MALONAATTILIEME: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

Malonaatti liemi on nestemäisessä viljelyalustassa, jota käytetään diagnostisen testin (malonaatti), käytetään erottamaan joitakin suvuista Enterobacteriaceae-perheen. Sen loi Leifson vuonna 1933 ja myöhemmin muutti Ewing, joka lisäsi pienen määrän dekstroosia ja hiivauutetta alkuperäiseen kaavaan.

Elatusaine koostuu tällä hetkellä hiivauutteesta, ammoniumsulfaatista, dikaliumfosfaatista, monokaliumfosfaatista, natriumkloridista, natriummalonaatista, dekstroosista ja bromitymolisinisestä. Tämä testi sisältyy yleensä enterobakteerien biokemialliseen tunnistusakkuun, mikä auttaa erottamaan tietyt suvut ja lajit.

Malonaattikokeen graafinen esitys. A. Negatiivinen testi, B. (Happamuminen) Negatiivinen testi, C. (Keskipitkä alkalisointi) Positiivinen testi. Lähde: väriputket publicdomainpictures.net

Malonaattitesti perustuu pääosin joidenkin mikro-organismien kykyyn käyttää natriummalonaattia ainoana hiililähteenä ja ammoniumsulfaattia typpilähteenä.

Malonaattitesti on yleensä positiivinen joillakin Enterobacter-, Klebsiella- ja Citrobacter-sukujen lajeilla. Suurin osa Escherichia-, Salmonella-, Shigella-, Edwardsiella-, Yersinia-, Serratia-, Morganella-, Proteus- ja Providencia-sukujen lajeista antaa negatiivisen reaktion.

Perusta

Malonaattikoe koostuu niiden bakteerien osoittamisesta, jotka kykenevät käyttämään natriummalonaattia ainoana hiililähteenä ja ammoniumsulfaattia typpilähteenä.

Suurin osa enterobakteereista, jotka eivät käytä malonaattia, kykenevät kasvamaan tässä väliaineessa ottaen ravinteiksi dekstroosia ja hiivauutetta.

Tällöin kaikki alkalointiyritykset peptoneja käyttämällä torjutaan tuottamalla happoja, jotka syntyvät dekstroosin käymisessä. Samoin dikalium- ja monokaliumfosfaatit toimivat puskurina pitäen pH: n 6,7: ssa.

Siksi, kun testi on negatiivinen, lieme pysyy samana alkuperäisenä värinä (vihreä). Harvinaisissa tapauksissa väliaine voi muuttua happamaksi dekstroosin käymisen vuoksi; Ilman peptoneja ja pH-indikaattoria se muuttaisi väliaineen värin keltaiseksi. Jotta tämä tapahtuisi, pH: n on laskettava arvoon 6.

Nyt kun tämä testi on positiivinen, sanotaan, että mikro-organismi käytti malonaattia ja ammoniumsulfaattia vastaavasti hiili- ja typpilähteinä käyttämättä muita komponentteja.

Tällöin väliaine muuttuu alkaliseksi natriumin vapautumisen ja siitä seuraavan NaOH: n muodostumisen vuoksi. Tässä mielessä pH-indikaattori (bromitymolisininen) muuttaa väliaineen värin vihreästä siniseksi, kun pH on vähintään 7,6. Sininen voi olla vaaleaa tai voimakasta (Preussin sininen).

Lopuksi natriumkloridi ylläpitää väliaineen osmolaarisuutta ja vesi on kaikkien komponenttien laimennusaine.

Tulkinta

Sama värilieme (vihreä) - negatiivinen testi

Keltainen lieme: negatiivinen testi

Vaalea tai syvän sininen lieme: testi positiivinen

On olemassa variantti nimeltään fenyylialaniinimalonaattilieme, jota kutsutaan myös Shaw- ja Clarken väliaineeksi. Tässä tapauksessa voidaan analysoida kaksi testiä, malonaatin käyttö hiilen lähteenä ja pyruviinihapon tuotanto fenyylialaniinista.

Valmistautuminen

Malonaattilieme

Punnitaan valitun kaupallisen yrityksen lisäyksen ilmoittama gramman lukumäärä (se voi vaihdella välillä). Punnitut grammat suspendoidaan litraan tislattua vettä. Kuumenna hiukan, kunnes se on täysin liuennut. Levitä 3 ml väliainetta 13/100-koeputkiin puuvillakorkkeilla.

Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 - 20 minuutin ajan.

Jäähdytä ennen käyttöä. Jos niitä ei aiota käyttää heti, säilytä jääkaapissa käyttöönottoon asti. Kuumenna liemit huoneenlämpötilaan ennen inokulointia.

