BIUREATTI: PERUSTEET, REAGENSSIT, MENETELMÄ, KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2026

Biureetin on reagenssi, jota käytetään proteiinin määrittämiseksi pitkäketjuisten ja lyhyt ketju. Sitä käytetään erityisesti analyyttisen kemian ja virtsa-analyysien alalla kokonaisproteiinipitoisuuksien tutkimiseen seerumissa, plasmassa ja virtsassa.

Proteiiniarvot voivat nousta tai laskea tietyissä patologioissa. Hypoproteinemia-oireita esiintyy yleensä potilailla, joilla on munuaissairaus, aliravittuja potilaita ja potilaita, joilla on kroonisia infektioita.

Biuret-reaktiossa muodostuneen kompleksin kemiallinen rakenne Positiivinen Biuret-testi. Lähde: Yikrazuul / flickr

Vaikka hyperproteinemiaa havaitaan muun muassa sellaisissa patologioissa kuin multippeli myelooma, systeeminen lupus erythematosus, bakteeri-endokardiitti, bakteeriperäinen meningiitti, Waldenstromin makroglobulinemia.

Toisaalta proteiinin esiintyminen virtsassa johtuu albumiinin suodatuksesta munuaisissa. Tämä on patologinen käyttäytyminen, jota on tutkittava.

Tässä mielessä Biuret on erittäin käyttökelpoinen, koska sen avulla voidaan kvantitoida proteiinien läsnäolo seerumissa, plasmassa ja virtsassa monien muiden näytteiden joukossa.

Jopa Biurettia voidaan käyttää tutkimaan proteiinien läsnäoloa ja pitoisuutta huonosti tutkituissa näytteissä tai tuntemattoman koostumuksen näytteissä. Siksi sitä käytetään laajalti tutkimusalueella.

Biuret-testi perustuu peptidisidosten havaitsemiseen. Testi suoritetaan emäksisessä väliaineessa. Näytteen on sisällettävä vähintään kaksi peptidisidosta violetti-violetin kompleksin muodostumiseksi. Kompleksi muodostuu sidosten ja kupari-ionin liitoksesta.

Perusta

Biuretin reagenssi koostuu kaliumhydroksidista, kuparisulfaatista ja natrium- ja kaliumtartraatista. Natriumhydroksidia käytetään elatusaineen alkalointiin, koska tämä olosuhde on välttämätön reaktion tapahtumiseksi.

Aineet, jotka reagoivat proteiinien kanssa, on kuparisulfaatti, kun taas natriumtartraatin tehtävänä on estää kuparihydroksidin muodostumista, joka taipumus saostua ja häiritsee reaktiota.

Jos näytteestä löytyy aineita, joilla on peptidisidoksia (polypeptidejä tai proteiineja), testi on positiivinen.

Reaktio tulkitaan positiiviseksi, kun liuos muuttuu violetiksi. Väri saadaan muodostamalla kompleksi ainakin kahden peptidisidoksen, jolla on CO-NH-ryhmä, ja kuparikationien välillä.

Violetti kompleksi voidaan muodostaa kahdella tavalla: yksi johtuu protonien menetyksestä amidiryhmistä, jotka sitoutuvat metalliin (depronointi), ja toisella, vapaiden ja sitoutuvien happi- ja typpielektronien liitoksella. kuparilla.

Tämä reaktio voi vaihdella intensiteetiltään ja väriltään proteiinityypistä riippuen.

Testi voidaan suorittaa laadullisesti tai kvantitatiivisesti. Laadullisessa muodossa se ilmoitetaan positiiviseksi tai negatiiviseksi. Kvantitatiivisessa muodossa konsentraatio voidaan mitata spektrofotometrisella menetelmällä.

Reaktio luetaan välillä 540 - 560 nm. Värin voimakkuus on suoraan verrannollinen peptidisidosten pitoisuuteen näytteessä.

reagenssit

-20% natriumhydroksidia (NaOH)

-Cupric sulfaattipentahydraattia 1% (CuSO ₄ 5H ₂ O)

-Mixed natrium ja kalium tartraattitetrahydraattia (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Biureattireagenssin stabiilisuus

-Sitä on pidettävä jääkaapissa.

Prosessi

Tekniikka

- Aseta 100 µl näytettä tai standardia analysoitavaksi koeputkeen.

- Lisää 2 ml natriumhydroksidia.

-Miksi hyvin.

- Lisää 5 ml Biuret-reagenssia.

- Sekoitetaan ja annetaan levätä 25 minuutin ajan huoneenlämmössä, peitetään ja suojataan valolta.

- Tarkkaile värin muodostumista vai ei ja mittaa spektrofotometrisesti.

Kalibrointikäyrä

Naudan seerumialbumiinia voidaan käyttää standardina kalibrointikäyrän suorittamiseen. Siitä valmistetaan erilaisia ​​konsentraatioita. Esimerkiksi 25, 50, 75, 100, 125 ja 150%.

Reaktio suoritetaan kaikilla näillä tunnetuilla konsentraatioilla ja absorbanssi luetaan aallonpituudella 540 nm. Tunnettujen pitoisuuksien ja absorbanssimäärien tietojen perusteella kalibrointikäyrä tehdään.

