WRIGHTIN TAHRA: PERUSTEET, MATERIAALIT, TEKNIIKKA JA KÄYTTÖTARKOITUKSET - BIOLOGIA - 2026

Wright tahra on värjäystekniikka luoma amerikkalainen patologi James Homer Wright 1902, perustuen Romanowsky tahra. Koska Romanowsky-värjäys oli epävakaa, Wright sisällytti metanolin liuottimeksi ja kiinnitysaineeksi.

Tämä väri on monikromaattinen, mikä tarkoittaa, että se tuottaa useita värejä väriaineen absorboivan rakenteen mukaan. Tätä värjäystekniikkaa on käytetty laajasti valkosolujen erilaisissa määrissä ja perifeerisen veren ja luuytimen punasolujen, verihiutaleiden ja leukosyyttien morfologian tutkimisessa.

Erilaiset ääreisveren tahrat värjätään Wrightin tahralla. A. Akuutti leukemia B. Plasmodium vivax punasoluissa. C. Plasmodium falciparum, makrogametosyytti. D. lymfosyytti

Sen soveltaminen on erittäin tärkeää, koska poikkeavuuksia voidaan nähdä veren eri solulinjoissa, mikä helpottaa sairauksien, kuten leukemian tai bakteeri- tai loistartuntojen, diagnosointia.

Ehkä nämä ovat yleisimmät sovellukset, joissa tätä tekniikkaa käytetään, mutta ne eivät ole ainoita. Se on hyödyllinen myös muissa näytteissä kuin veressä ja luuytimissä, kuten nenävuodot, ulosteen lima, yskös, ihonäytteet.

Wrightin tahran perusteet

Wrightin tahra syntyi Romanowsky-värjäyksestä, joka koostuu happaman värin (eosiini Y) metyylialkoholiliuoksesta ja emäksisestä väriaineesta (metyleenisininen) ja niiden hapettumistuotteista.

Wrightin värjäyksessä käytetty väriaineiden seos aiheuttaa vaikutuksen, joka tunnetaan nimellä Romanowsky, ts. Se antaa kauniin violetin värin leukosyyttien ja neutrofiilisten rakeiden ytimille, kun taas punasolut värjäävät vaaleanpunaisilta.

Wrightin värjäyksen tyypillisen värivalikoiman antamisesta vastaavat komponentit ovat sininen B ja eosiini Y. Havaittu vaikutus riippuu väriaineiden sitoutumisesta kemiallisiin rakenteisiin sekä sinisen B: n ja eosiini Y: n vuorovaikutuksesta.

Happamat rakenteet, kuten nukleiinihapot, ydinproteiinit ja joidenkin solutyyppien reaktiivinen epäkypsä sytoplasma, kiinnittävät sinisen B: n (emäksinen tahra).

Vaikka emäksiset rakenteet, kuten hemoglobiini, segmentoitujen eosinofiilien rakeet sitovat muiden solurakenteiden lisäksi eosiini Y: tä (happoväriaine).

Värjäytystulokseen voivat vaikuttaa eri tekijät, kuten Wright-väriaineen, puskurin ja pesuliuoksen pH; samoin kuin värjäytymis- ja kiinnitysaika.

Siksi jokainen reagenssien valmistusvaihe on ratkaisevan tärkeä, ja se on suoritettava huomioiden kaikki yksityiskohdat.

tarvikkeet

Wrightin tahra. 100 ml: n vaaditaan:

Punnitaan 0,3 g Wrightin tahraa, mitataan 97 ml metanolia ja 3 ml glyserolia.

Valmistautuminen

Aseta raskas määrä Wrightin tahraa laastiin ja lisää vähitellen glyserolia, kunnes jauhe on täysin liuennut.

Sen jälkeen metanoli lisätään, sekoitetaan ja kaadetaan meripihkan pulloon.

Ennen käyttöä liuosta tulee ravistaa kevyesti ja suodattaa.

