LAKTOITU LIEME: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

Laktoosi liemi on keino ei - selektiivinen nestemäisessä viljelyväliaineessa käytetään ensisijaisesti esirikastuksen eristettyä Salmonella-kannasta peräisin mikrobiologinen määritys jalostettuja elintarvikkeita, maitotuotteet tai vettä. Tätä suosittelee kansainvälinen elintarvikkeiden mikrobiologisia eritelmiä käsittelevä toimikunta (ICMPF).

Elatusaine sisältää gelatiinin, lihauutteen ja laktoosin entsymaattisia sulatuksia, aineita, jotka ovat välttämättömiä bakteerien kasvulle. Lisäksi laktoosi on käymiskelpoinen hiilihydraatti, joten jotkut kolibakteerit kykenevät hajottamaan sen kaasun tuotannossa.

Lactated liemit, sameus. Lähde: Kuva kirjoittanut MSc. Marielsa gil

Tästä syystä amerikkalainen kansanterveysjärjestö (APHA) suosittelee laktoosiliemää kokonaisbakteerien ja fekaalisten koliformisten bakteerien oletetutkimukseen, määrittelemällä sen erinomaiseksi vaihtoehdoksi korvata tryptoosilauryylisulfaattiliemi todennäköisimmän lukumäärän (MPN) standarditekniikassa.), jota käytetään elintarvikkeiden, maidon ja pintavesien, maanalaisten, virkistys-, kotitalous- ja teollisuusjätteiden näytteiden mikrobiologiseen analyysiin.

Perusta

Joidenkin näytteiden mikrobiologisissa analyyseissä esirikastamisvaihe on välttämätön, jotta voidaan ottaa talteen tietty mikro-organismi, jota voi olla hyvin pienessä määrin tai epäsuotuisissa olosuhteissa, jotka rikkovat tai minimoivat sen elinkykyä.

Näin on kuivatuissa ja jalostetuissa elintarvikkeissa, jotka ovat mahdollisesti saastuneet Salmonellas sp. Näissä tapauksissa, jos bakteereja on läsnä, he ovat kärsineet fyysistä ja kemiallista väärinkäyttöä tuotteen valmistusprosessin aikana.

Sellaisella tavalla, että mikro-organismit altistetaan haitallisille tekijöille, kuten kuivumiselle, altistumiselle estäville tai myrkyllisille tuotteille ja päällekkäisyyksille, joita aiheuttaa muiden bakteerien läsnäolo suurempina määrinä.

Tässä mielessä laktoosiliemellä on korjaava vaikutus mikro-organismin vaurioituneisiin rakenteisiin, aiheuttaen sen toipumisen ja lisääntymisen siten, että se voidaan havaita.

Samoin laktoosiliemi kykenee laimentamaan estäviä aineita, jotka voivat vaikuttaa sen elinkykyyn, mahdollistaen sen kehityksen. Lisäksi laktoosiliemeen ravitsemuksellinen koostumus on strateginen suosimaan Salmonella sp: n kasvua muihin mikro-organismeihin nähden.

Lopullista tunnistamista varten se on subkulttuuroitava muihin lopullisiin elatusaineisiin.

Toisaalta väliaineen koostumus mahdollistaa myös kaasun tuottavien laktoosia fermentoivien mikro-organismien havaitsemisen.

Valmistautuminen

Litran laktoosiliemin valmistamiseksi 13 grammaa kuivattua väliainetta on punnittava ja liuotettava 1000 ml: aan tislattua vettä.

Väliaineen liukenemisen helpottamiseksi vedessä liuosta voidaan kuumentaa vähän, mutta ei liikaa.

Kun liuos on homogeeninen, se valmistetaan seuraavasti: jos liemeä käytetään kolibakteerien etsimiseen, valmistetaan koeputkiteline, johon Durham-käymisputki työnnetään ylösalaisin.

Durhamin putki on erittäin tärkeä yksityiskohta, koska se mahdollistaa kaasun muodostumisen havaitsemisen, sillä sillä on arvokasta tietoa koliformit etsimässä.

Kun putket ovat valmiita, niihin annostellaan 10 ml laktoosilientä, määrän, jonka on oltava riittävä peittämään koko Durham-putki.

Jos laktoosilientä on tarkoitus käyttää esirikastuslieminä, Durhamin käymisputkea ei tarvitse asettaa. Tässä tapauksessa tarvitaan suurempi määrä väliainetta (225 ml), joka annostellaan 500 ml: n pulloissa, leveä suu ja lämpöä kestävä kierrekorkki.

Tämän jälkeen putket tai pullot autoklavoidaan 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Elatusaineen on pysyttävä lopullisessa pH: ssa 6,9 ± 0,2 lämpötilassa 25 ° C.

Liemiä pidetään jääkaapissa käyttöön asti.

Ennen käyttöä liemet on saatettava huoneenlämpöiseksi.

Toisaalta laktoosiliemi voidaan myös valmistaa kaksinkertaisena konsentraationa.

Jotkut laboratoriot lisäävät bromikresolipunaista laktoosiliemään pH-indikaattorina, jotta voidaan näyttää putket, joissa laktoosi on käynyt värinmuutoksen vuoksi. Tässä tapauksessa liemi väriltään purppuranpunaisena ja jos käymistä käy, se muuttuu keltaiseksi.

Sovellukset

Mikrobiologialaboratorioissa laktoosiliemi on laajalti käytetty, koska se on suhteellisen edullinen väliaine, joka tarjoaa luotettavia ja nopeita tuloksia (24-48 tuntia).

Sitä voidaan käyttää kokonais- ja fekaalisten kolibakteerien analysoimiseksi ruuissa ja vedessä tai esirikastuslieminä Salmonellalle.

Esirikastusta

Esirikastaminen on vaihe ennen näytteen rikastamista, mikä parantaa huomattavasti Salmonella-suvun bakteerien talteenottoa jalostetuissa elintarvikkeissa.

Tätä varten kiinteä ruokanäyte (25 grammaa) tai neste (25 ml) ympätään 225 ml: aan laktoosilientä, inkuboidaan 24 - 48 tuntia. Myöhemmin sitä viljelään rikastetussa väliaineessa, kuten seleniitti kystiinilieme tai tetrationaattilieme. Siirry sitten selektiiviseen XLD- ja SS-tietovälineeseen.

Koliformi- ja kokonaisanalyysi

Se on erinomainen väliaine indikaattorina ulosteen saastumiselle.

Tästä syystä laktoosiliemi on ihanteellinen koliformistutkimuksen oletettuun vaiheeseen todennäköisimmän määrän menetelmällä.

Näytteille, joissa epäillään suurta määrää koliformeja, ympätään pienempi määrä sitä (1 ml), kun taas näytteisiin, joissa epäillään pienempi määrä koliformeja, inokuloidaan suurempi näytemäärä (10 ml).

Analyysiä varten tehdään 10 - ¹, 10 - ², 10 - ³ laimennuksia, jolloin muodostuu 3 - 5 putken paristo jokaiselle käytetylle konsentraatiolle.

Jokaisesta laimennuksesta sama tilavuus ympätään laktoosiliemiin.

Putkia inkuboidaan 24 tuntia. Negatiivisia liemeitä inkuboidaan vielä 24 tuntia.

Tulokset tulkitaan tarkkailemalla kahta ominaisuutta: ensimmäinen on sameuden esiintyminen tai puuttuminen ja koska tämä väliaine ei sisällä pH-indikaattoria, väri ei muutu.

Toinen on kaasun tuotanto vai ei. Kaasu ilmenee helposti Durhamin putkessa siitä, että sen sisällä on yksi tai useampia ilmakuplia.

Sitä pidetään positiivisena, jos molemmat ominaisuudet havaitaan, toisin sanoen sameus kaasuntuotannossa. Positiiviset putket olisi siemennettävä uudelleen varmistusväliaineisiin (2% Brilliant Green Bile -lieme ja EC-lieme).

Väliaineen laadunvalvonta

- Väliainetta valmistettaessa on tärkeää unohtaa sijoittaa Durhams-putket, jos niiden tarkoituksena on tutkia koliformeja.

- Älä kuumenna väliainetta ennen sterilointia.

- Levitä koeputkiin ennen sterilointia, ei koskaan sen jälkeen.

- Älä käytä, jos väliaine on yli 3 kuukautta vanha.

- Älä käytä, jos havaitset muutoksia väliaineen tavanomaisissa ominaisuuksissa.

- Valmistellessasi laktoosiliemierää, testaa sen laatu kylväämällä tunnettuja kantoja, kuten Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii ja Klebsiella pneumoniae. Ne kasvavat erittäin hyvin kaasuntuotannolla (positiivinen kontrolli).

- Se voi sisältää myös Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium tai Enterococcus faecalis, jotka kasvavat hyvin, mutta ilman kaasuntuotantoa (Negative Control).

- On huomattava, että dehydratoidun väliaineen alkuperäinen väri on beige ja valmistetun väliaineen väri on erittäin vaaleaa ja läpinäkyvää keltaista. Jos havaitaan värin tai ulkonäön muutosta, se voi huonontua.

Viitteet

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Ympäristöbiologia ja mikrobiologia. (2013) 1. painos. Cartagenasin yliopisto, Kolumbia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ja Velázquez O. (2009). Elintarvikkeiden mikrobiologisen analyysin tekniikat. 2. toim. Kemian tiedekunta, UNAM. Meksiko.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Laktoosiliemi kaksinkertainen konsentraatio (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Tekniikan vertailu koliformisten bakteerien uuttamiseksi Meksikon Xochimilco-järven sedimentistä. Arkkitehti. Microbiol. 2013; 45 (3): 180 - 184. Saatavana osoitteessa: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Arteesisten kaivovesien mikrobiologisen laadun määrittäminen keskus-, Cordillera- ja Pääkaupunkikunnan osastojen alueilla. Mem. Inst. Science. Terveys 2013; 11 (1): 5 - 14. Saatavana osoitteesta: scielo.iics.