Jokaiseen käsiteltyjen näytteiden määritykseen tai erään on suositeltavaa asentaa standardi. Naudan seerumialbumiinia 0,1 - 2 mg / ml voidaan käyttää kalibrointistandardina.

Mittaukset suoritetaan spektrofotometrillä aallonpituudella 540 nm.

Lineaarisuus saavutetaan pitoisuuteen 12 g / dl.

häiriö

Aineet, jotka häiritsevät Biuret-testiä

Vaikka se ei ole kovin yleistä, on huomattava, että jotkut aineet voivat häiritä tämän testin suorittamista. Esimerkiksi ammoniakin läsnäolo voi estää värin muodostumista.

Samoin muut aineet, kuten tietyt pigmentit, voisivat absorboida samalla aallonpituudella.

Toisaalta, häiriöitä voi syntyä, kun muu aine kuin peptidisidos muodostaa kompleksin kuparisuolan kanssa. Esimerkki: hiilihydraatteja ja tiettyjä lipidejä.

Jos analysoitavassa näytteessä on jonkin tyyppisiä saostumia, se on suodatettava tai sentrifugoitava ennen testin asettamista.

Aineet, jotka eivät häiritse Biuret-testiä

Testiin ei vaikuta seuraavien esiintyminen:

-Bilirubiini pitoisuuteen 20 mg / dl.

-Hemoglobiini pitoisuuteen 750 mg / dl.

-Dekstrani konsentraatioon 30 g / l.

-Triglyseridit pitoisuuteen 4000 mg / dl saakka.

Etu

-Se on yksinkertainen tapa suorittaa.

- Se on taloudellinen testi.

- Sillä on korkea spesifisyys proteiineille.

- Pieni häiriö.

haitat

Sillä on heikko herkkyys pienten proteiinimäärien havaitsemiseksi. Fuentesin ym. Tekemä työ vahvistaa, että Biuret-testimenetelmässä havaitsemisraja on 1 mg / ml proteiinia ja määritysraja 3 mg / ml.

Muut Amazonian yliopistossa tehdyt tutkimukset kuitenkin ilmoittavat paljon alhaisemmat arvot. Tutkimuksen ilmoittama havaitsemisraja on 0,020 mg / ml ja kvantifiointiraja on 1,33 mg / ml.

Sovellukset

Biuret-reagenssia tai testiä käytetään proteiinien määrittämiseen kliinisissä ja ei-kliinisissä näytteissä rutiini- ja tutkimuslaboratorioissa.

Patologiat, jotka esiintyvät lisääntyessä tai vähentyessä

Monissa patologioissa on tärkeää määrittää kokonaisproteiinien pitoisuus kliinisissä näytteissä, jotka voivat olla kohonneet tai vähentyneet.

He ovat koholla:

-Moni myelooma, -Järjestelmän lupus erythematosus, -Bakteerinen endokardiitti, -Bakteerinen meningiitti, Waldenstromin makroglobulinemia muun muassa.

Se vähenee:

-Munuaisten vajaatoiminta, - ihmiset, joilla on vakava aliravitsemusaste, -Potilaat, joilla on muun muassa kroonisia infektioita.

Kliiniset näytteet

Yleisimmät kliiniset näytteet ovat seerumi, plasma ja virtsa. Seerumin tai plasman proteiinien normaaliarvo on 6,0-8,8 g / dl.

Proteiinipitoisuus virtsassa aikuisilla ei ylitä 150 mg / 24 tuntia.

Virtsan proteiinin / virtsan kreatiniinisuhteen normaaliarvo

Vauvat: <0,50 mg

2-vuotiaat ja vanhemmat lapset: hakemisto: 0,20 mg

Aikuiset: <0,2 mg

Ei-kliiniset näytteet

Biuret-reaktiota voidaan käyttää monentyyppisissä ei-kliinisissä näytteissä, kuten maitotuotteissa, antivenomissa tai muissa tuntemattomissa aineissa, joiden haluat tutkia proteiinien esiintymistä.

Viitteet

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Mangrove-osterin (Crassostrearizophorae) nesteuutteiden fysikaalis-kemialliset ominaisuudet ja proteiinipitoisuus. Cuban Journal of Chemistry, 26 (1), 66 - 74. Haettu 26. kesäkuuta 2019, osoitteesta http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Mangosiementen (Mangifera indica L.) mantelin toiminnallinen karakterisointi Revista Ciencia en Desarrollo. 2015; 6 (1): 67 - 75
3. "Biureetti." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 19. kesäkuuta 2019, 16:37 UTC. 26. kesäkuuta 2019, 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. Biuret-menetelmän standardointi kokonaisproteiinien kvantitoimiseksi moniarvoisessa antiotrooppisessa seerumissa, joka on tuotettu INS: n kansallisessa biologisten tuotteiden keskuksessa. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Saatavana osoitteessa repositorio.ins.gob.pe
5. Viinilaitokset. Proteiinien kokonaismäärä. Kolorimetrinen menetelmä kokonaisproteiinien määrittämiseksi seerumissa ja plasmassa. Saatavana osoitteessa: wiener-lab.com.ar