EC-LIEME: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

EY liemi tai liemi Escherichia coli on selektiivinen nestemäistä kasvualustaa. Tätä väliainetta suositellaan standardimenetelmissä kokonais- ja fekaalisten kolibakteerien laskemiseksi todennäköisimmällä lukumääritysmenetelmällä (MPN) vesi- ja ruuanäytteissä, joissa pääasiallinen tekijä on Escherichia coli.

EC-lieme koostuu tripteiinistä, laktoosista, sappisuoloista, dikaliumfosfaatista, monokaliumfosfaatista, natriumkloridista ja vedestä. Sen kaava on strategisesti suunniteltu edistämään kokonaisten ja fekaalisten kolibakteerien kasvua ja estämään muiden mukana olevien mikro-organismien kehittymistä.

Kuviollinen esitys EC-liemen valmistuksesta. Lähde: Pixabay.com

Escherichia coli -bakteeri on tärkein fekaalinen koliformi, joka esiintyy vierasaineena vedessä ja ravintolähteissä, ja aiheuttaa merkittäviä maha-suolikanavan häiriöitä.

On huomattava, että Escherchia colin serotyyppejä on monia; Niistä voidaan mainita enterohemorraaginen (EHEC), enteroinvasiivinen (EIEC), enteopatogeeninen (EPEC), enterotoksigeeninen (ETEC) ja enteroaggregatiivinen (EAEC).

Tällä välineellä on kyky sallia kaikkien kehittäminen, mutta ilman kykyä erottaa ne toisistaan. Tämä vaatii lisätestausta.

Veden ja elintarvikkeiden mikrobiologinen tutkimus todennäköisimmällä lukumäärällä (MPN) kokonais- ja ulosteisten kolibakteerien tutkimiseksi on protokolla, joka koostuu useista vaiheista; oletettu vaihe, varmentava vaihe ja loppuvaihe. EC-liemiä käytetään vahvistusvaiheessa.

Perusta

EC-lieme

EC-väliaine perustuu sellaisten ravintoelementtien tarjoamiseen, jotka ovat välttämättömiä kokonais- ja fekaalisten kolibakteerien optimaaliseksi kehittymiseksi, johon sisältyy Escherichia coli -bakteeri.

Nämä ravintoaineet tarjoaa triptein, koska ne ovat erinomainen peptidien ja aminohappojen lähde. Lisäksi se sisältää myös laktoosia, fermentoitua hiilihydraattia, joka tuottaa energiaa ja antaa mahdollisuuden osoittaa, tuottavatko bakteerit kaasua.

Toisaalta väliaine sisältää sappisuoloja, jotka tarjoavat selektiivisen luonteen, koska se estää näytteessä mahdollisesti olevien gram-positiivisten mikro-organismien kasvua.

Samoin dikaliumfosfaatti ja monokaliumfosfaatti toimivat pH: ta tasapainottavana järjestelmänä. Tämä järjestelmä on välttämätön, koska liemessä oleva laktoosi pyrkii happamaan väliainetta, kun se käy fermentoituna mikro-organismeilla, mutta tämä kompensoidaan fosfaattisuoloilla.

Siksi nämä elementit ovat välttämättömiä, koska hallitsematon happamuus voi vaikuttaa haluttujen mikro-organismien asianmukaiseen kehitykseen.

Natriumkloridi puolestaan ​​stabiloi väliaineen osmoottisesti, kun taas vesi on liuotin läsnä oleville liuenneille aineille ja antaa nestemäisen konsistenssin väliaineelle.

Novobiocin Modified EC -lieme

Okrend ja Rose loivat erilaisia ​​EC-liemeitä, nimeltään novobiocin modified EC lieme. Modifikaatio koostui sappisuolojen konsentraation vähentämisestä ja 20 mg / dl novobiosiinin lisäämisestä.

Tämä modifikaatio suosii enterohemorragisten Escherichia coli -kantojen (O157: H7) palautumista.

Tämä bakteeriserotyyppi aiheuttaa vaikeaa verenvuotokolitista, joka voi johtaa hemolyyttiseen ureemiseen oireyhtymään (HUS); joka puolestaan ​​voi aiheuttaa akuuttia munuaisten vajaatoimintaa, ja korkea kuolleisuus voi olla jopa 50% vanhuksilla.

Tämän bakteerin vuosittain aiheuttaman sairastuvuuden ja kuolleisuuden vuoksi saastuneiden elintarvikkeiden kulutuksesta Yhdysvaltain maatalousministeriö (USDA) suosittelee voimakkaasti tämän väliaineen käyttöä.

Valmistautuminen

EC-lieme

Punnitaan 37,4 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Seoksen tulisi antaa seistä 5 minuuttia. Myöhemmin, lämmönlähteessä, se lopetetaan liukenemiseen sekoittamalla usein.

Kun se on liuennut, se jaetaan esikäsiteltyihin koeputkiin, joissa on Durham-putki. Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Elatusaineen pH: n tulisi olla 6,9 ± 0,2. Kuivatun väliaineen väri on beige ja valmistettu väliaine on vaalean keltaista.

Liemiä pidetään jääkaapissa käyttöön asti. Liemien on oltava käytön aikana huoneenlämpöisiä.

Toisaalta EC-lieme voidaan myös valmistaa kaksoiskonsentraationa.

Novobiocin Modified EC -lieme

Punnitaan 36,7 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan vettä. Loppuvalmiste on sama kuin edellä on kuvattu.

Käyttää

Koliformi- ja kokonaisanalyysi

EC-lieme on ihanteellinen varmennusvaiheeseen koliformitutkimuksissa NMP-menetelmällä, sekä vesinäytteissä että farmaseuttisissa tuotteissa ja elintarvikkeissa.

Oletetussa vaiheessa saadut sameat, kaasua tuottavat laktoosiliemit tulisi uudestaan ​​asettaa 2% sapen kirkkaanvihreisiin liemeihin ja EC-liemeen.

Kokonaiskoliformeja varten EC-liemeitä inkuboidaan aerobisesti 24 - 48 tuntia 37 ° C: ssa, ja fekaalisten kolibakteerien kanssa niitä inkuboidaan aerobisesti 24 - 48 tuntia 44 ° C: ssa.

Molemmissa tapauksissa se tulkitaan seuraavasti: sameaisia ​​putkia, joiden kaasuntuotanto pidetään positiivisina. Jos kaasua ei tuoteta 24 tunnissa, inkubaatio jatkuu jopa 48 tuntia.

EC-positiiviset liemit menevät täydelliseen vahvistusvaiheeseen, joka koostuu uudelleensijoittamisesta selektiivisissä väliaineissa, kuten Mac Conkey-agar, EMB-agar tai Endo-agar.

Jos käytetty lieme on novobiosiinilla modifioitua EC, positiiviset putket suositellaan uudelleensyöttöön Mac Conkey-agarissa sorbitolilla.

QA

Jokaisen valmistetun väliaineerän on oltava laadunvalvonta. Ensin on arvioitava väliaineen steriiliys. Tässä mielessä yhtä tai kahta liemettä inkuboidaan ilman inokulaatiota aerobioosissa 24 tunnin ajan 37 ° C: ssa. Odotettu tulos on läpinäkyvä lieme, ilman sameutta tai värimuutoksia.

Toiseksi on arvioitava tunnettujen kantojen kasvua, jotta voidaan käyttää seuraavia bakteereja: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Kaikissa tapauksissa odotetaan tyydyttävää mikrobikehitystä havaitsemalla sameaa lieme, jossa kaasuntuotanto tapahtuu E. colille ja ei kaasua Salmonellalle.

Muita kantoja, jotka voidaan sisällyttää kontrolliin, ovat: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Nämä kannat on estettävä kokonaan.

suosituksia

-Durhamin putkien sijoittaminen on välttämätöntä koliformin tutkimiseksi.

-Jatka väliaine koeputkiin ennen sterilointia, ei koskaan sen jälkeen.

-Älä käytä, jos väliaine on yli 3 kuukautta vanha.

-Älä käytä, jos väliaineen tavanomaisissa ominaisuuksissa havaitaan muutoksia.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. EC-väliaine. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
2. Enterohemorraaginen E. coli. Elintarviketurvan ja kansanterveyden keskus. 2010.Saatavilla osoitteessa: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EC-väliaine. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiotsiinilla modifioitu EC-väliaine. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Escepichia colin havaitseminen, eristäminen ja karakterisointi Shiga-toksiinia tuottavasta tuoreesta jauhetusta lihasta lihavihanneksista Concepciónin maakunnassa. Tucumánista. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284 - 287. Saatavilla: www.scielo.org.