TOUKOKUUTA GRÜNWALD-GIEMSA-TAHRA: PERUSTEET, TEKNIIKKA JA KÄYTTÖTAVAT - BIOLOGIA - 2026

May Grunwald-Giemsa tai Pappenheimin tahra on ero värjäystekniikka että seokset Giemsa ja toukokuuta Grünwald reagenssit. Sitä käytetään perifeerisen veren ja luuytimien normaalien ja epänormaalien verisolujen erotteluun sekä histologisten osien ja sytologisten näytteiden värjäykseen.

Molemmat reagenssit - Giemsa ja May Grünwald - ovat peräisin Romanowsky-tyyppisestä värjäyksestä, tekniikka, joka perustuu happamien ja emäksisten väriaineiden yhdistelmään.

Haju, jossa näkyy segmentoitunut neutrofiili ja milosyytti kroonisen myeloidileukemian tapauksessa, värjättynä toukokuun Grünwald Giemsa -värjäyksellä. Tri Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) Wikipedia.org-sivuston kautta.

Giemsa paransi tekniikkaa stabiloimalla eosiinin, metyleenisinisen ja niiden johdannaisten seos glyserolilla. Sen sijaan May Grünwald käyttää eosiinia ja metyleenisinistä käyttämällä metanolia liuottimena. Tämä strateginen yhdistelmä on tuottanut erinomaisia ​​tuloksia.

Vaikka solumorfologian havainnoinnissa se toimii samalla tavalla kuin Giemsa- ja Wright-tahrat, tämä tekniikka parantaa aikaisempia puhdistamalla malariaa, Chagasin tautia, leishmaniaasia ja trichomoniasiaa aiheuttavien loisten värjäytymistä.

Lisäksi se on osoittautunut erittäin hyödylliseksi tekniikaksi spermatiivisen nesteen sytologiseen tutkimukseen. Se on erottunut paitsi osoittamalla siittiöiden morfologiset ominaisuudet, myös sallimalla eritellä leukosyytit, epiteelisolut ja spermatogeneesisolut suurella tehokkuudella.

Perusta

Tekniikka seuraa Romanowsky-värjäysten perustaa, jossa happamilla väriaineilla on selektiivinen affiniteetti emäksisiin solukomponenteihin ja happamat komponentit houkuttelevat emäksisiä tahroja.

Toisella tavalla selitettynä, sekä solurakenteilla että väriaineilla on positiivisia tai negatiivisia sähkövarauksia; kuten maksut hylkivät ja erilaiset maksut houkuttelevat.

Esimerkiksi emäksiset väriaineet, kuten metyleenisininen, ovat positiivisesti varautuneita ja houkuttelevat negatiivisesti varautuneita rakenteita. Siksi tämä värjäys värjää ytimet, joissa on runsaasti DNA: ta ja RNA: ta, joissa on negatiivisesti varautuneita fosfaattiryhmiä.

Segmentoitujen basofiilien rakeet ja RNA: ta sisältävien mononukleaaristen valkosolujen sytoplasmat värjätään myös.

Samoin happovärillä on negatiivinen varaus, minkä vuoksi se sitoutuu positiivisesti varautuneisiin rakenteisiin, kuten erytrosyyteihin ja segmentoitujen eosinofiilien rakeisiin. Segmentoitujen neutrofiilien rakeissa nämä kiinnittävät molemmat väriaineet.

Erilaisia ​​väriaineita

Tässä tekniikassa ortokromaattisten ja metakromaattisten väriaineiden reaktioiden yhdistelmä esiintyy rinnakkain. Ortokromaatit (eosiini ja metyleenisiniset) sitoutuvat solurakenteeseen, johon ne liittyvät, ja antavat vakaan värin, joka ei vaihtele.

Toisaalta metakromaatit (metyleenisinisen taivaansinisen A ja taivaansinisen B johdannaiset) vaihtelevat alkuperäisvärinsä, kun ne on kiinnitetty tiettyyn rakenteeseen, ja sävyjä voi olla jopa erilaisia.

