SELENIITTILIEME: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

Seleniittiä on selektiivinen nestemäistä kasvualustaa. Sen on suunnitellut Leifson näytteiden rikastamiseen, jos epäillään Salmonella-suvun enteropatogeenisten bakteerien esiintymistä.

Tämä väliaine täyttää American Public Health Associationin (APHA) vaatimukset, ja siksi se hyväksytään tutkimaan salmonellan esiintymistä mm. Ulosteista, virtsasta, nestemäisestä tai kiinteästä ruuasta, vedestä.

Seleniittilieme. Lähde: Kuva kirjoittanut MSc. Marielsa gil

Sen kemiallinen koostumus suosii näiden mikro-organismien talteenottoa ja estää puolestaan ​​muiden kasvua. Se on pääasiassa myrkyllistä suurimmalle osalle Enterobacteriaceae-sukuun kuuluvia bakteereja. Se sallii kuitenkin myös Shigella-kantojen palautumisen eikä estä Pseudomonasin ja Proteuksen kasvua.

Se koostuu vedettömästä natriumvetyseleniitistä, vedettömästä natriumfosfaatista, peptoneista ja laktoosista. On myös variantti, johon lisätään kystiiniä, tästä syystä sen nimi on seleniitti-kystiinilieme.

Tällä hetkellä seleniitti-kystiiniliemen käyttö on edullista, koska saavutetaan korkeampi salmonellan talteenottoprosentti, mikä vastaa sitä, mitä havaitaan muilla samaa tarkoitusta varten käytetyillä selektiivisillä väliaineilla, kuten natriumtetrationaattilieme.

Perusta

Liemissä olevat peptonit toimivat ravintoaineina mikro-organismien asianmukaiselle kehitykselle. Salmonellakannoissa käytetään peptoneja typen, vitamiinien ja aminohappojen lähteenä.

Laktoosi on käymiskelpoinen hiilihydraatti, kun taas natriumseleniitti on estävä aine, joka estää gram-positiivisten bakteerien ja suurimman osan suolistofloorassa esiintyvien bakteerien, etenkin Enterobacteriaceae-perheen, kasvusta. Natriumfosfaatti on puskuri, joka stabiloi väliaineen pH: n.

L-kystiiniä sisältävän seleniittiliemevariantin tapauksessa tämä lisäyhdiste on pelkistävä aine, joka minimoi seleniitin toksisuuden lisääen salmonellan talteenottoa.

Valmistautuminen

-Seleniittilieme

Jos sinulla on seoksen komponentteja, voit punnita:

4 g vedetöntä natriumvetyseleniittiä.

10 g vedetöntä natriumfosfaattia.

5 g peptoneja.

4 grammaa laktoosia.

Liuota yhdisteet 1 litraan steriiliä tislattua vettä. Sitä voidaan kuumentaa hieman liukenemaan kokonaan.

Jotkut laboratoriot altistavat väliainetta 10 minuutin ajan juoksevassa höyryssä sen steriloimiseksi, koska autoklaavia ei tule käyttää. Jos väliaine on steriloitu, sitä voidaan säilyttää jääkaapissa käyttöön asti.

Se voidaan myös valmistaa steriloimattomana ja se voidaan antaa suoraan 10 - 15 ml: aan steriileihin koeputkiin.

Tässä tapauksessa se tulisi jättää lepäämään ja käyttämään heti. Koska väliaine ei ole steriili, sitä ei voida säilyttää jääkaapissa myöhempää käyttöä varten.

- Kaupallisen ympäristön valmistelu

Jos kaupallista väliainetta on saatavana, punnitaan 23 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan se litraan steriiliä tislattua vettä. Kuumenna lyhyesti hetkeksi liukenemisen loppuun saattamiseksi. Älä autoklaavoi. Tarjoa aseptisesti 10 tai 15 ml steriileissä koeputkissa.

Elatusaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,0 ± 0,2.

On huomattava, että dehydratoidun väliaineen väri on beige ja valmiste on vaaleaa ja läpikuultavaa keltaista.