Puskuroitu puskuriliuos

Yhteen litraan tislattua vettä, 3,76 g dinatriumvetyfosfaatti (Na ₂ HPO ₄ 2 H ₂ 0) plus 2,1 g divetykaliumfosfaatin (KH ₂ PO ₄) lisätään.

Sekoita hyvin, kunnes kaikki sisällytetyt reagenssit ovat liuenneet. Säädä pH arvoon 7,2. Kaada lasipurkkiin ja pidä huoneenlämpötilassa.

Lisäaineet tarvitaan värityksen suorittamiseen

Väritystekniikan suorittamiseksi vaaditaan lisäksi muita materiaaleja, joita ovat: objektilasi tai kansi, värisilta, vedellä tai puskurilla varustetut t-paidat pesemiseen, sekuntikello väriaikojen pitämiseksi ja jotkut kuivausmateriaalit (imukykyinen paperi, sideharso tai puuvilla).

Wrightin tahran komponentit

metanoli

Alkoholi (metanoli) toimii verikohdan kiinnittimenä objektilasille.

Periaatteessa se on koagulantti pelkistävä, kuivattava ja kiinnittävä reagenssi. Siksi sen tehtävänä on koaguloida proteiineja ja tehdä niistä liukenemattomia, tosin itse denaturoimatta niitä.

Metanoli on kaikissa laboratorioissa yleisimmin käytetty särjen kiinnitysreagenssi, koska se antaa parempia tuloksia kuin etanoli. Ihanteellinen pitoisuus on 99%.

vaimennin

Puskurin (puskuroidun liuoksen) tehtävänä on säätää tai ylläpitää väriaineen pH, koska pH, joka on asetettu arvoon 7,2, on välttämätöntä solurakenteille, jotta ne kykenevät absorboimaan väriaineet kunnolla.

Toisaalta metanolikiinnitysvaihe dehydratoi solut ja puskuri auttaa nesteiden uudelleenhydratoinnissa.

Eosiini (Y)

Eosiinilla on affiniteetti rakennuspalikoihin, koska se on happoväri. Kaksi eosiinityyppiä tunnetaan hyvin samanlaisina toistensa suhteen, niin paljon, että kumpaakin näistä voidaan käyttää, jolloin saadaan sama tulos.

Yksi on nimeltään eosiini Y, keltainen eosiini tai tetrabromifluoreseiini, ja toinen nimeltään eosiini B, sinertävä erostroiini B tai dibromodinitrofluoreseiini. Kuitenkin eosiini Y on yleisimmin käytetty.

Tämän väriaineen tärkein ominaisuus on sen negatiivinen napaisuus, mikä tekee siitä houkuttelevan positiivisesti varautuneisiin solurakenteisiin.

Metyleenisininen

Se on perusväritys. Sen pääominaisuus on metakromasia, ts. Kaikkia rakenteita ei värjätä samanvärisiksi, se riippuu värjättävien rakenteiden kemiallisesta koostumuksesta.

Jotkut muuttuvat vaaleaksi tai tummansiniseksi ja toiset tumman violetiksi tai vaalean lilaksi.

Tekniikka

1-Suorita näytteen levitys siten, että ohut kalvo jää joko dioille tai kansilevylle.

2-Anna sen kuivua ilmassa noin 2 tuntia.

3-Sijoita kuiva tahri värjäyssiltaan tai värjäysalustalle siten, että näytteen levitin on ylöspäin.

4-Peitä arkki Wright-tahralla pisaroittain, kunnes koko pinta on peitetty. Anna seistä 5 - 8 minuuttia.

5-Tahran tulee peittää objektilasi kokonaan, ilman että se roiskuu reunojen yli. Jos väritysaikana se alkaa haihtua, lisää muutama tippa.

6 - Lisää myöhemmin sama määrä iskunvaimentinta, puhalta vähän, kunnes ominainen metallinen kiilto tulee näkyviin. Aika 10 - 15 minuuttia.

7-Pese vesijohtovedellä asettamalla lempeä virta, kunnes arkki näyttää vaaleanpunaiselta.