Lopuksi toukokuun Grünwald-ratkaisun toteuttama vaihe vaatii veden läsnäolon, koska ilman tätä väriaine tunkeutuu rakenteisiin, mutta ei kiinnity. Jotta tämä tapahtuisi, väriaineen tulee muuttua polaariseksi tai ionisoitumaan, ja siten sen on pystyttävä saostumaan ja sitoutumaan liittyviin rakenteisiin.

Tekniikka

tarvikkeet

- Liukumäet.

- Värisillat.

- Toukokuu-Grünwald-ratkaisu.

- Giemsa-tahra.

- Tislattu vesi.

Toukokuu Grünwald värjää väkevää liuosta

0,25 g eosiinimetyleenisinistä (värjätty May Grünwaldin mukaan) on punnittava ja liuotettava 100 ml: aan metanolia. Sitten valmistetta sekoitetaan yhden tunnin ajan ja jätetään lepäämään 24 tunniksi. Kun aika on kulunut, se suodatetaan.

Tekniikan soveltamiseksi May Grünwald -väriaine on laimennettava seuraavasti: 200 ml: lla laimennettua väriainetta mitataan 30 ml väkevöityä liuosta, lisätään 20 ml puskuriliuosta ja 150 ml tislattua vettä, jonka pH on asetettu arvoon 7,2-7,3.. Myöhemmin se sekoitetaan ja suodatetaan.

Giemsa-tahrakonsentraatti

0,5 g taivaanieosiinimetyleenisinistä (Giemsa-arvon mukainen tahra) on punnittava, liuotettava 50 ml: aan metanolia ja 50 ml: aan glyseriiniä seokseen.

Tekniikan suorittamiseksi laimenna 1:10 puskuriliuoksella ja anna sen levätä 10 minuuttia. Se voidaan suodattaa tarvittaessa.

Puskuriliuoksen valmistus pH: ssa 7,2

Ne tulisi punnita:

- 40 mg kaliumdivetyfosfaattia (KH2PO4).

- 151 mg di-natriumvetyfosfaatti-12-hydraattia (Na2HPO4).

Molemmat yhdisteet liuotetaan 100 ml: aan vettä.

Veri- tai luuytimien värjäysmenetelmä

Tilaja on kaksi: klassinen ja nopea.

Klassinen tila

1. Peitä tahrat 2-3 minuutin ajan laimennetulla May-Grünwald-liuoksella.
2. Pese puskuroidulla tislatulla vedellä edellisen liuoksen poistamiseksi.
3. Peitä samalla puskuroidulla pesuliuoksella ja anna 1 minuutin. Ajatuksena on, että edellinen väriaine kiinnitetään rakenteisiin ja että samalla solut hydratoidaan.
4. Lisää 12 tippaa laimennettua Giemsa-tinktuuraa puskuroituun veteen ja puhaltaa sekoittamaan ja homogenoimaan. Anna sen levätä 15 - 20 minuuttia.
5. Pese tahrat puskuroidulla tislatulla vedellä ja aseta kuivumaan.
6. Tarkenna ja katso värjäytyneet verisolut valomikroskoopin alla käyttämällä 40X-objektiivia. Tarvittaessa 100X voidaan käyttää.

Pikatila

1. Peitä tahri laimennetulla May Grünwald-tahralla 1 minuutin ajan.
2. Pese puskuroidulla tislatulla vedellä.
3. Peitä puskuroidulla vedellä ja anna sen levätä minuutin.
4. Lisää laimennettu Giemsa-tahra ja anna 5 minuutin.
5. Pese puskuroidulla tislatulla vedellä ja anna kuivua.

Tässä kuvatut tekniikat ovat ohjeellisia, mutta on otettava huomioon, että menetelmät ja värjäytymisajat vaihtelevat reagenssien jakeluyrityksen mukaan. On suositeltavaa noudattaa kunkin liiketilan ehdottomasti ilmoittamaa vaihetta.