Seleniitti-kystiini-liemivariantti

Se sisältää samoja yhdisteitä kuin seleniittilieme, mutta 10 mg kystiiniä lisätään. Muut toimenpiteet ovat täsmälleen samat kuin edellä on kuvattu.

Sovellukset

Tämä väliaine on erityinen käytettäväksi epidemiologisissa tutkimuksissa tapauksissa, joissa sairaus ei ole akuutissa vaiheessaan, oireettomia potilaita tai terveitä kantajia.

Salmonella-suvun eristäminen on yleensä vaikeaa, koska ne ovat yleensä vain huonosti saastuttavia näytteitä. Pieninä määrinä se menee helposti päällekkäin muiden bakteerien suvun kasvun kanssa, joita esiintyy suurempina määrinä.

Toisaalta raaka-aine, jolla jalostettuja ruokia tehdään, altistetaan usein muun muassa kuumuudelle, kuivumisprosesseille, desinfiointiaineiden, säteily- ja säilöntäaineiden käytölle.

Siksi raaka-aineessa olevia salmonelloja käsitellään väärin kohdistamalla tuote edellä mainittuihin teollisiin prosesseihin. Samoin kliinisissä näytteissä, kuten ulosteessa, kannat voivat olla heikkoja, jos ne tulevat potilailta, joita on hoidettu antibiooteilla.

Sen vuoksi kaikkia näytteitä, joissa epäillään salmonellan esiintymistä, tulisi rikastaa ennakolta laktoosiliemillä ja sitten rikastaa seleniittiliemellä optimoidaksesi sen saannon selektiivisissä väliaineissa, kuten SS-agar, ksyloosi-agar, lysiinideoksikolaatti (XLD)), enteerinen Hektoen-agar (HE) ja kirkkaanvihreä agar, mm.

kylvetty

Ulosteenäytteistä otetaan 1 g näytettä ja suspendoidaan putkeen 10–15 ml: lla seleniittiliemeliuosta. Jos uloste on nestemäistä, ota 1 ml ja suspendoi liemeen. Tyhjennä peräsuolen otokset tampon materiaalista liemeen.

Kiinteissä ruuanäytteissä otetaan 1 gramma ja suspendoidaan seleniittiliemeen.

Nestemäisissä elintarvikkeissa sekoitetaan yhtä suuressa määrin seleniittilieme kanssa kaksinkertaisena pitoisuutena.

Virtsanäytteitä sentrifugoidaan, supernatantti heitetään pois, otetaan kaikki sedimentit ja suspendoidaan seliniittiliemeen.

Liemiä inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 tunnin inkuboinnin ajan. Bakteerien kasvusta osoittaa sameus. Lisäputki näytettä kohti voidaan myös sisällyttää inkubointiin 42 ° C: ssa. Seuraavaksi siementettiin selektiivinen kiinteä väliaine seleniittiliemestä.

QA

Steriiliyden kontrolloimiseksi seleeniittiliemeä jokaisesta rokottamattomasta erästä inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan. Oletetaan, että väliaineessa ei ole sameutta tai värinmuutosta.

Elatusaineen asianmukaista toimintaa voidaan käyttää tunnetuilla kannoilla, kuten:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 ja Proteus mirabilis ATCC 43071.

Odotetut tulokset ovat:

• Kolmen ensimmäisen bakteerikannan kasvun on oltava tyydyttävää.
• Escherichia colin osittainen estäminen.
• Proteus kohtalaiselle kasvulle.

rajoitukset

Seleniittiliemeväliaine on myrkyllistä ihon iholle, joten suoraa kosketusta tulisi välttää.

Viitteet

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Natriumseleniitin ja natriumtetrationaatin elatusaineiden vertailu, molemmat inkuboituna 37 ° C: ssa ja 42 ° C: ssa Salmonella spp: n eristäminen kantajien ulosteista. Rev. Biomed 2003; 14 (4): 215 - 220
2. Britannia Laboratories. Selenito lieme. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Seleniittilieme. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Salmonella spp. ja molekyylityökalut sen havaitsemiseksi. Terveys, Barranquilla 2014; 30 (1): 73 - 94. Saatavana osoitteesta:
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.