- Perusta
- Valmistautuminen
- -Tetrationaatti lieme
- Jodi jodiliuos
- Perusväliaine tetrationaattiliemelle
- -Tetrationaatti liemivariantti kirkkaanvihreällä
- Loistava vihreä
- Käyttää
- QA
- suosituksia
- Viitteet
Tetrationaattia liemi tai liemi TT on selektiivinen nestemäistä kasvualustaa rikastamiseksi ja talteenotto Salmonella-suvun kantoja. Sen on luonut Müeller ja myöhemmin muuttanut Kauffmann, minkä vuoksi on niitä, jotka kutsuvat sitä Müeller-Kauffmann -liemeksi.
Alkuperäinen väliaine sisälsi proteaasipeptoneja, kalsiumkarbonaattia ja natriumtiosulfaattia. Kauffmann lisäsi siihen sappisuoloja ja loi uuden modaliteetin kirkkaalla vihreällä. Nämä aineet estävät kolibakteerien kasvua ja jättävät väliaineen vapaaksi patogeenisten bakteerien, tässä tapauksessa salmonellan, kehitykseen.
Lisätään jodijodiliuos tetrationaattiliemeen. Lähde: Manuel Almagro Rivas
Modifikaatio oli erittäin onnistunut, koska se lisäsi merkittävästi väliaineen herkkyyttä. Tästä syystä on tällä hetkellä hyödyllistä etsiä salmonelloja millaisista näytteistä, mutta erityisesti kiinteistä tai nestemäisistä ulosteista ja ruoasta.
Sen valmistelu koostuu kahdesta vaiheesta; Kaupallinen väliaine on emäs tetrationaattiliemen valmistamiseksi, ja sen jälkeen, jotta tetrationaatti voidaan muodostaa, lisätään jodattua jodiliuosta väliaineen täydentämiseksi.
Amerikan kansanterveysyhdistys ry (APHA) suosittelee kirkkaanvihreällä täydennetyn tetrationaattiliemeen käyttöä salmonellan näytteiden rikastamiseen, koska se on selektiivisempi kuin tetrationaattilieme ja seleniittilieme.
Tetrationaattilieme on yleensä ihanteellinen, kun epäillään Salmonella-suvun bakteerien esiintymistä pieninä määrinä tai kun niitä käytetään väärin altistamalla estäville aineille tai teollisilla prosesseilla, jotka minimoivat niiden elinkelpoisuuden.
Perusta
Läsnä olevat peptonit vastaavat kaseiinin haiman hajotusta ja eläinkudoksen peptistä sulatusta. Ne tarjoavat hiilen, typen ja yleisten ravinteiden lähteen bakteerien kasvulle.
Natriumtiosulfaatti puolestaan reagoi jodatun liuoksen kanssa tetrationaatin muodostamiseksi. Tämä estää kolibakteerien kasvua ja suosii sellaisten bakteerien kehitystä, jotka sisältävät tetrationaattireduktaasi-entsyymiä, muun muassa Salmonella-suku, mutta myös Proteus.
Sappissuolat toimivat myös estävänä aineena useimmille gram-positiivisille ja joillekin gram-negatiivisille bakteereille (kolibakteerit).
Kalsiumkarbonaatti imee myrkylliset aineet, joita syntyy rikkihappoa muodostavan tetrationaatin hajoamisessa. Tässä mielessä kalsiumkarbonaatti neutraloi happamuus pitäen väliaineen pH vakaana.
Kirkkaanvihreässä muodossa tämä aine lisää tetrationaattiliemen selektiivistä tehoa estämällä muita kuin Salmonella-suvun mikro-organismeja.
Valmistautuminen
-Tetrationaatti lieme
Jodi jodiliuos
Punnita:
- 6 grammaa jodia.
- 5 g kaliumjodidia.
Kaliumjodidi liuotetaan noin 5 ml: aan steriiliä tislattua vettä, sitten jodia lisätään vähitellen samalla kun seosta kuumennetaan. Kun se on täysin liuennut, täytetään merkkiin steriilillä tislatulla vedellä, kunnes lopullinen tilavuus on 20 ml.
Perusväliaine tetrationaattiliemelle
Punnitaan 46 grammaa kuivattua väliainetta ja suspendoidaan 1 litraan steriiliä tislattua vettä. Sekoita ja kuumenna, kunnes se on täysin liuennut, se voi kiehua vain muutaman minuutin. Älä autoklaavoi. Elatusaineen emäksen annetaan jäähtyä noin 45 ° C: seen ja siihen aikaan lisätään 20 ml jodattua liuosta.
Kun jodiliuos on lisätty väliaineeseen, se tulee käyttää välittömästi. Jos et halua käyttää koko seosta, toimi seuraavasti:
10 ml elatusainetta jakaantuu putkiin, ja vain näytteisiin siirrostettavaan lisätään 0,2 ml jodattua liuosta.