Spermaalisen nesteen tahrojen värjäystekniikka

1- Peitä muste ohuella kerroksella May Grünwald -liuosta 4 minuutin ajan.

2- Poista väriaine ja pese tislatulla vedellä.

3 - Aseta kerros laimennettua Giemsaa (1:10) tislattuun veteen 15 minuutiksi.

4- Poista väriaine ja pese tislatulla vedellä.

5- Anna kuivua ja tarkkaile mikroskoopin alla.

Odotetut värit toukokuun Grünwald Giemsa -värillä

Tärkeitä tietoja

Tekniikka vaatii, että reagenssien ja pesuliuosten pH on säädetty arvoon 7,2 - 7,3, niin että väriaineiden affiniteetit solurakenteissa eivät vääristy ja odotettu lopullinen väri ei vaihtele.

Sovellukset

Kliinisissä laboratorioissa käytetään tätä tekniikkaa perifeeristen veri- ja luuytimien, kudosleikkeiden ja sytologioiden värjäämiseen.

Hematologisella alalla tämä tekniikka on elintärkeä tutkittaessa solujen muodon, koon ja lukumäärän poikkeavuuksia. Se on erittäin arvokas työkalu tiettyjen sairauksien, kuten leukemioiden ja anemian, diagnosointiin.

Lisäksi se on erittäin hyödyllinen etsittäessä loisia hematologisilta (Plasmodium sp ja Trypanosoma cruzi) tai histologisilta (Leishmanias sp) alueilta.

Emättimen sytologia

Emättimen sytologian suhteen tämä tekniikka on erityisen edullinen Trichomonas vaginaliksen havaitsemiseksi. Tämä on tärkeä havainto, koska sen esiintyminen simuloi karsinooman in situ -kuvia, jotka katoavat myöhemmin loisen eliminoituessa.

Siittiöiden näyte

Se on ollut ihanteellinen väline spermanäytteiden tutkimiseen, koska se tarjoaa arvokasta tietoa siittiöiden laadusta.

Sen tarjoamat tiedot liittyvät pääasiassa lukumäärään ja morfologiaan, samoin kuin samanaikaisiin soluihin, joita voi olla läsnä ja jotka ovat elintärkeitä, kuten itusoluihin, leukosyyteihin ja epiteelisoluihin.

Tämän analyysin avulla on mahdollista kuvata pään, kaulan, välikappaleen ja pääkappaleen siemennesteessä havaitut poikkeavuudet.

Lisäksi ne voivat auttaa myös osoittamaan hemospermiaa (punasolujen esiintyminen siemennesteessä) ja leukospermiaa tai piospermiaa (lisääntynyt leukosyyttien lukumäärä siemennesteessä).

Viitteet

1. Costamagna S, Prado M. Tuoreen testin validointi, toukokuun Grünwald-Giemsa- ja Gram-tahrat sekä elatusaineet Trichomonas vaginalisin diagnoosiksi. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60 - 64. Saatavana: scielo.
2. Merck KGaA -laboratorio. Toukokuu Grünwaldin eosiinimetyleenisininen mikroskopiaan.
3. "Toukokuu-Grünwald-Giemsa tahra." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 15. marraskuuta 2018, 14:37 UTC. 8. tammikuuta 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Lasikemikaalien Panreac-laboratorio. Reagenssit histologisiin tekniikoihin, hematologiaan ja mikrobiologiaan. Saatavana osoitteessa glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Suositus veren tahrojen värjäämiseen hemogrammin lukemiseksi. Kansallinen ja vertailulääketieteellinen laboratorio. Chilen kansanterveyden instituutti.
6. Sarabia L. Spermiogrammi WHO: n kriteerien mukaan. Kehitysanatomian ja biologian ohjelma. Lääketieteen yksikkö. Chilen yliopisto. Saatavana osoitteessa: pp.centramerica.com