KINYOUN-VÄRJÄYS: PERUSTEET JA TEKNIIKAT - BIOLOGIA - 2026

Kinyoun värjäytyminen on värjäys tekniikka, jota käytetään tahra bakteereja ja loisia resistentti hapan alkoholi. Se syntyi Ziehl-Neelsen-värin muutoksesta; Molemmat tekniikat tulkitaan samalla tavalla, mutta eroavat toisistaan ​​kahdessa muodossa: pääreagenssin valmistuksessa ja siinä, että Kinyoun-tekniikka ei käytä lämpöä.

Tästä syystä se tunnetaan myös nimellä kylmämodifioitu Ziehl-Neelsen tai Kinyoun kylmä tahra. Se on tarkoitettu Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, epätyypilliset mycobacteria, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris ja Cyclosporas cayetanensis värjäämiseen.

Cryptosporidium parvum värjättiin Kinyoun-värjäyksellä. Punlop Anusonpornperm, Wikimedia Commonsista

On syytä huomata, että Nocardia värjää heikosti tällä tekniikalla, koska ne ovat osittain happo-alkoholinkestäviä, joten tälle suvulle on tehty menetelmämuutos.

Kylmä Kinyoun-tekniikka on puolestaan ​​yhdistetty trikromitekniikkaan, jota Didier on modifioinut koktsidien (Cryptosporidium parvum ja Isospora belli) ja mikrosporidium-itiöiden (Enterocytozoon bieneusi ja Encephalitozoon intestinalis) havaitsemiseksi.

Perusta

Tärkein värjäysreagenssi on karbolfukssiini tai karbolifuksiini, jolla on ominaisuus sitoutua karboolihappoihin, jotka ovat lipoirikkaassa vahamaisessa soluseinämässä (mykolihapot) mykobakteerissa ja tietyissä loisissa.

Happovalkaisuaine ei vastusta tätä sidosta; siksi mikro-organismit määritellään haponkestäviksi.

Toisin kuin Ziehl-Neelsen-tekniikalla - joka kiinnittää värin lämmöllä -, Kinyoun-tekniikassa tämä vaihe ei ole välttämätön, koska tätä tekniikkaa varten valmistettu karboolinen fuksiiniliuos sisältää korkean pitoisuuden fenolia.

Fenoli liuottaa lipidimateriaalin soluseinämään, jolloin karbolfukssiiniväriaine pääsee sisään. Kun väriaine tunkeutuu, se pysyy kiinnittyneenä happaman alkoholin pesusta huolimatta.

Tällä tavalla haponkestävät mikro-organismit saavat tyypillisen punaisen värin, kun taas kaikki, mikä ei ole haponkestävää, väri muuttuu ja värjää siniseksi.

Tekniikka

tarvikkeet

- Muokattu karbolifuksiini.

- Alkoholihappo.

- metyleenisininen.

Kinyoun-karbolifuksiinin valmistus

- Perusfuksiini: 4 gr.

- Fenoli: 8 ml.

- Alkoholi (95%): 20 ml.

- Tislattu vesi: 100 ml.

Perusfuksiini tulisi liuottaa hitaasti alkoholiin sekoittaen jatkuvasti. Seuraavaksi kiteytynyt fenoli sulatetaan vesihauteessa 56 ° C: ssa. Kun se on liuennut, lisätään 8 ml edellä valmistettuun fukssiiniliuokseen.

Happoalkoholin valmistus

- Väkevä suolahappo: 3 ml.

- Etanoli (95%): 97 ml.

Se on mitattava, yhdistettävä ja sekoitettava.

Metyleenisinisen kontrastivärin valmistus

- metyleenisininen: 0,3 g.

- Tislattu vesi: 100 ml.

Se punnitaan ja liuotetaan.

Kinyoun-värjäystekniikka

1- Valmista näyte suoraan näytteestä, joka voi olla mm. Ysköstä, keuhkojen nestettä, virtsan sedimenttiä, aivo-selkäydinnestettä tai ulosteita; tai primaarisissa elatusaineissa kehitettyjen puhtaista pesäkkeistä saatujen mikro-organismien suspensiosta.

2 - Kiinnitä sively kuumuudella.

3 - Aseta muste värisiltaan ja peitä valmistettu Kinyoun-karbolifuksiinireagenssi. Anna sen levätä 3 - 5 minuuttia.

4 - Pese tislatulla vedellä.

5- Valkaise happamalla alkoholilla 3 minuutin ajan ja pese uudelleen tislatulla vedellä.

6 - Valkaisu uudelleen hapolla alkoholilla 1 tai 2 minuutin ajan, kunnes enää väritystä ei enää käy.

