NEGATIIVINEN VÄRJÄYS: PERUSTEET, TEKNIIKKA, EDUT JA HAITAT - BIOLOGIA - 2025

Negatiivinen värjäytyminen on menetelmä erityistä väriä korostaa läsnäolo kapselin joitakin mikro-organismeja, pääasiassa Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae ja Cryptococcus neoformans-, kliinisistä näytteistä tai puhtaat viljelmät.

Suora näyte, jota yleensä käytetään negatiivisen värjäyksen levittämiseen, on aivo-selkäydin. Tämä tekniikka edustaa nopeaa vaihtoehtoa aivokalvontulehduksen, erityisesti Cryptococcus neoformansin oletetulle diagnoosille.

A. Intian musteella värjätty hammashambakki, B. Cryptococcus neoformans kapseloituu heikosti kapseloituna luonnossa esiintymällä nigrosiinilla. C. Cryptococcus neoformans var gatti paksulla kapselilla, sellaisena kuin se on loismuodossaan, käyttäen nigrosiinia. D. Cryptococcus neoformans hiukan laimennetulla Intian musteella. Gisell Quinde, Wikimedia Commons / CDC, Wikimedia Commons / Photo Credit: Sisällöntuottajat: CDC / Dr. Leanor Haley, Wikimedia Commonsin kautta

Samoin tämä tahra voidaan levittää yskölle ja steriileille nesteille yleensä, samoin kuin kannoille, jotka on saatu nuorista puhtaista viljelmistä. Tämä tekniikka käyttää nigrosiini- tai Intian mustetta sen suorittamiseen; Siksi on erittäin yksinkertainen ja edullinen menetelmä, joka tarjoaa erittäin diagnostisen arvon tietoa lyhyessä ajassa.

Tässä mielessä mikä tahansa laboratorio pystyy suorittamaan tämän värjäyksen. Tietenkin laboratoriossa on oltava pätevä henkilöstö, joka kykenee tunnistamaan eristetyt tai orastuvat Cryptococcus neoformans -hiivat ja erottamaan ne näytteen mahdollisista leukosyyteistä ja esineistä.

Perusta

Nigrosiini ja Intia-muste toimivat samalla tavalla; siksi kumpaakin näistä aineista voidaan käyttää vaihdettavasti.

Tätä tekniikkaa kutsutaan negatiiviseksi värjäykseksi, koska se toimii päinvastaisella tavalla kuin muut värjäystekniikat. Tässä pysyy tyydyttämättömänä rakenne, jota etsitään tai jota halutaan nähdä; eli mikro-organismit.

Siksi värjäys perustuu siihen, että musteen pohja värjätään tummalla värillä. Tässä tilanteessa kapseloidut rakenteet erottuvat vaalealla tai väritöntä väriä.

Yleensä hiivat ovat refringent, niitä ympäröi kirkas halogeeni, joka vastaa kapselia. Tämä tapahtuu, koska Intian muste ja nigrosiini eivät ole aineita, jotka eivät pääse tunkeutumaan polysakkaridiin, joka muodostaa elävien mikro-organismien kapselin.

On syytä huomata, että muut rakenteet, joita voi olla läsnä suorassa näytteessä, kuten leukosyytit tai punasolut, eivät tunkeudu.

Kuitenkin, jos mikro-organismit ovat kuolleita, väriaine voi tunkeutua niiden sisälle, joten tämä värjäys on hyödyllinen myös arvioitaessa mikro-organismien elinkelpoisuutta.

Tekniikka

tarvikkeet

nigrosiini

Nigrosine velkaa nimensä mustalla värillä, joka sillä on. Se on synteettinen aine, joka saadaan lämmittämällä orgaanisten yhdisteiden seosta - esimerkiksi nitrobentsiininä, aniliinina ja aniliinihydrokloriittina - käyttämällä katalyyttiä (rautaa tai kuparia) mainitussa reaktiossa.

Kiinalainen muste

Kiinalainen muste on aine, jota aasialaiset käyttävät pääasiassa kirjoittamiseen, taideteosten tekemiseen ja yksivärimaalaukseen. Se on erittäin suosittu kiinalaisessa kulttuurissa.

Sitä saadaan kalmarimusteesta, sekoitettuna jauhemaiseen hiileen, vähähartsisten puiden polttamiseen.

Se on myös mahdollista valmistaa nokeesta hiilivetyjen (kasviöljyjen) polttamisessa yhdessä proteiinigelatiinin kanssa, joka antaa sille oikean konsistenssin hiilihiukkasten saostumisen välttämiseksi.

