TRYPTASEIINI-SOIJALIEME: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

Soijaliemi tryptoni on nestemäistä kasvualustaa, erittäin ravitsevia, epäselektiivisen. Suuren monipuolisuudensa vuoksi se on yksi mikrobiologian laboratoriossa yleisimmin käytetyistä nestemäisistä kasvualustoista.

Se tunnetaan myös nimellä tryptinen soijaliemi tai hajotettu kaseiini-soija, jonka lyhenne on TSB sen englanninkielisestä lyhenteestä Tryptic Soy Broth tai CST sen lyhenteestä espanjaksi. Sen käyttö on hyvin monimuotoista koostumuksestaan ​​johtuen. Se koostuu tripteinistä, soijapeptonista, natriumkloridista, dikaliumfosfaatista ja glukoosista.

Trypticasein-soijalieme siemennettynä Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 -kannalla, jossa havaitaan pigmentin tuotantoa. Lähde: Kuva kirjoittanut MSc. Marielsa Gil.

Se pystyy lisääntymään kliinisesti tärkeitä patogeenisiä bakteereja, mukaan lukien ravintoa vaativat ja anaerobiset bakteerit. Jotkut opportunistiset ja saastuttavat sienet voivat myös kehittyä tässä ympäristössä.

Korkean ravintovoimansa vuoksi sillä on korkea herkkyys mikrobikontaminaation havaitsemiseksi, ja tästä syystä USDA: n eläin- ja kasvinsuojelutarkastusvirasto valitsi sen rokotteiden mikrobiologiseen analyysiin.

Samoin trypticasein -soijalieme täyttää erilaisten farmakopeoiden (Euroopan parlamentti, Japanin JP ja Pohjois-Amerikan USP) vaatimukset teollisuuden tason tuotteiden, kuten kosmetiikan ja elintarvikkeiden, mikrobiologisissa tutkimuksissa.

Toisaalta on syytä mainita, että huolimatta suuresta hyödyllisyydestään, tämä väliaine on suhteellisen edullinen, joten se on edullinen useimmille mikrobiologian laboratorioille. Se on myös erittäin helppo valmistaa.

Perusta

Triptein, peptoni ja glukoosi tarjoavat välttämättömiä ravintoominaisuuksia, jotta siitä tulisi ihanteellinen väliaine nopeaan mikrobikasvuun.

Noin 6 - 8 tunnin inkubaatiossa kasvu voidaan nähdä jo useimmissa mikro-organismeissa. On kuitenkin hitaasti kasvavia kantoja, joiden kasvaminen voi kestää päiviä.

Natriumkloridi ja dikaliumfosfaatti toimivat osmoottisena tasapainona ja pH: n säätelijänä vastaavasti. Kasvun esiintymisestä käy ilmi sameuden esiintyminen väliaineessa; jos kasvua ei ole, väliaine pysyy läpikuultavana.

Vaalean värinsä vuoksi on mahdollista tarkkailla pigmenttien tuotantoa, kuten artikkelin alussa olevassa kuvassa esitetty, mikä vastaa Pseudomonas aeruginosan tuottamaa pigmenttiä.

Valmistautuminen

-Triptysein soijalieme

Tryptisen soijaliemen valmistamiseksi 30 g dehydratoitua kaupallista väliainetta on punnittava digitaalisessa mittakaavassa. Sitten se liuotetaan litraan tislattua vettä, joka sisältyy pulloon.

Seoksen annetaan levätä 5 minuutin ajan ja sitten se viedään lämmönlähteeseen väliaineen liukenemisen helpottamiseksi. Sitä tulisi sekoittaa usein kiehuen yhden minuutin ajan.

Kun se on liuennut, se jaetaan tarvittavan kokoisiin putkiin. Putkia, joissa on puuvillapistokkeet tai bakeliittikorkit, voidaan käyttää. Tämän jälkeen putket steriloidaan autoklaavissa olevalla väliaineella 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Elatusaineen pH: n on oltava 7,3 ± 0,2

On huomattava, että dehydratoidun kasvatusväliaineen väri on vaaleanbeige ja sitä tulisi säilyttää lämpötilassa 10 - 35 ° C kuivassa paikassa. Vaikka valmistettu liemi on väriltään vaaleankeltaista, se tulisi säilyttää jääkaapissa (2 - 8 ° C).

-Erilaisia ​​tryptisiä soijaliemeitä

Modifioitu trypticasein -soijalieme voidaan valmistaa lisäämällä sappisuoloja ja novobiosiinia sen tekemiseksi selektiiviseksi E. colin eristämiseksi. Toinen vaihtoehto samaan tarkoitukseen on valmistaa trypticase-soijaliemi, jota on täydennetty vankomysiinillä, kefiksiimillä ja telluriitilla (2,5 ug / ml).

Toisaalta enemmän glukoosia (0,25%) voidaan lisätä tryptiseen soijaliemeen, kun tavoitteena on stimuloida biofilmien muodostumista.

Käyttää

Se on tarpeeksi ravitseva, jotta mahdollinen herkullinen tai herkullinen bakteeri, kuten Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp ja Brucella sp, kasvaisi ilman tarvetta täydentää verta tai seerumia.