8-Poista alkoholin liimattu väriaine liuen takaosaan alkoholilla kastetulla sideharsolla.

9-Anna rasvan kuivua erittäin hyvin ennen kuin asetat upotusöljyn tarkastelemaan sitä mikroskoopin alla.

Apuohjelma

hematologian

Se on ihanteellinen ääreisveren tahrojen värjäämiseen, paksujen verimääreiden tutkimiseen ja solujen tutkimiseen luuytimenäytteistä.

Tämän väriaineyhdistelmän kemiallisista ominaisuuksista johtuen solurakenteet voidaan helposti tunnistaa, ja läsnä olevat erityyppiset solut voidaan erottaa.

Vuotava nenä

Tämä tekniikka on erittäin hyödyllinen nenän erittymisen solujen (epiteelisolut, segmentoidut eosinofiilit, polymorfonukleaariset solut) tunnistamiseen allergisen nuhan diagnoosissa.

parasitologia

Tässä mielessä se on ollut hyödyllinen Leishmania sp: n tutkimiseen ihon haavaumien ihonalaisen solukudoksen histiosyyteissä. Samoin sitä käytetään leukosyyttien tunnistamiseen ulosteenäytteissä (ulosteen leukogrammi).

Tässä tapauksessa lääkärille on kiinnostavaa tietää, onko ulosteessa esiintyvä leukosytoosi polymorphonuclear vai mononuclear. Tämä löytö fekaalileukogrammissa opastaa onko kyseessä bakteeri- tai virusinfektio.

Toisaalta veressä kiertäviä loisia voidaan löytää punasoluissa tai vapaina plasmassa. Haettuja loisia ovat Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii ja filarias, ja eläinlääketieteessä ne ovat hyödyllisiä etsittäessä Thebesria equi ja Babesia caballi -bakteereita, bebesioosin syy-aineita, erityisesti hevosissa.

Wright-tahra ja myös Giemsa-tahra mahdollistavat verenvuoto-erottelun normaalista solukomponentista. Tähän voidaan käyttää kahta tyyppiä levityksiä:

Levitä ohut

Veri leviää ohutkalvona objektilasille. Värjätty Wrightin tahralla paljastaen ytimen ja sytoplasman ominaisuudet.

Paksu pudotus

Tätä metodologiaa käytetään tutkimaan loisten esiintymistä suuremmassa määrin verta.

Tätä varten laitetaan suuri tippa verta verta. Siellä ollessaan se on defibrilloitu, tekemällä yhä suurempia ympyröitä keskeltä ulospäin toisen liukureunan avulla.

Lopuksi, jotta parasiitit voidaan tarkkailla paksussa levitessä, punasolut on hajotettava vedellä.

Hengitysteiden tulehdukset

Hengitystasolla tämä tekniikka on myös hyödyllinen, koska ysköksen, keuhkojen huuhtelu- tai keuhkoveren näytteissä olevat solut ovat tärkeitä diagnoosin määrittämisessä.

Samoin tässä voidaan erottaa polymorfonukleaariset solut ja mononukleaariset solut.

bakteerioppi

Tämän tekniikan käyttö bakteriologiassa on rajoitettua, koska se ei ole hyvä bakteerien värjäykselle, minkä vuoksi niiden värjäämiseen käytetään muita erikoistuneita värjäystekniikoita.

Sitä on kuitenkin käytetty epiteelisolujen etsimiseen Chlamydia trachomatis -sisältökappaleiden kanssa virtsaputken tai endoservikiaalisen limakalvojen pinnoitteissa, vaikkakin on tunnustettava, että se ei ole paras menetelmä tähän.

On myös mahdollista havaita spiraalimaisia ​​bakteereja, kuten Borrelia burgdorferi, tartunnan saaneiden potilaiden punasolujen joukossa, samoin kuin Ehrlichia sp: n morulaeja tai inkluusiokappaleita lymfosyyttien, monosyyttien tai neutrofiilien sytoplasmassa verimustauksessa.

mykologia

Histoplasma capsulatum on patogeeninen sieni, joka diagnosoidaan usein Wrightin tahralla värjättyjen kudosnäytteiden mikroskooppisella havainnoinnilla.

