FOSFAATTIPUSKURI (PBS): PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2026

Fosfaattipuskuri, fosfaattipuskuroitu suolaliuos tai BPS on puskuri isotoninen, jonka tehtävänä on jotta pH: n ylläpitämiseen ja osmoottinen paine kuin lähellä luonnollista biologisessa ympäristössä (fysiologinen). Lyhenne PBS tarkoittaa fosfaattipuskuroitua suolaliuosta.

PH ja osmolaarisuus ovat kaksi erittäin tärkeää näkökohtaa, joita on valvottava tietyissä laboratoriokäytännöissä. PH: n tapauksessa on välttämätöntä, että sitä hallitaan, etenkin biokemiallisissa reaktioissa, koska ne voivat vaihdella tai niitä ei voida suorittaa, jos reagenssien pH on sopimaton.

PBS-fosfaattipuskuroitu suolaliuos kahdella eri pH: lla. Lähde: Pixinio.com

Samaan aikaan osmolaarisuuden hallinta on välttämätöntä etenkin työskennellessä elävien solujen kanssa, koska solujen plasmamembraanit reagoivat liuenneiden pitoisuuksien mukaan, joissa niitä löytyy.

Jos solut siirretään hypertoniseen väliaineeseen, niistä tulee dehydratoituneita, koska vesigradientti kulkee sille puolelle, missä liuenneiden aineiden pitoisuus on korkeampi. Jos toisaalta solut sijoitetaan hypotoniseen väliaineeseen, solut absorboivat nestettä, kunnes ne hajoavat.

Siksi PBS-puskuria käytetään laboratorioprotokolliin, jotka vaativat solujen ylläpitämistä in vitro, tällä tavalla solut eivät vaurioidu.

PBS koostuu suolojen, kuten natriumkloridin, natriumfosfaatin, kaliumkloridin ja kaliumfosfaatin, yhdistelmästä. PBS: n koostumus voi vaihdella protokollasta riippuen.

Perusta

Periaatteessa fosfaattipuskurin tehtävä on ylläpitää vakio fysiologinen pH yhdessä elektrolyyttipitoisuuden kanssa, joka on samanlainen kuin kehossa.

Tässä ympäristössä solut pystyvät pysymään vakaina, koska fysiologisia olosuhteita simuloidaan niin paljon kuin mahdollista.

Muita yhdisteitä voidaan lisätä alkuperäiseen PBS-formulaatioon tarvittaessa, esimerkiksi EDTA: n lisääminen puskuriin on hyödyllistä punasolujen pesemiseen risti-yhteensopimattomuustestissä.

EDTA estää seerumissa olevan komplementin C1 jakeen pilkkoutumisen ja hajoamisen punasoluiksi, ts. Se välttää väärät yhteensopimattomuustulokset. Lisäksi EDTA auttaa hajottamaan soluja.

Valmistautuminen

PBS-fosfaattipuskuroidun suolaliuoksen valmistuksessa punnittavien suolojen määrä riippuu valmistettavasta määrästä:

-Fosfaattipuskuroitu suolaliuosvarastoliuos (10x PBS)

Yhdelle litralle liuosta:

Punnita:

80,6 g NaCl,

2,2 g KCl, 11,5 g Na ₂ HPO ₄, 2,0 g KH ₂ HPO ₄

Valmistustekniikka

Aseta raskas suolat dekantterilasiin, lisää tarpeeksi vettä (80%) ja sekoita sekoituslevyllä magneettitangolla, kunnes suolat ovat liuenneet.

PBS: n valmistus sekoituslevyllä, jossa on magneettinen tanko. Lähde: Käyttäjä: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Suodata liukenemattomien hiukkasten poistamiseksi. Käytä suodattimia, joiden huokoset ovat 0,45 um. Autoklaavi ja levitä aseptisesti laminaarivirtauskupuun kansiin tarkoitettuihin lasipurkkeihin.