Näytteenottoa koskevat vaatimukset

- Se ei vaadi paastoa.

- CSF: n, ysköksen tai steriilin nestemäytteen on oltava vähintään 1 ml: n tilavuus, ja se on siirrettävä välittömästi laboratorioon huoneenlämmössä.

- CSF- ja steriilien nesteiden näytteet on otettava erikoistuneen lääkärin toimesta.

- Se voi olla myös epäilyttävän kannan puhdas viljelmä, joka liittyy edellä mainittuihin taudinaiheuttajiin.

Tekniikan suorittaminen suorilla näytteillä

- Näytteet on sentrifugoitava, sitten supernatantti heitetään pois ja sedimentti otetaan.

- Pisara sentrifugoitua materiaalia (sedimentti) ja tippa intialaista mustetta tai nigrosiinia asetetaan puhtaalle levylle.

- Se tulee sekoittaa hyvin ja peittää kansilevyllä, jotta tippa leviää ohuena kalvona kulkematta reunojen yli.

- Sen jälkeen valmiste kiinnitetään mikroskoopille.

- Jos valmiste on liian tumma, se voidaan laimentaa vedellä.

Tekniikan suorittaminen kulttuurikannoilla

- Hyvin pieni osa nuoresta viljelmästä otetaan siemenneulalla ja liuotetaan pisaraan intialaista mustetta, joka on aiemmin asetettu puhtaalle objektilasille.

- Päälle asetetaan peitelevy.

- Se havaitaan mikroskoopissa 10X ja sitten 40X.

Voit myös liuottaa osan pesäkkeestä tislattuun veteen, ja ota siitä tippa ja sekoita se Intian musteen kanssa. Tällä tavalla valmiste ei tule olemaan niin paksu, että rakenteiden tarkkailu on mahdollista eristettynä; Jos väkijoukkoja on, sitä ei tarkkailla hyvin.

Toinen menetelmä on seuraava:

- Aseta tippa suspensioviljelmää objektilasin toiseen päähän.

- Aseta tippa nigrosiinia samaan päähän ja sekoita.

- Levitä toinen näyte toisen näytteen avulla tekemällä hematologista leviämistä.

- Anna kuivua ja tarkkaile mikroskoopin alla.

Mikroskoopin havainnot

Sinun on ensin tarkennettava 10X-tavoitteeseen saadaksesi laajan kuvan kentästä. Tämän jälkeen olisi tutkittava, onko tyhjiä tiloja; Jos sellaisia ​​on, keskitä 40X nähdäksesi yksityiskohdat.

Etu

- Se on helppo toteuttaa.

- Se on edullinen tekniikka.

- Tämä menetelmä ei vaadi leivän kiinnittämistä lämmölle tai kemikaaleilla; siksi mikro-organismeja havaitaan ilman vääristymiä.

- Tuoretta valmistetta ei tarvitse kuivata, joten se voidaan havaita välittömästi, jolloin tulokset saadaan nopeasti.

haitta

Kokoonpanon jälkeen tuoreet valmisteet on tarkastettava välittömästi; Jos niiden annetaan kuivua, niitä ei voida enää tarkkailla, ja uusi on asennettava.

Kudosvärjäys Intian musteella

Toinen tehtävä, jonka Intian muste voi suorittaa, on patologialaboratorioissa. Tätä käytetään kirurgisesti eristettyihin kudosnäytteisiin kasvaimen resektiorajojen merkitsemiseksi.

Merkitty kudos ruiskutetaan etikkahapolla. Tämä toimii peitteenä ja estää musteen vuotamisen, kun kudos käsitellään rutiininomaisesti biopsiavalmisteena.

Menettely käsittää kudoksen uimisen alkoholissa ja ksyleenissä ja sen liottamisen parafiinivahassa. Tämä merkintä opastaa patologia kudosta tarkkaillessa osoittaen, missä kirurginen resektioraja tai muu mielenkiintoinen kohta on.

Viitteet

1. «Nigrosina». Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 11. heinäkuuta 2017, 22:46 UTC. 6. tammikuuta 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Kiinan muste". Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 1. lokakuuta 2018, 03:08 UTC. 6. tammikuuta 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J ja yhteistyökumppanit. (2006). Extremaduran itsehallintoalueen työvoimahenkilöstö. Erityisohjelma, nide IV. Toimituksellinen MAD. Sevilla - Espanja, s. 211 - 212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), erikoistunut laboratorioteknikko, Galician terveyspalvelu (SERGAS). Erityisen aiheen esityslistan osa 2. Toimituksellinen MAD. Sevilla, Espanja, s. 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA