NEUBAUER-KAMMIO: HISTORIA, OMINAISUUDET, KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

Neubauer kammio, hematometer tai hemosytometria, on laboratorio väline, joka koostuu erityisen paksu lasilevy. Tätä kameraa käytetään tiettyjen solutyyppien, kuten punasolujen, valkosolujen ja verihiutaleiden, laskemiseen, vaikka sitä voidaan käyttää itiöiden, siittiöiden, loisten jne. Laskemiseen.

Sillä on joitain hyvin erikoisia ominaisuuksia, koska se koostuu 3 vyöhykkeestä, keskeinen laskentavyöhykkeestä ja kahdesta tukialueesta. Jokaisessa kammiossa on kaksi laskentavyöhykettä tai poikkitie, yksi ylä- ja alaosassa.

Neubauer-kammio. Lähde: SantiBadia. Muokattu kuva.

Niillä on useita jakoja ristikkomuodossa. Laskenta-alueet ovat keskikokoiset neliöt, jotka löytyvät kummankin ristikön 4 kulmasta plus keskimmäinen neliö.

Kameran kokoaminen on tehtävä erittäin huolellisesti, koska kaikki yksityiskohdat vaikuttavat solujen määrään. Voidaan tehdä monia virheitä, mutta jos niitä ilmenee, kamera on purettava, puhdistettava ja koottava uudelleen. Tärkeimmät virheet sisältävät seuraavat:

Kammion ylivuoto tai alitäyttö, annetaan kammion kuivua, yritetään poistaa ylimääräinen neste harsolla, kaadataan kammio kuljetettaessa sitä, täytetään likainen tai märkä kammio, ei sekoiteta laimennusta tai näytettä hyvin. Kaikki nämä virheet johtavat epätodelliseen arvoon.

Historia

Neubauer-kammio on tarkkuusinstrumentti, ja valmistusprosessi käy läpi tiukan laadunvalvonnan. Se luotiin tarkka laskenta hiukkasten tai muodostettu elementtiä mm kohden ³, kuten solujen eri nesteitä. Sen herkkä grafiikka on kaiverrettu timanttikynällä.

Neubauer-kammion ominaisuudet

Koko kammio on normaalin levyn kokoinen, jotta se voidaan sijoittaa mikroskoopin vaiheeseen.

Kammio koostuu kolmesta suorakaiteen keskipinnasta (a, b, c). Alueella “b” sijaitsee R-alue tai laskentavyöhyke, jota kutsutaan myös reticulumiksi. Yksi kameran molemmilta puolilta, erotettu vyöhykkeellä "d".

Neubauer-jaoston graafinen kaavio. Lähde: Hematologisen käytännön opas. Carabobon yliopiston bioanalyysikoulu, Venezuela.

Jokainen rako on kiillotettu alue, joka sisältää kaiverretun laskenta-alueen. Se koostuu neliöstä, jonka pinta-ala on 9 mm ^2, ja se on jaettu sisäisesti 9 neliöön, joiden pinta-ala on 1 mm ². Neljä kulma neliötä jaetaan 16 pienempään neliöön (pinta-ala 0,0625 mm ²).

Nämä ristikot on muodostettu joukosta millimetriviivoja, jotka leikkaavat toisiaan, muodostaen täydellisesti piirretyt ristikot, jotka on rajoitettu määriteltyihin mittauksiin. Nämä viivat on kaiverrettu timanttikärjellä.

Parannettu Neubauer-reticulum. Lähde: Carabobon yliopiston bioanalyysikoulun hematologisen käytännön opas, Venezuela.

Neljä sivua vastaa laskenta-aluetta. Suurin osa soluista (punasolut ja leukosyytit) lasketaan näiltä sivuilta tai kulmista, kun taas verihiutaleet lasketaan keskusalueelta.

Keskialueella on enemmän jakoja, se koostuu 1 mm ^{2: n} neliöstä, joka on jaettu 25 neliöön, joiden pinta-ala on 0,04 mm ². Nämä puolestaan ​​jaetaan 16 ristikkoon, joiden pinta-ala on 0,0025 mm ².

Kuvaus parannetusta Neubauer-reticulumista. a) Kulma neliö, b) keskusaukio, c) keskusaukion mediaanikuva. Lähde: Carabobon yliopiston bioanalyysikoulun hematologisen käytännön opas, Venezuela.

Vyöhykkeet “a” ja “c” toimivat tukena erityisen kannen esineen, nimeltään hematometrinen liuku- tai hematimetrikansi, sijoittamiselle.

Kalvon ja laskentapinnan välinen korkeus on 0,1 mm. Yhteyslaatikoiden pinta-alan mittaukset sekä kammion korkeus ja näytteen laimennus ovat tietoja, joita tarvitaan lopullisten laskelmien tekemiseen.