7- Pese tislatulla vedellä ja anna valua, asettamalla objektilasin pystysuoraan asentoon.

8- Peitä valmiste metyleenisinisellä ja anna vaikuttaa 4 minuuttia.

9 - Pese tislatulla vedellä ja anna kuivua.

10 - Tutki 40X ja sitten 100X.

Haponkestävien mikro-organismien värjäytymisen parantamiseksi ja nopeuttamiseksi lisää 1 tippa kostuttavaa ainetta (kuten Tergitol nro 7) 30 - 40 ml: aan Kinyoun Carbol Fuchsinia.

Jotkut laboratoriot vaihtavat metyleenisinisen kontrastivärin kirkkaan vihreäksi tai pikriinihapoksi; ensimmäinen antaa taustalle vihreän värin ja toinen antaa keltaisen värin.

Erityinen Kinyoun-tekniikka Nocardialle

Nocardia-suvun bakteerien värjäytymisen parantamiseksi käytetään Kinyoun-värjäyksen modifikaatiota. Tekniikka on seuraava:

1- Peitä muste 3 minuutin ajan Kinyoun-karbolifuksiinilla.

2 - Pese tislatulla vedellä.

3 - Väri hetkeksi 3-prosenttisella hapolla alkoholilla, kunnes väritystä ei enää käy.

4 - Pese uudelleen tislatulla vedellä.

5- Peitä valmiste metyleenisinisellä ja anna sen toimia 30 sekuntia.

6- Pese tislatulla vedellä ja anna kuivua.

Yhdistetty karbolifuksiini- ja trikromitekniikka, jota muokasi Didier

Tätä tekniikkaa suositellaan ulosteiden näytteiden analysoimiseksi samanaikaisesti koktsidien ja Microsporidium-itiöiden kanssa. Noudata seuraavaa menettelyä:

1- Peitä miekka Kinyoun-karbolifuksiinilla 10 minuutin ajan.

2- Poista väriaine ja pese tislatulla vedellä.

3 - Valkaisu 30 sekuntia kloorivetyhapon alkoholilla.

4 - Pese uudelleen tislatulla vedellä.

5- Peitä miekka trikromiliuoksella 30 minuutin ajan 37 ° C: ssa.

6- Pese tislatulla vedellä.

7 - Valkaisua 10 sekunnin ajan etikkahappoalkoholilla.

8- Pese pese 30 sekunnin ajan 95-prosenttisella etanolilla.

QA

Positiivisena kontrollina valmistetaan Mycobacterium tuberculosis -kannoilla olevat leikkeet ja värjätään reagensseilla, jotka on valmistettu sen varmistamiseksi, että bakteerit saavat sopivan värin (punainen-fuksia).

Negatiivisia kontrolleja voidaan käyttää myös valmistamalla nopeasti leviämistä muilla kannoilla kuin happoalkoholilla, mikä varmistaa, että koko näyte on kontrastivärinen.

Kinyoun-tekniikka verrattuna Ziehl-Neelsen-tekniikkaan

Kinyoun-tekniikka on yksinkertaisempaa, koska se eliminoi lämmitysvaiheen, mutta sen tärkein etu on, että sillä vältetään pitkällä aikavälillä erittäin myrkyllisten ja syöpää aiheuttavien höyryjen päästöt. Siksi Kinyoun-tahra on turvallisempaa värjäyshenkilöstölle.

On tärkeää ottaa huomioon, että on huolehdittava siitä, että reagenssit eivät ole suorassa kosketuksessa ihon kanssa, koska ne ovat syövyttäviä ja valkaisuaine on syttyvää.

Haittapuoliksi negatiivinen levä ei välttämättä tarkoita, että organismia ei ole läsnä. Lisäksi solujätteiden esiintyminen voi johtaa vääriin positiivisiin tuloksiin, mikä johtaa diagnoosin hämmennykseen.

Viite

1. Soveltuva kliininen kemia. (2016). BK Kinyoun Kit. Saatavissa osoitteessa: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun-tahra ja kaksi kokkidiaa HIV: ssä. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, Toimitus Panamericana SA
5. Wikipedian avustajat. "Kinyoun tahra." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. Wikipedia, Vapaa tietosanakirja, 8. helmikuuta 2018. Verkko. 5. tammikuuta 2019.
6. Yhdistelmä A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Värjäystekniikan toteuttaminen Coccidian ja Microsporidian samanaikaiseen diagnosointiin. Tasavallan yliopiston hygieniainstituutti. Montevideo. Uruguayssa. Saatavana osoitteessa hygienia.edu.uy