EMB agar on selektiivinen ja ero käytetty väliaine kiinteän kulttuuri eristämiseksi gram-negatiivisia basilleja, erityisesti Enterobacteriaceae ja muut gram-negatiiviset bakteerit vaatimaton. Se tunnetaan myös lyhenteellä EAM, joka tarkoittaa eosiini-metyleenisinistä.
Tämän väliaineen ovat luoneet Holt-Harris ja Teague vuonna 1916. Se sisältää peptonia, laktoosia, sakkaroosia, dikaliumfosfaattia, agaria, eosiinia, metyleenisinistä ja vettä. Se on hyvin samanlainen kuin MacConkey Agar, varsinkin kun käytetään Levine's Modified EMB Agaria, joka ei sisällä sakkaroosia.
Escherichia colin metallinen kiilto EMB-agarilla Lähde: Carmen Moreno González, Wikimedia Commonsista
Itse asiassa kukin laboratorio päättää työskennellä yhdessä vai toisessa, koska ne suorittavat saman toiminnan, vaikka biokemiallisesti ne ovatkin erilaisia.
Sillä on jopa sama haittapuoli kuin klassisella MacConkey-agarilla Proteus-suvun parvien tuotannon kannalta. Siksi tämän ilmiön välttämiseksi agaripitoisuutta voidaan nostaa jopa 5%.
Perusta
Valikoiva
EMB-agar on hienovaraisesti selektiivinen, koska se sisältää aniliiniväriaineita (eosiini ja metyleenisininen), jotka toimivat estäjinä, estäen useimpien gram-positiivisten bakteerien ja joidenkin tyylikkäiden gramnegatiivisten sauvojen kasvua.
Tällä agarilla on kuitenkin haittapuoli, että jotkut grampositiiviset bakteerit voivat vastustaa estävien aineiden läsnäoloa ja kasvaa pieninä värittöminä punctate-pesäkkeinä, kuten Enterococcus faecalis ja jotkut Staphylococcus.
Tietyt hiivat voivat myös kasvaa, kuten Candida albicans -kompleksi, joka antaa hyvin pieniä vaaleanpunaisia pesäkkeitä. Klamydosporit voivat kehittyä jopa tästä hiivasta, jos näyte on syväsiementetty.
Ero
Toisaalta EMB-agar on myös differentiaalinen väliaine, koska näillä väriaineilla (eosiinilla ja metyleenisinisellä) on ominaisuus muodostaa sakka happamassa pH: ssa, minkä vuoksi ne toimivat sen tuotannon indikaattoreina.
Siten heikosti laktoosia tai sakkaroosia käyttävät bakteerit tuottavat purppuraisia pesäkkeitä 24 - 48 tunnin sisällä. Esimerkiksi suvut Klebsiella, Enterobacter ja Serratia.
Ne bakteerit, jotka fermentoivat voimakkaasti laktoosia, kuten Escherichia coli, tai sakkaroosia, kuten Yersinia enterocolitica tai Proteus penneri, muodostavat vihertävän mustan saostuman, jolloin näille lajeille on ominaista metallinen kiilto.
Olisi huomattava, että jos käytetään EMB-leviiniväliainetta (ilman sakkaroosia), Yersinia enterocolitica ja Proteus penneri tuottavat kirkkaita pesäkkeitä.
Bakteerit, jotka eivät käy laktoosia tai sakkaroosia, ravitsevat peptoneilla, jotka tarjoavat bakteerien kasvulle välttämättömät aminohapot ja typen ja tuottavat kirkkaita pesäkkeitä. Esimerkiksi suvut Salmonella ja Shigella.
Samoin on tärkeätä huomata, että Acinetobacter-suvulla voi esiintyä laventelinsinisiä pesäkkeitä, vaikka se ei olekaan laktoosikäärijä tai sakkaroosi, mutta sillä on ominaisuus kiinnittää metyleenisininen soluseinään. Tämä voi tapahtua myös muiden hapettavien bakteerien kanssa.
Valmistautuminen
Alkuperäinen kuivattu väliaine on väriltään vaalean beige.
Tämän viljelyalustan valmistamiseksi 36 grammaa kuivattua väliainetta on punnittava ja suspendoitava pulloon, joka sisältää yhden litran tislattua vettä.
Sen jälkeen kun seoksen on annettu levätä 5 minuuttia, vie pullo lämmönlähteeseen sekoittaen voimakkaasti ja jatkuvasti, kunnes se kiehuu ja liukenee kokonaan.
Seuraavaksi jo liuennut elatusaine on steriloitava autoklaavin avulla 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.
