin päähän.

- Ilmakuivaa ja älä kiinnitä kuumuuteen.

- Peitä violetilla kideliuoksella 1 minuutin ajan, pese tislatulla vedellä, mutta erittäin herkästi (pehmeä suihku), anna sen kuivua ulkona.

- Tarkkaile mikroskoopin alla upotuskohteella. Etsi kohti levityksen päitä.

Tulkinta

Violetti bakteerirunko ja tumma tausta näkyvät. Kapseli, jos sitä on, näyttää väritöntä bakteerien ympärillä.

Viitteet

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Mikrobiologian perustekniikat. Bakteerien havaitseminen. Reduca (biologia). Mikrobiologian sarja. 2010; 3 (5): 15 - 38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Perusmaalit mikrobiologisessa laboratoriossa. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Saatavana osoitteessa: medigraphic.com
3. Gil M. Negatiivinen värjäys: perusteet, tekniikka, edut ja haitat. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Kapselivärjäys: periaate, menetelmä ja tulokset. 2019. Lääketieteellisen mikrobiologian opas. Saatavana: microbeonline.com