Kuinka verinäytteen rakenteita havaitaan Wrightin tahralla?

Lähde: Retamales E, Mazo V. Kansanterveyslaitos, Chilen hallitus. Suosituksia verimärien värjäyksestä hemogrammin lukemiseksi.

Suositukset hyvälle värjäytymiselle

Verinäytteen diojen tulisi ilman kuivua spontaanisti. Leikkureiden tulee olla mahdollisimman ohuita väriaineen paremman kiinnittymisen saavuttamiseksi ja liiallisen värjäytymisen välttämiseksi.

Korkealaatuista värjäystä varten on suositeltavaa värjätä kahden tunnin kuluessa levitysvalmistuksesta. Toisaalta, ihanteellinen näyte on kapillaariveri, ilman antikoagulanttia.

Kuitenkin, jos laskimoverta käytetään, sitä tulisi käyttää antikoagulanttina EDTA: na eikä hepariinina, koska viimeksi mainittu voi muuttaa solurakenteita.

Valmistetun väriaineen pilaantumisen välttämiseksi sitä tulisi varastoida kuivissa paikoissa.

Pesuprosessin aikana on suositeltavaa käyttää vettä, joka on säädetty neutraaliin pH-arvoon.

Lopuksi on suositeltavaa testata aika ajoin laboratoriossa käytetyt värjäysmenetelmät.

Tämä tapahtuu värjäämällä näytteitä tai laajennettuja kuvioita laadunvalvontaan. Tämä vaihe on tärkeä, koska se varmistaa, että värjäys on valmistettu oikein ja värjäytysajat ovat hyvin standardisoituja.

Jos kuvioarkki on heikosti värillinen, on ongelmia, jotka on ratkaistava.

Yleiset virheet Wright-värjäyksessä

Hyvin vaalea värjäys

Hyvin vaaleat tahrat johtuvat yleensä hyvin lyhyestä värjäytymisajasta tai liiallisesta pesusta. Se korjataan pidentämällä kosketusaikaa väriaineen kanssa tai vähentämällä pesuaikaa.

Väriaine saostuu

Väriainetta saostuneilla pinnoitteilla voi olla useita syitä, mutta yleisimmät syyt ovat: suodattamattoman väriaineen käyttö, värjäys epätasaisiin värjäyssiltoihin, pölyllä tai rasvalla likaisten arkkien käyttäminen, ei peseminen hyvin täydellinen värjäys.

Erittäin punainen tai sininen tahri

Puskuri vastaa väriaineen pH: sta. Väriaineet, joiden pH on alle ilmoitetun (hapan), johtavat erittäin punertaviin tahroihin.

Jos väriaineen pH on yli (emäksinen), saadaan erittäin sinertävää tahraa.

Tallennustila

Reagenssi tulisi varastoida huoneenlämpötilassa.

Viitteet

1. Gutiérrez V. Vertaileva tutkimus Wright-värjäysmenetelmän ja Elisa-testin välillä koiran Ehrlichioosin diagnosoimiseksi Hondurasin San Pedro Sulan kaupungissa. 2008. Tutkielma tutkittavaksi saadakseen eläinlääketieteellisen tutkinnon. Guatemalan San Carlosin yliopisto.
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Perusmaalit mikrobiologisessa laboratoriossa. Vammaisuustutkimus. 2014; 3 (1): 10-18.
3. "Wrightin tahra." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 18. toukokuuta 2018, 12:05 UTC. 8. joulukuuta 2018, 20:37
4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Babesia spp. metsästyshevosissa, Córdoba (Kolumbia). Rev. udcaactual jako. 2013; 16 (2): 451 - 458.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA
6. Retamales E, Mazo V. Chilen kansanterveyslaitos. Suosituksia verimärien värjäyksestä hemogrammin lukemiseksi.