MACCONKEY-AGAR: PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2025

MacConkey-agar on kiinteä alusta, joka mahdollistaa yksinomainen eristäminen gram-negatiivisia bakteereita vastaan. Tästä syystä se on selektiivinen väliaine ja mahdollistaa myös erottamisen laktoosia fermentoivasta ja ei-fermentoivasta bacillista, mikä tekee siitä differentiaalisen väliaineen. Se on yksi mikrobiologian laboratoriossa yleisimmin käytetyistä elatusaineista.

Tätä väliainetta käytetään pääasiassa Enterobacteriaceae-sukuun kuuluvien gramnegatiivisten bakteerien, mukaan lukien opportunistiset ja enteropatogeeniset lajit, eristämiseen.

MacConkey-agar, johon oli siemennetty kahden tyyppisiä bakteereja. Vasemmanpuoleiset laktoosia fermentoivat pesäkkeet, oikean puolen laktoosia fermentoivat pesäkkeet.

Sitä voidaan käyttää myös eristämään muut maha-suolikanavassa elävät enteeriset bakteerit, jotka eivät kuulu muun muassa Enterobacteriaceae-bakteereihin, kuten Aeromonas sp, Plesiomonas sp.

Lopuksi se voi eristää muut glukoosia fermentoimattomat gramnegatiiviset bakteerit, joita löytyy ympäristöstä, vedestä tai maaperästä, mutta jotka voivat joskus olla opportunistisia taudinaiheuttajia, kuten Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia.

Perusta

MacConkey-agar

Tämän välineen perusta voidaan selittää sen komponenttien kuvauksella, koska jokaisella niistä on tarkoitus, joka määrittelee sen ominaisuuden.

Sappissuolat ja kristalli violetti

Tässä mielessä MacConkey-agarilla on monimutkainen koostumus. Ensinnäkin se sisältää sappisuoloja ja kristallivioletteja.

Nämä elementit ovat vastuussa grampositiivisten bakteerien ja joidenkin herkullisten gramnegatiivisten bakteerien kasvun estämisestä. Se puolestaan ​​suosii gramnegatiivisten bacillien kehitystä, joihin nämä aineet eivät vaikuta. Siksi se on valikoiva väline.

Sen sanotaan olevan hiukan selektiivinen verrattuna muihin väliaineisiin, jotka myös estävät gram-positiivisten bakteerien ja myös useimpien gram-negatiivisten bakteerien kasvua.

Peptonit, polypektonit ja laktoosi

Se sisältää aineita, jotka toimittavat tarvittavat ravintoaineet tässä ympäristössä kehittyville mikro-organismeille, kuten peptoneja, polypektoneja ja laktoosia.

Laktoosi on keskeinen kohta väliaineessa, joka on differentiaalinen väliaine, koska mikro-organismit, joilla on kyky fermentoida laktoosia, kehittävät vahvoja vaaleanpunaisia ​​pesäkkeitä.

Jotkut bakteerit voivat käydä laktoosia hitaasti tai heikosti, kehittämällä vaaleanpunaisia ​​pesäkkeitä ja pysyä laktoosipositiivisina.

Ne, jotka eivät käy laktoosia, käyttävät energianlähteenä peptoneja, jotka tuottavat ammoniakkia, alkaloivat väliainetta. Tästä syystä lähtöiset pesäkkeet ovat värittömiä tai läpinäkyviä.

PH-ilmaisin

Värimuutos saavutetaan toisella välttämättömällä yhdisteellä, joka MacConkey-agarilla on. Tämä yhdiste on pH-indikaattori, joka tässä tapauksessa on neutraali punainen.

Laktoosin käyminen tuottaa sekoitettuja happoja. Ne hapottavat väliainetta pH-arvoon alle 6,8.

Tämä saa pH-osoittimen kääntymään kohti syvää vaaleanpunaista sävyä. Värin voimakkuus voi vaihdella lopullisesta pH: sta riippuen.

Tislattu vesi, natriumkloridi ja agar

Toisaalta se sisältää tislattua vettä ja natriumkloridia, jotka antavat keskipitkän nesteytyksen ja osmoottisen tasapainon. Lopuksi väliaine sisältää agaria, joka on emäs, joka tarjoaa kiinteän väliaineen konsistenssin.

Valmistetun MacConkey-agar-elatusaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,1 ± 0,2.

Valmistautuminen

Yhdelle litralle MacConkey-agaria punnitaan 50 g kuivattua väliainetta, asetetaan sitten pulloon ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä. 10 minuutin seisotuksen jälkeen se lämmitetään sekoittaen jatkuvasti, kunnes kiehuu 1 minuutti.

Kolvi asetetaan sitten autoklaaviin ja steriloidaan 121 ° C: ssa 20 minuutin ajan. Ajan lopussa se poistetaan autoklaavista ja annetaan jäähtyä 45 ° C: n lämpötilaan, jotta se voidaan myöhemmin tarjoilla steriileissä Petri-astioissa laminaarivirtauskuvun sisällä tai Bunsen-polttimen edessä.

Annetaan jähmettyä ja varastoidaan käännetyssä levypidikkeessä ja jäähdytetään jääkaapissa 2 - 8 ° C: ssa käyttöön asti.