10X-liuos (väkevöity) ei säädä pH: ta. Säätö tehdään laimennettuna 1 x PBS-puskuripitoisuuteen (laimennus 1:10).

-Puskurifosfaattiliuos (1X PBS)

1X PBS voidaan valmistaa suoraan, punnitsemalla vastaavat määrät kutakin suolaa, tai se voidaan valmistaa laimentamalla kantaliuos (1:10) steriilillä tislatulla vedellä.

- Valmistaksesi yhden litran 1X PBS-fosfaattipuskuroitua suolaliuosta, punnitse:

8,06 g NaCl, 0,22 g KCl, 1,15 g Na ₂ HPO ₄, 0,20 g KH ₂ HPO ₄

Valmistustekniikka

Jatka konsentroidun liuoksen ohjeiden mukaisesti. Myöhemmin pH on säädettävä. Mittaa pH tätä varten ja tuloksesta riippuen käytä happoa (HCl) tai emästä (NaOH) alentamaan tai nostamaan pH: ta tarvittaessa, kunnes se on 7,4.

Happo tai emäs lisätään tipoittain, seuraten samalla liuoksen pH-arvoa pH-mittarilla. Suodata, autoklaavoi ja jaa aseptisesti kartiomaisiin putkiin tai purkkeihin tarpeen mukaan.

-Valmistaaksesi 1X PBS 10X-varastoliuoksesta:

Laimenna 1:10. Esimerkiksi 1 litran 1X PBS: n valmistamiseksi mittaa 100 ml kantaliuosta ja lisää 700 ml steriiliä tislattua vettä. Säädä pH ja täytä vesimäärä enintään 1000 ml: aan.

Valmistettu PBS-puskuri on väritöntä ja kirkasta.

Päivittäistä PBS: ää voidaan säilyttää huoneenlämmössä ja loput jääkaapissa.

Liuokset pH: n säätämiseen

HCl:

100 ml: lla 1-molaarista HCL: a (suolahappoa).

Mittaa 91 ml tislattua vettä ja aseta se 250 ml: n dekantterilasiin.

Mittaa 8,62 ml väkevää HCl: ää ja lisää se hitaasti vettä sisältävään dekantterilasiin (älä koskaan tee sitä päinvastoin). Suorita tarvittavat bioturvallisuustoimenpiteet käsitellessäsi vahvoja happoja (erittäin syövyttäviä aineita).

Sekoita 5 minuutin ajan mieluiten sekoituslevyllä, jossa on magneettinen tanko lasin sisällä. Siirtää 100 ml: n pulloon ja täytetään 100 ml: ksi tislatulla H ₂: lla

NaOH

100 ml: lle 10-molaarista NaOH: ta (natriumhydroksidia).

Mittaa 40 ml tislattua vettä ja aseta se 250 ml: n dekantterilasiin. Mittaa 40 g NaOH ja lisää veteen. Sekoita sekoituslevyllä ja magneettitangolla lasin sisällä.

Siirretään 100 ml: n mittapulloon ja täytetään merkkiin tislatulla vedellä. Noudata bioturvallisuusmääräyksiä, koska tämä reaktio on eksoterminen (se vapauttaa energiaa lämmön muodossa).

Jos haluat valmistaa muita määriä suolaliuosfosfaattiliuosta, tutustu seuraavaan taulukkoon:

Lähde: «Virus- ja ihmisgenomian laboratorio, UASLP: n lääketieteellinen korkeakoulu»

Sovellukset

Sitä käytetään pääasiassa solubiologian, immunologian, immunohistokemian, bakteriologian, virologian ja tutkimuslaboratorioissa.