Niitä, joita ei tule käyttää, voidaan silti säilyttää jääkaapissa, mutta koska väliainetta ei steriloida, ihanteellinen on valmistaa tarkka määrä, jota tarvitaan.
Elatusaineen väri on ennen jodistetun jodiliuoksen lisäämistä maidonvalkoinen valkoisella saostumalla ja lisäyksen jälkeen se on ruskea tiheän sakan kanssa. Havaittu sakka on normaali ja vastaa kalsiumkarbonaattia, joka ei liukene. Elatusaineen lopullinen pH on 8,4 ± 0,2.
-Tetrationaatti liemivariantti kirkkaanvihreällä
Kirkkaanvihreän tetrationaattiliemen valmistamiseksi suoritetaan kaikki edellä kuvatut vaiheet, mutta lisäksi seokseen lisätään 10 ml kirkkaanvihreästä liuoksesta, joka on valmistettu 0,1%: na.
Loistava vihreä
Tämä ratkaisu valmistetaan seuraavasti:
Punnitaan 0,1 g kirkkaanvihreää ja suspendoidaan 100 ml: aan tislattua vettä. Kuumenna kiehumiseen täydellisen liukenemisen aikaansaamiseksi. Varastoi keltapullossa.
Käyttää
Ulosteenäytteiden (ulosteviljely) osalta protokolla on seuraava:
Inokuloidaan 1 g kiinteää ulostetta tai 1 ml nestemäistä ulostetta putkeen 10 ml: lla käyttövalmiita tetrationaattiliemeä. Ravistetaan voimakkaasti ja inkuboidaan aerobisesti 43 ° C: ssa 6 - 24 tuntia.
Seuraavaksi ota 10 - 20 ui liemestä ja alaviljelmästä selektiivisessä väliaineessa salmonellaa varten, kuten SS-agar, XLD-agar, kirkkaanvihreä agar, Hektoen-enteerinen agar, mm.
Samanaikaisesti selektiiviset salmonellan elatusaineet tulisi inokuloida suoran näytteen (ulosteiden) kanssa ilman rikastamista. Tyhjennä peräsuolenäytteenäytteet kerättyä ainetta putkeen ja jatka yllä kuvatulla tavalla.
Elintarvikenäytteiden osalta punnitaan 10 g kiinteää ruokaa tai 10 ml nestemäistä ruokaa ja ympätään pullo 100 ml: lla käyttövalmiita tetrationaattilientä. Jatketaan samalla tavalla kuin yllä on kuvattu, mutta inkuboidaan 37 ° C: ssa.
Kuten voidaan nähdä, näytteen ja liemen välinen suhde on aina 1:10.
QA
Tunnettuja kontrollikantoja voidaan käyttää viljelyalustan testaamiseen. Yleisimmin käytetään ATCC-sertifioituja kantoja.
Käytettävät kannat ovat Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 ja Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Salmonella-kantojen odotetaan olevan erinomaista kasvua, kun taas Escherichia colilla voi olla heikko tai säännöllinen kasvu, ja gram-positiiviset kannat (Enterococcus ja Staphylococcus) ovat osittain tai kokonaan inhiboituneita.
suosituksia
- Koska tämä väliaine ei estä Proteuksen kasvua, jotkut laboratoriot käyttävät 40 mg / l novobiosiinia tämän mikrobikannan kehittymisen estämiseksi. Antibiootti on lisättävä ennen jodiliuosta.
- Valmistettuaan elatusainetta, joka sisältää jodijodiliuosta, inokuloinnin ei pitäisi kestää yli 2 tuntia.
- Jaettaessa väliainetta putkiin, seosta on homogenoitava jatkuvasti muodostuneen sakan uudelleen suspendoimiseksi.
- Vähemmän saastuneissa näytteissä tetrationaattiliemettä inkuboidaan 35 - 37 ° C: ssa, ja erittäin saastuneissa näytteissä suositellaan inkubointia 43 ° C: ssa.
Viitteet
- Conda Pronadisa -laboratorio. 2010. Tetrationaattiliemepohja Müeller-Kauffmannin mukaan. Saatavilla:
- BD Laboratories. 2003. Tetrationaattiliemepohja. Saatavilla:
- Britannia Laboratories. 2015. Tetranate base liemi. Saatavilla:
- BBL Media. 2005. Valmistettu putkissa Salmonella-lajien viljelyä varten.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
- Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Natriumseleniitin ja natriumtetrationaatin elatusaineiden vertailu, molemmat inkuboituna 37 ° C: ssa ja 42 ° C: ssa Salmonella spp: n eristäminen kantajien ulosteista. Rev. Biomed 2003; 14 (4): 215 - 220