Elatusaineen pH: n tulisi olla 6,7 ​​± 0,2. Valmistetun väliaineen väri on pullonvihreä.

Fenyylialaniini malonaattilieme

Punnitaan 11 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Loppuvalmiste on sama kuin aiemmin kuvattiin.

Se voidaan myös valmistaa lisäämällä 2 g / l fenyylialaniinia malonaattiliemeväliaineeseen ennen sen sterilointia.

Käyttää

Sitä käytetään osana biokemiallisia testejä, jotka on koottu enterobakteerien perheen bakteerien tunnistamiseksi.

Auttaa erottamaan:

- Escherichia- ja Serratia-suvun Klebsiella-suvut ja Enterobacter (+) (-).

- Salmonella enterica ssp arizonae-, Salmonella enterica ssp salame- ja Salmonella enterica ssp diarizonae -lajit (+), lajista Salmonella enterica ssp enterica (-).

- Klebsiella-suvusta yleensä (+) suvusta Actinobacillus (-).

- Toisinaan se voi auttaa erottamaan bakteerien suvut ja lajit, jotka eivät kuulu Enterobacteriaceae-perheeseen, kuten käymättömien gram-negatiivisten Alcaligenes faecalis (+) -bakteerien ja Acinetobacter sp (-) -bakteerien joukossa.

Lähde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.

Prosessi

Sytyttimen alla otetaan osa puhdasta kölniä, käyttämällä asianmukaisesti steriloitua ja jäähdytettyä platinakahvaa. Otettu näyte (kevyt siirroste) liuotetaan malonaattiliemeen. Inkuboidaan kannen kanssa löysällä aerobioosissa lämpötilassa 35 ° C ± 0,2 24–48 tuntia.

Malonaattilieme voidaan myös inokuloida 18 - 24 tunnin viljelmästä tryptikaasi-soijaliemessä. Tässä tapauksessa otetaan 0,01 ml steriilillä pipetillä ja malonaattilieme siirrostetaan. Inkuboidaan kannen kanssa löysällä aerobioosissa lämpötilassa 35 ° C ± 0,2 24–48 tuntia.

Ajan lopussa tulokset tulkitaan. Kaikkien sinisen värin jälkiä 48 tunnin inkubaation jälkeen olisi pidettävä positiivisina. Testiä ei pidä tulkita negatiiviseksi ennen kuin 48 tunnin inkubaatioaika on kulunut.

Jos käytetään fenyylialaniinimalonaattiliemevarianttia, malonaatti tulkitaan ensin ja sitten lisätään 5 tippaa 1 N HCl: ää ja 3-5 tippaa 8% ferrikloridia. Tummanvihreä väri tulkitaan positiiviseksi testiksi fenyylialaniinille. Jos väliaine puolestaan ​​muuttuu vaaleansiniseksi, testi on fenyylialaniinin suhteen negatiivinen.

QA

Elatusaineen steriiliyden kontrolloimiseksi yhtä tai kahta liemettä tulisi inkuboida lämpötilassa 35 ° C ± 0,2 24 tunnin inkuboinnin ajan. Tämän ajan kuluttua ei pitäisi olla sameutta tai värin muutosta.

Laadunvalvontaan voidaan käyttää tunnettuja tai sertifioituja kantoja, kuten: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 ja Escherichia coli ATCC 25922.

Odotetut tulokset ovat:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae ja Salmonella enterica ssp arizonae tuottavat positiivisen reaktion (keskimääräinen sininen väri).
• Escherichia colin kohdalla tuloksen tulisi olla negatiivinen, ts. On odotettavissa, että väri ei muutu (vihreä) tai että se muuttuu keltaiseksi glukoosin käymisen vuoksi.

rajoitukset

Älä käytä liemetä, joissa on sameutta, saostumia, värimuutoksia tai merkkejä huonontumisesta.

Viitteet

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Salmonella spp. ja molekyylityökalut sen havaitsemiseksi. Uninorte Health. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73 - 94. Saatavana osoitteessa: scielo.org.co
2. BBL. Malonaattilieme, Ewing muunnettu. 2007. Saatavana osoitteessa: bd.com
3. Senna Laboratories. Malonaton lieme. Saatavana osoitteessa: c Scientificasenna.com
4. RenyLab. Malonaton lieme. 2013.Saatavilla osoitteessa: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog-diagnostiikka. Malonaton lieme. Saatavana osoitteessa: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Fenyylialaniinimalonaattilieme. Saatavana osoitteessa: condalab.com