Se on ihanteellinen solujen pesemiseen sentrifugoimalla (punaiset verisolut), solujen yksikerroksisilla pesuilla, spektroskooppisilla ellipsometriatekniikoilla, bakteerien biofilmien kvantifioinnissa, virusviljelmien ylläpidossa soluviljelmissä, pesuliuoksena epäsuorassa immunofluoresenssitekniikassa ja tekniikoissa monoklonaalisten vasta-aineiden karakterisoimiseksi.

Sitä käytetään myös solujen tai kudosten kuljettamiseen, laimennusaineena solujen laskemiseen, soluentsyymien (trypsiini) valmistukseen, laimennusaineeksi biomolekyylien kuivatusmenetelmään ja muiden reagenssien valmistukseen.

Toisaalta, Martin ym., Vuonna 2006, osoittivat, että PBS on hyödyllinen rikostekniikan laboratorioissa, erityisesti sperman talteenottamisessa emätinrasvoista tai emättimen solujen palauttamisessa siittimen tahroista. Tällä tavoin voidaan todeta, onko ollut sukupuolisuhteita.

rajoitukset

-Jotkut PBS-puskurit sisältävät säilöntäaineena natriumatsidia. Tämä yhdiste voi tuottaa räjähtäviä aineita joutuessaan kosketuksiin lyijyn tai kuparin kanssa. Tästä syystä erityistä varovaisuutta on noudatettava hävitettäessä tätä reagenssia viemäriin. Jos se heitetään pois tällä tavalla, on lisättävä runsaasti vettä sen laimentamiseksi niin paljon kuin mahdollista.

-Sinkkiä ei pitäisi lisätä fosfaattipuskuriin, koska se aiheuttaa joidenkin suolojen saostumisen.

-Wangen ym., Vuonna 2018 totesi, että PBS: n käyttö ei sovellu ääreisverestä uutettujen primaaristen akuutin myeloidileukemian (AML) solujen pesemiseen, koska monet solut menetetään hajottamalla materiaalin vähentyessä huomattavasti proteiinia.

Siksi he päättivät, että primaarisia AML-soluja ei pidä pestä PBS: llä sen jälkeen, kun ne on varastoitu nestemäiseen typpeen.

Viitteet

1. Coll. J. (1993). Diagnostiset tekniikat virologiassa. Ed Díaz de Santos. 360 s
2. Rodríguez M, Ortiz T. Soluviljelmä. Mediumin muutos. Normaalin ja patologisen sytologian ja histologian laitos Sevillan yliopisto. Saatavana osoitteessa personal.us.es
3. Fosfaattipuskuroidun suolaliuoksen (PBS) valmistus. (2008). Standardinmukaiset toimintatavat (SOP) Ihmisen ja virusgenomian laboratorio UASLP Medical School. Saatavana osoitteessa: genomica.uaslp.mx
4. "Fosfaattipuskurisuolaliuos." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 3. huhtikuuta 2019, 19:36 UTC. 13. huhtikuuta 2019, 02:57 fi.wikipedia.org.
5. Pietrasanta L, Von-Bilderling C. Molekyylifysiikan aiheet. Saatavana osoitteessa: users.df.uba.ar
6. Rediar. Manuaalinen. PBS + EDTA. Saatavana osoitteessa felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurk K, Lucy D, Scrimger DG. Fosfaattipuskuroidun suolaliuoksen käyttö solujen ja siittiöiden talteenottoon tampoista. Sci Justice. 2006; 46 (3): 179 - 84. Saatavana: ncbi.nlm.nih.gov
8. Wangen R, Aasebø E, Trentani A, et ai. Säilöntämenetelmä ja fosfaattipuskuroitu suolaliuospesu vaikuttavat akuutin myeloidileukemian proteiiniin. Int. J Mol Sci. 2018; 19 (1): 296. Saatavana: ncbi.nlm.nih.gov
9. Martínez R, Gragera R. (2008). Histokemian teoreettiset ja käytännölliset perusteet. Tieteellisten tutkimusten ylin neuvosto. Madrid. Saatavana osoitteessa books.google.co.ve