Sovellukset

Sitä käytetään solujen laskemiseen. Se on erityisen hyödyllinen hematologia-alueella, koska se mahdollistaa 3 verisolusarjan laskemisen; eli punasolut, valkosolut ja verihiutaleet.

Sitä voidaan kuitenkin käyttää muilla alueilla, esimerkiksi sperman, itiöiden, bakteerien tai muiden tärkeiden esineiden laskemiseen näytteen tyypistä riippuen.

Kuinka käyttää?

näytteen valmistus

Solulaskennan suorittamiseksi se yleensä aloitetaan edellisestä laimennuksesta. Esimerkki: Valkosolujen laskemiseksi valmistetaan 1:20 laimennus Turkin nesteellä. Laimennus sekoitetaan hyvin ennen pipetin lataamista ja Neubauer-kammion asentamista.

Joskus 1:20 laimennus ei riitä laskemiseen. Esimerkiksi potilailla, jotka kärsivät tietyntyyppisistä kroonisista leukemioista. Näissä tapauksissa olisi tehtävä suurempia laimennuksia, kuten 1: 100.

Jos toisaalta määrä on hyvin pieni, kuten vakavissa leukopenioissa, näytteen väkevöimiseksi voidaan tehdä pienempiä laimennuksia. Esimerkki: voit laimentaa 1:10.

Tehdyt muutokset vaikuttavat laskelmiin.

Neubauer-kammion kiinnitys

Neubauer-kammio kootaan asettamalla hematometrinen liuku keskialueelle. Molempien on oltava erittäin puhtaita ja kuivia. Lamellin asettamiseksi se vie reunat ja pudottaa varovasti kameraan.

Tämä täytetään asettamalla Thoma-automaattisen pipetin tai pipetin kärki 35 ° kulmaan lastausvyöhykkeen reunaan. Neste poistuu tasaisesti ja kapillaarisuus täyttää lastausalueen. Tämä tehdään molemmilta puolilta kahden ristin kiinnittämiseksi.

Verkkohihnat eivät saa olla ylikuormitetut, eikä niitä saa evätä nesteestä. Kuorman on oltava tarkka. On tärkeää, että täyttö tapahtuu tasaisesti, toisin sanoen kuplia ei tulisi olla.

Kun kammio on koottu, sen annetaan levätä 2 minuutin ajan, jotta solut saostuvat pohjaan ja niiden visualisointi ja laskeminen on helpompaa.

Lepoajan jälkeen se asennetaan valomikroskoopin tasolle tarkkailua varten. Ensin se tarkennetaan 10X-objektiiviin ja tarvittaessa sitten menee 40X: iin.

Sen visualisoinnin parantamiseksi valon kulkua mikroskoopista vähennetään. Tätä varten lauhdutin lasketaan alas ja kalvo suljetaan hieman.

Laskenta

Valkosolujen tai valkosolujen laskemiseksi on laskettava neljän mediaanin kulma neliön koko pinta ja kunkin reticulumin keskimmäinen neliö.

Laskenta alkaa ruudusta vasemmassa yläkulmassa. Aloitat ensimmäisen rivin ensimmäisestä neliöstä, eli vasemmalta oikealle, kunnes pääset vastakkaiseen päähän.

Siellä siirryt alaspäin ja katsot taaksepäin oikealta vasemmalle, kunnes saavut toiseen päähän, ja niin edelleen, kunkin ruudukon solut lasketaan siksak-muodolla. Kunkin mediaanin neliön 16 ruudukkoa lasketaan.

Solun kahdesti laskemisen välttämiseksi soluja koskevat säännöt, jotka sijaitsevat kunkin ruudukon rajaviivoilla. Vasemman ja ylärivin solut lasketaan ja oikean ja alaosan rivit jätetään huomioimatta.

Manuaalisen solulaskurin on oltava käytettävissä, jotta käyttäjä painaa laitteen näppäintä niin monta kertaa kuin havaittuja soluja on. Laskurin avulla käyttäjä voi laskea tarvitsematta katsoa ylös mikroskooppikentältä. Laskennan lopussa näet laskettujen solujen kokonaismäärän.

laskelmat

Laskelmia varten voit jatkaa useilla tavoilla. Yksi rako voidaan laskea tai molemmat voidaan laskea ja molemmille keskiarvo. Näissä kahdessa tapauksessa laskettiin solut on kerrottava tekijällä, joka tässä tapauksessa olisi 40. Ja siten yhteensä laskennalle per mm ^{3 saadaan}.

Mutta jos nämä kaksi ruudukkoa lasketaan ja keskiarvoa ei lasketa, se on kerrottava eri kertoimella, tässä tapauksessa 20: lla.

- Moninkertaistuskerroin

Näin kertolasku lasketaan.

Laskelmissa otetaan huomioon erilaiset tiedot, mukaan lukien laimennustiitteri, kammion korkeus ja laskettu pinta-ala.

laimennus

Käytetty vakiolaimennus on 1:20 leukosyyttimäärille.