Samoin jotkut sienet voivat kehittyä tässä liemessä, kuten Candida albicans Complex, Aspergillus sp ja Histoplasma capsulatum.

Lisäksi tämä väliaine anaerobisissa olosuhteissa on ihanteellinen Clostridium-sukuun kuuluvien bakteerien sekä kliinisesti tärkeiden itiömättömien anaerobisten bakteerien talteenottamiseen.

Jos lisätään 6,5% natriumkloridia, sitä voidaan käyttää enterokokin ja muiden ryhmän D streptokokkien kasvattamiseen.

Tutkimustasolla se on ollut erittäin hyödyllinen erilaisissa protokolloissa, etenkin biofilmiä tai biofilmiä muodostavia bakteereita tutkittaessa. Sitä käytetään myös 0,5-prosenttisen Mac Farland -bakteerisuspension valmistukseen, joka tarvitaan antiiogrammin suorittamiseen Kirby ja Bauer-menetelmällä.

Tässä tapauksessa otetaan 3 - 5 samankaltaisen ulkonäön pesäkettä ja emulgoidaan 4-5 ml: aan trypticasein soijaliemeä. Sitten sitä inkuboidaan 2 - 6 tuntia 35 - 37 ° C: ssa ja sen jälkeen säädetään haluttuun konsentraatioon steriilillä suolaliuoksella. Tryptaseiini-soijaliemeitä ei tule käyttää 18 - 24 tunnin inkubaatiossa.

kylvetty

Näyte voidaan siementaa suoraan tai selektiivisistä väliaineista otetut puhtaat pesäkkeet voidaan viljellä uudelleen. Inokulaatin tulisi olla pieni, jotta väliaine ei pilviä ennen inkubointia.

Normaalisti sitä inkuboidaan 37 ° C: ssa aerobioosissa 24 tunnin ajan, mutta nämä olosuhteet voivat vaihdella halutusta mikro-organismista riippuen. Sitä voidaan myös inkuboida anaerobisissa olosuhteissa 37 ° C: ssa useita päiviä tarvittaessa. Esimerkiksi nopeasti kasvavia tai vaatimattomia mikro-organismeja voidaan inkuboida jopa 7 vuorokautta.

Farmaseuttisten aineiden - kuten rokotteiden - mikrobiologisessa analyysissä protokollat ​​ovat tiukempia. Näissä tapauksissa liemi ilman kasvua heitetään pois, kunnes se saavuttaa 14 päivän jatkuvan inkuboinnin.

QA

Jokaisesta valmistetusta erästä 1 tai 2 rokottamatonta putkea tulisi inkuboida niiden steriiliyden osoittamiseksi. Sen on pysyttävä ennallaan.

Tunnetut kannat voidaan myös istuttaa heidän käyttäytymisensä arvioimiseksi. Kannat, joita voidaan käyttää, ovat:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 tai 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305, pneumoniae ATCC28omonas 905, pneumoniae ATCC28omonas305.

Kaikissa tapauksissa kasvun on oltava tyydyttävää kussakin mikro-organismissa sopivissa ilma- ja lämpötilaolosuhteissa.

rajoitukset

-Glukoosin käyminen aiheuttaa elatusaineen pH: n laskun happojen tuotannon vuoksi. Tämä voi olla epäsuotuisa joidenkin happamuudeltaan herkkien mikro-organismien selviytymiselle.

- Sitä ei suositella kantojen ylläpitämiseen, koska happamuuden lisäksi bakteerit kuluttavat ravintoaineita muutaman päivän kuluttua, mistä seuraa seurauksena myrkyllisten aineiden kertyminen, jotka tekevät ympäristöstä turhaa.

- Sinun on työskenneltävä huolehtimalla kaikista steriiliyskäytännöistä, koska liemet ovat helposti saastuneita.

- Tryptaseiini-soijaliemien valmistamisen jälkeen sinun ei pitäisi yrittää siirtää liemettä toiseen steriiliin putkeen, koska tämäntyyppinen toiminta on erittäin herkkä saastumiselle.

Viitteet

1. Cona E. Edellytykset hyvälle herkkyystutkimukselle agardiffuusiokokeella. Chil. infectol. 2002; 19 (2): 77 - 81. Saatavana osoitteessa: scielo.org
2. Britannia Laboratory. Tripteinin soijalieme. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
3. MCD-laboratorio. Trypticasein soijalieme. Saatavana osoitteessa electronic-systems.com
4. Neogeenilaboratorio. Triptyyklisoijalieme. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Magneettisen immuunijärjestelmän erotusmenetelmän arviointi Escherichia coli O157: H7: n talteenottamiseksi maitovoiteissa. ALAN. 2006; 56 (3): 257 - 264. Saatavana osoitteessa: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilmin muodostuminen Staphylococcus aureus -isolaateissa antimikrobisen herkkyyden ja kliinisen alkuperän perusteella. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Saatavana osoitteessa saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Escherichia coli O157: H7: n eristäminen kaksikäyttöisissä naudan ulostenäytteissä Mirandan kunnasta, Zulian osavaltiosta, Venezuelasta. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239 - 245. Saatavana osoitteessa: scielo.org