MacConkey-agar-valmisteen saamiseksi, joka estää Proteus-suvun tuottamaa hierovaa vaikutusta, käytetään vähän suolaa sisältävää MacConkey-agaria.

Tavanomaisen MacConkey-agarin käyttö

MacConkey Agar sisältyy kaikkiin viljelyalustussarjoihin, jotka on järjestetty laboratoriossa vastaanotettujen kliinisten näytteiden kylvämiseen. Se on hyödyllinen myös elintarvikkeiden mikrobiologiassa ja ympäristömikrobiologiassa.

Tässä väliaineessa kasvavat gramnegatiivisten tankojen lajit ilmaisevat fenotyyppisiä ominaisuuksia, jotka auttavat tekemään oletettavan diagnoosin kyseisistä lajeista. Esimerkiksi pesäkkeiden koko, väri, konsistenssi ja haju ovat joitain ominaisuuksia, joita voidaan ohjata.

Tässä väliaineessa Escherichia coli, Klebsiella sp ja Enterobacter sp -lajit tuottavat voimakkaita vaaleanpunaisia ​​pesäkkeitä, joita ympäröi saostunut sappi.

Bakteerit, kuten Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp ja Hafnia sp, saattavat näyttää värittömiltä 24 tunnin kuluttua tai vaaleanpunaisilta 24-48 tunnissa.

Samoin suvut Proteus, Edwadsiella, Salmonella ja Shigella tuottavat värittömiä tai läpinäkyviä pesäkkeitä.

Muut MacConkey-agar-variantit

On myös muita MacConkey Agar -variantteja, joilla on erityiset tarkoitukset. Ne mainitaan alla:

MacConkey-agar sorbitolilla

Tämä väliaine suunniteltiin erottamaan enteropatogeeninen kanta (enterohemorraaginen Escherichia coli O157: H7) muista Escherichia coli -kannoista.

Tämä väliaine vaihtaa hiilihydraattilaktoosin sorbitoliksi. Enterohemorraagiset E. coli -kannat O157: H7 eroavat muista, koska ne eivät fermentoi sorbitolia ja siksi saadaan läpinäkyviä pesäkkeitä, kun taas loput E. coli -kannoista fermentoivat sorbitolia ja pesäkkeet ovat voimakkaasti vaaleanpunaisia.

MacConkey-agar ilman kristallivioletteja eikä suolaa

Tämä agar eroaa suuresti klassisesta MacConkey-agarista, koska siinä ei ole violetteja kiteitä ja gram-positiiviset bakteerit voivat kasvaa.

Toisaalta suolan puuttuminen estää parvien muodostumisen agarille, jota tuottavat jotkin suolistossa esiintyvät bakteerit, kuten Proteus-suvun bakteerit, ja helpottaa siten kaikkien läsnä olevien bakteerien, myös gram-positiivisten bakteerien, eristämistä.

MacConkey-agar kefoperatsonin kanssa

Tämä MacConkey-agar-variantti suunniteltiin alun perin eristämään Laribacter hongkongensis, ja sen todettiin myöhemmin olevan käyttökelpoinen Arcobacter butzleri -eristeen eristämiseen. Molemmat ovat hiukan kaarevia gram-negatiivisia sauvoja, jotka kestävät kefoperatsonia.

Nämä bakteerit on äskettäin liitetty aiheuttamaan gastroenteriittiä ja hankkimaan ripulia aasialaisissa ja eurooppalaisissa yksilöissä, jotka ovat nousseet kahteen voimakkaaseen esiintyvään patogeeniin.

Antibiootti sallii estää mukana tulevan maha-suolikanavan kasvistoa, mikä suosii näiden bakteerien kehitystä estäen niitä jäämästä huomaamatta, koska niiden kasvuun tarvitaan 72 tuntia.

MacConkey-agar, valmistettu merivedellä, tilavuus / tilavuus 10%

Tämä variantti on hyödyllinen arvioitaessa bakteeri-eläinten terveysindikaattoreita ulosteen saastumisesta, mukaan lukien kokonaiskolibakteerit ja fekaaliset kolibakteerit virkistäväisissä suolavesissä (rannat ja lahdet).

Cortez ym. Vuonna 2013 osoittivat, että tällä tavalla valmistettu väliaine lisää merkittävästi näiden mikro-organismien talteenottoa suolaliuoksessa verrattuna MacConkey-agarin käyttöön, joka on valmistettu tislatulla vedellä.

Tämä johtuu tosiasiasta, että modifioitu väliaine stimuloi bakteerien kasvua, jotka ovat fysiologisesti latenssitilassa "elinkykyisiä, mutta ei viljeltyjä", joten niitä ei voida palauttaa tavanomaisissa väliaineissa.

Viitteet

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et ai. Kefoperatsoni-MacConkey-agarin käyttö Laribacter hongkongensiksen selektiiviseen eristämiseen. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. MacConkey-agar. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 4. huhtikuuta 2018, 18:16 UTC. 29. joulukuuta 2018, 15:22 fi.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, Toimitus Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Merivedellä valmistetun elatusaineen vaikutus terveysindikaattoreihin kylpylöiden merivedessä Chichirivichessä, Falcónin osavaltiossa, Venezuelassa. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Käytännön kliininen mikrobiologia. Cadizin yliopisto, 2. painos. UCA: n julkaisupalvelu.