Kammion korkeus

Kammion ja verisolulevyn välinen korkeus on 0,1 mm.

Laskettu alue

Jos lasketaan 5 neliötä 1 mm ^{2: n} alueelta, se tarkoittaa, että kokonaislaskenta-ala on 5 mm ². Nämä tiedot on kerrottava kammion korkeudella, jotta saadaan laskettu kokonaistilavuus. Toisin sanoen 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³.

Kaavat ja laskelmat

Meillä olevien tietojen kanssa sanotaan:

Jos 0,5 mm ^{3 -} on - - lasketaan solujen lukumäärä

1 mm ^{3: ssa} --- siellä on - X soluja

X solujen lukumäärä = (solujen lukumäärä laskettu x 1) / 0,5 mm ³

Mutta myös laimennus on otettava huomioon. Siksi kaava on seuraava:

(solujen lukumäärä laskettu x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Lopuksi, yhteenvetona, solujen lukumäärä laskettiin voidaan kertoa 40. Näin ollen, arvo leukosyyttien kohti mm ^{3 saadaan}.

Jos molemmat hiusristikoiden lasketaan, data laskettujen alue on muuttunut, mikä tässä tapauksessa olisi 10 neliöitä, eli 10 mm ². Ja laskettu kokonaistilavuus on 1 mm3. Kaava olisi seuraava:

(solujen lukumäärä laskettu x 1) x 20/1 mm ³

Siksi tässä tapauksessa kerroinkerroin olisi 20.

virheitä

-Jos kameraa ladattaessa se ylitetään tai ylitetään nesteellä, kameran korkeus vaihtelee. Tämä johtaa siihen, että määrä on suurempi kuin todellinen asia. Jos yrität poistaa ylimääräisen harsolla tai puuvillalla, tämä on valtava virhe. Tämä toimenpide saa solut keskittymään lisäämällä määrää.

-Jos se ladataan huonosti, lukumäärä on pienempi kuin todellinen.

-Jos kamera asennetaan ja annetaan kuivua, sitä ei voi enää laskea, koska se antaa väärät tulokset.

-Jos näytteen laimennusta ei sekoiteta hyvin ennen kammion lataamista, lukemissa on virhevirhe, koska solut eivät jakaudu tasaisesti. Siksi solujen konsentraatio on alhaisempi tai korkeampi riippuen siitä, otetaanko näyte nesteen pinnalta vai vastaavasti putken pohjasta.

-Kuplien esiintyminen vähentää nesteen määrää, jonka on päästävä sisään retikulumiin, häiritsemällä solujen oikeaa visualisointia ja jakautumista. Kaikki tämä vaikuttaa merkittävästi tuloksiin.

- Laskemisen aikana älä katso mikroskoopista ylöspäin, ennen kuin jokainen iso neliö on valmis, jotta et eksy.

- Yksi virheen syy on kameran kallistaminen asennuksen jälkeen. Tästä syystä mikroskoopin astetta on nostettava varovasti.

Suositus

Jos jostain syystä havaitset poikkeavuutta kammion täyttössä, suositellaan purkamaan kyseinen valmiste, puhdista kammio ja koota uudelleen tyhjästä.

Ole erityisen varovainen puhdistaessasi kameraa, jotta älä naarmuta ristikarvoja. Toisaalta, huomaa, että hematometrinen liuku on herkkä ja hauras. Väärä käsittely voi rikkoa sen.

Varmista ennen laskennan aloittamista, että solut ovat hyvin jakautuneet. Solujen jakauma epätasaisesti tapahtuu huonosta näytteen sekoituksesta tai laimentamisesta. Jos näin tapahtuu, kokoonpano on toistettava.

Yksi tapa tietää, ovatko solut jakautuneet hyvin, on vertaamalla kunkin suuren neliön lukumäärää, jokaiselle neliölle laskettujen solujen lukumäärän ei pitäisi olla liioitellen erilainen toisistaan.

-Jos valkosolujen määrä on yli 50 000 mm ^3, on suositeltavaa toistaa lasku tekemällä suurempi laimennus.

-Jos muutat laimennusta, sinun on laskettava kertolasku uudelleen, koska se vaikuttaa kaavaan.

Viitteet

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Sperman pitoisuuden vertailu Maklerin ja Neubauerin kammion avulla. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Saatavana: scielo.
2. Neubauer-kammio. (2018, 27. maaliskuuta). Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. Kuulemispäivämäärä: 04:10, 23. kesäkuuta 2019 osoitteesta es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Vaihtoehtoisen laskentamenetelmän soveltaminen Neubauer-kammiossa Trichomonas vaginalisin pitoisuuden määrittämiseksi. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180 - 8. Saatavana osoitteessa researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Spermogrammin analyysi. Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19 - 20. Saatavana: ve.scielo
5. Carabobon yliopiston bioanalyysikoulun hematologinen käytännöllinen opas. Venezuela, 1998