Ajan lopussa se poistetaan autoklaavista ja jätetään seisomaan hetkeksi. Sitten vielä lämpimänä (45-50 ° C), jokaiseen steriiliin Petri-maljaan tarjotaan 15-20 ml agaria. Väliaineen tulisi olla lakmusininen.
Tarjoamisen jälkeen levyt jätetään hieman peittämättömiksi, kunnes agar jäähtyy hieman. Sitten ne peitetään ja niiden annetaan jähmettyä kokonaan. Myöhemmin ne järjestetään käänteisiin levypidikkeisiin ja säilytetään jääkaapissa (8 ° C) käyttöön asti.
Tämä menettely suoritetaan mieluummin laminaarivirtauskaapissa tai Bunsen-polttimen edessä saastumisen välttämiseksi.
On tärkeätä pitää mielessä, että jokainen liikerakennus ilmoittaa punnittavan määrän elatusaineen valmistamiseksi.
Elatusaineen lopullisen pH: n on oltava 7,2 ± 0,2
Sovellukset
Tätä väliainetta käytetään virtsaan ja ulosteisiin tai minkä tahansa tyyppiseen kliiniseen näytteeseen, etenkin jos epäillään, että esiintyy epämiellyttäviä gramnegatiivisia baciileja, kuten Enterobacteriaceae-perheeseen kuuluvat bakteerit, jotka kasvavat erittäin hyvin tällä väliaineella.
Shigella- ja Salmonella-sukujen enteropatogeeniset bakteerit erottuvat värittöminä tai hiukan meripihkan värisinä pesäkkeinä.
Muita ei-laktoosia fermentoivia bakteereja, kuten muun muassa Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, kasvaa.
Samoin tämä väliaine on erittäin hyödyllinen ruoan ja veden mikrobiologisessa analysoinnissa, koska se on ihanteellinen täydellisessä vahvistusvaiheessa koliformien määrittämisessä, toisin sanoen vahvistaakseen E. colin esiintymistä sameaisissa EY-liemeissä, todennäköisimmästä numerotekniikasta (MPN).
QA
Varmistaaksesi, että juuri valmistettu kasvatusliuos toimii hyvin, voidaan kontrollikannot istuttaa tarkkaillakseen pesäkkeiden ominaisuuksia ja varmistamaan, että ne antavat odotetusti.
Tätä varten voidaan käyttää ATCC-kantoja tai hyvin tunnistettuja E. colin, Enterobacter aerogenesin, Klebsiella sp: n, Salmonella typhimuriumin, Shigella flexnerin, Pseudomonas aeruginosa -kantoja ja joitain gram-positiivisia bakteereja, kuten S. aureus.
E. colin odotetaan tuottavan hyvin kehittyneitä sini-mustia pesäkkeitä vihreällä metallisella kiillolla. Enterobacter aerogenesin ja Klebsiella sp: n pitäisi antaa hyvin kehittyneet sinertävän mustan limakalvon pesäkkeet.
Toisaalta Salmonella typhimurium ja Shigella flexneri -bakteerien on kehitettävä suuria pesäkkeitä, värittömiä tai vähäisen meripihkanvärisiä.
Lopuksi suvun Pseudomonas aeruginosa kasvaa värittöminä epäsäännöllisen kokoisina pesäkkeinä, kun taas gram-positiivisia bakteereja tulisi estää kokonaan tai kasvaa harvoin hyvin pienten pesäkkeiden kanssa.
Lopulliset ajatukset
Joskus sterilointi aiheuttaa metyleenisinisen vähentymisen, jolloin väri on keskipitkä oranssi. Metyleenisinisen hapettamiseksi ja purppuran värin saamiseksi takaisin se on sekoitettava varovasti, kunnes väri on palautunut.
Lisäksi steriloinnin jälkeen väriaine voi saostua, joten se tulisi sekoittaa hyvin ennen Petrimaljojen tarjoamista.
Viitteet
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ja Velázquez O. 2009. Elintarvikkeiden mikrobiologisen analyysin tekniikat. 2. toim. Kemian tiedekunta, UNAM. Meksiko.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Perun siipikarjatilojen broilerin kanoista eristettyjen potentiaalisesti patogeenisten Escherichia coli -kantojen karakterisointi ja jakautuminen. Rev. vet. Peru 2012 23 (2): 209 - 219. Saatavana osoitteessa: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA eosiini ja metyleensiniset agarit. 2010. Saatavana osoitteessa: condalab.com
- Britannia Laboratories. Levine EMB (eosiinilla ja metyleenisinisellä) 2011. Saatavissa osoitteessa: britanialab.com
- BD Laboratories. BD EMB-agar (eosiinimetyleenisininen agari), modifioitu. 2013.Saatavilla osoitteessa: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, Toimitus Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA