TIOGLYKOLLAATTILIEME: PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2026

Tioglykolaattialustassa on rikastuneen väliaineen nestettä johdonmukaisuus. Se tunnetaan lyhenteellä FTM lyhenteestä englanniksi Fluid Thioglycollate Medium. Sen loi Brewer ja muutti vuonna 1944 Vera, joka lisäsi siihen kaseiinipeptonia.

Tällä väliaineella on alhainen hapettumisreduktiopotentiaali, joten sitä ei suositella tiukkojen aerobisten bakteerien kehitykseen, mutta se on ihanteellinen mahdollisten aerobisten, tiukkojen anaerobisten ja tarpeettomien mikroaerofiilisten bakteerien talteenottamiseen.

Tioglykolaattilieme ilman indikaattoria. Näyttää emätinvuodot. Lähde: Bobjgalindo

Tällä väliaineella havaittu korkea suorituskyky monenlaisten mikro-organismien eristämisessä ja talteenotossa on tehnyt sen hyväksyttäväksi Yhdysvaltojen farmakopeassa (USP), virallisessa maatalouskemikeiden liitossa (AOAC) ja Euroopan farmakopeassa (EP).

Nämä organisaatiot suosittelevat sitä farmaseuttisten tuotteiden steriiliyden valvontatutkimuksiin ja erityyppisten näytteiden rikastamiseen.

Cado-tioglykolaatti koostuu hiivauutteesta, haiman kaseiinin sulatuksesta, vedettömästä dekstroosista, L-kystiinistä, natriumkloridista, natriumtioglykollaatista, resatsuriinista ja pienestä määrästä agaria.

Tästä väliaineesta on useita versioita, joista joukossa on: tioglykolaattilieme indikaattorilla, tioglykolaattilieme ilman indikaattoria, tioglykolaattilieme indikaattorilla, joka on rikastettu hemiinillä ja K1-vitamiinilla , ja tioglykolaattilieme kalsiumkarbonaatilla.

Erityisesti hemiinin ja K-vitamiinin kanssa rikastetulla tioglykollaattiliemivariantilla on tarkoitus parantaa hienostuneiden anaerobien kasvua, ja kalsiumkarbonaattia sisältävä tioglykolaattiliemen variantti on käyttökelpoinen vastaamaan mikrobien kasvun aikana syntyneistä hapoista.

Perusta

Tioglykollaattiliemi pidetään ei-selektiivisenä rikastusaineena, koska se sallii useimpien ei-vaativimpien bakteerien kasvun. Ravintotarpeet saadaan hiivauutteella, haiman sulatuksella ja glukoosilla.

Toisaalta, tämä väliaine, vaikka se on liemi, sisältää pienen määrän agaria; Tämä tarkoittaa, että sillä on alhainen hapettumisen vähentämispotentiaali johtuen siitä, että se hidastaa hapen pääsyä siten, että happi vähenee, kun se menee syvemmälle putkeen.

Siksi tämä väliaine on ihanteellinen valinnaisten aerobisten, mikroaerofiilisten ja tiukkojen anaerobisten bakteerien, jälkimmäisten 2, kehittämiseen ilman tarvetta inkuboida näissä olosuhteissa. Sama väliaine säätelee happipitoisuutta väliaineessa, koska sitä ei esiinny putken pohjassa ja riittävä määrä pinnalla.

Samoin tioglykollaatti ja L-kystiini toimivat pelkistysaineina, auttaen estämään bakteerien kehitykselle haitallisten aineiden, kuten peroksidin, kertymistä. Lisäksi nämä yhdisteet sisältävät sulfhydryyliryhmiä (-SH-), neutraloimalla elohopeajohdannaisten, arseenien, estävät vaikutukset muiden raskasmetallien joukossa.

Resatsuriini puolestaan ​​on osoitus oksidin pelkistyksestä. Tämä aine on väritön pelkistyneenä ja vaaleanpunainen hapettuessaan. On indikaattori- ja indikaattorittomia tioglykollaattiliemivariantteja. Sen käyttö riippuu näytteen tyypistä ja laboratorion mieltymyksistä.

Sillä välin natriumkloridi ylläpitää tioglykolaattiliemen osmoottista tasapainoa ja vedetön glukoosin käyttö estää liiallisen kosteuden kuivatussa väliaineessa.

Valmistautuminen

Thioglycollate-lieme indikaattorilla

Punnitaan 29,75 g dehydratoitua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Seoksen annetaan seistä noin 5 minuuttia. Lämmitetään lämmönlähteeseen ja sekoitetaan usein, kunnes se on täysin liuennut.

Kaada väliaine koeputkiin ja autoklaavi 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Anna jäähtyä ennen käyttöä. Tarkista kaupallisen talon sisäosan säilyvyys. Jotkut suosittelevat varastointia huoneenlämmössä pimeässä paikassa, toiset taas valolta suojassa jääkaapissa.

Valmistetun väliaineen pH on 7,1 ± 0,2.

Dehydratoidun väliaineen väri on vaaleanbeige ja valmistettu väliaine on vaalean keltaista, jossa on vähän opasenssia.

Tioglykolaattilieme indikaattorilla, joka on rikastettu hemiinillä ja K-vitamiinilla

On kaupallisia väliaineita, jotka sisältävät jo hemiinia ja K _1- vitamiinia, erityisesti anaerobien viljelyyn.

Jos sinulla ei ole rikastettua väliainetta anaerobien suhteen, voit valmistaa emäksisen tioglykolaattiliemen. Tätä varten _lisätään 10 mg hemiinivetykloridia ja 1 mg K1-vitamiinia jokaisesta väliaineen litrasta. Kuitenkin, jos verta tai seerumia lisätään tioglykollaattiliemeen, hemiinin tai K-vitamiinin lisääminen ei ole välttämätöntä.

Tioglykolaattilieme kalsiumkarbonaatilla

Se tulee kaupallisesti ja on valmistettu lisäyksessä olevien ohjeiden mukaisesti.

Tioglykolaattilieme ilman indikaattoria

Tällä koostumuksella on sama emäksinen tioglykolaatti, mutta se ei sisällä resatsuriinia.

Punnitaan 30 g dehydratoitua väliainetta ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Loppuosa valmisteesta on sama kuin kuvattu indikaattorilla varustetussa tioglykolaattiliemessä.

Käyttää

Tioglykollaattiliemi on hyödyllinen kliinisten näytteiden rikastamisessa, etenkin steriileistä kohdat. Se on hyödyllinen myös ei-kliinisissä näytteissä, kuten kosmetiikassa, lääkkeissä jne.

Nestemäisten näytteiden (kuten CSF, synoviaalineste, muun muassa) inokuloimiseksi näytteet sentrifugoidaan ensin ja otetaan sitten 2 tippaa sedimenttiä ja asetetaan tioglykolaattiliemeen. Inkuboi 35 ° C: ssa 24 tuntia. Jos tässä vaiheessa ei ole kasvua (sameutta), sitä inkuboidaan korkeintaan 7 vuorokautta.

Jos näyte otetaan tamponilla, viljelyväliaine siirrostetaan ensin levyihin ja lopuksi tamponi viedään liemeen, ulkoneva osa jaetaan ja putki korkitaan, jolloin tamponi jää sisälle. Inkuboi 35 ° C: ssa 24 tuntia, korkeintaan 7 päivää.

Kiinteille näytteille homogenoidaan fysiologisessa suolaliuoksessa (SSF) ja siirrostetaan sitten tioglykolaattilieme 2 tipalla suspensiota.

Sitä voidaan joskus käyttää kuljetusväliaineena näytteille, joissa epäillään tiukkoja anaerobia, tai vararikasteluliemiksi.

Tioglykolaattiliememuotoa, jossa on kalsiumkarbonaattia, käytetään kontrollikantojen ylläpitämiseen pidempään, koska sillä on kyky neutraloida glukoosin käytön tuottamat hapot; Nämä hapot ovat myrkyllisiä tietyille bakteereille.

Elatusaineen sameus havaitsee tioglykolaattiliemen kasvun. On suositeltavaa suorittaa Gram-värjäys ja sen jälkeen alaviljelmä ei-selektiivisissä ja selektiivisissä elatusaineissa näytteen tyypistä ja epäillyistä mikro-organismeista riippuen.

QA

Steriiliyden kontrolloimiseksi on suositeltavaa inkuboida yksi tai kaksi liemettä inokuloimatta. Odotettu tulos on kirkas liemi, jossa ei muutu väriä, vaikka putken pinnalla on normaalia nähdä hieman vaaleanpunainen väri.

Laadunvalvontaa varten olisi rokotettava 10–100 CFU sertifioituja kontrollikantoja, kuten Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 114 Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkuboidaan 30-35 ° C: ssa aerobioosissa 24 tunnin ajan, korkeintaan 3 päivän ajan, koska nämä mikro-organismit kasvavat nopeasti.

Hyvää kehitystä odotetaan kaikissa tapauksissa paitsi Micrococcus luteus ja Bacillus subtilis, joissa kehitys voi olla kohtalaista.

Laadunvalvontaan tioglykolaattialustassa rikastettu hemiinillä ja K-vitamiinin ₁, ohjaus kannat Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 ja Bacteroides fragilis ATCC 25285, voidaan käyttää. Odotettu tulos on tyydyttävä kasvu.

suosituksia

- Toisinaan voidaan havaita, että indikaattorilla olevan tioglykolaattiliemen pinta muuttuu vaaleanpunaiseksi; Tämä johtuu väliaineen hapettumisesta. Jos vaaleanpunainen väri kattaa vähintään 30% koko liemestä, sitä voidaan lämmittää vesihauteessa 5 minuutin ajan, jäähdyttää uudelleen ja käyttää.

Tämä poistaa absorboituneen hapen ja palauttaa väliaineen alkuperäiseen väriinsä. Tämä toimenpide voidaan tehdä vain kerran.

- Aerobisten bakteerien kasvun parantamiseksi inkuboi kannen kanssa hieman löysällä. On kuitenkin edullista käyttää tähän tarkoitukseen aivojen sydäninfuusiolieme tai trypticase-soijaliemi tiukkojen aerobien asianmukaiseksi kehittämiseksi.

- Väliaineen jäätymistä tai ylikuumenemista tulisi välttää, koska molemmat olosuhteet vahingoittavat väliainetta.

-Suora valo vaurioittaa elatusainetta, se on säilytettävä valolta suojattuna.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. Thioglycollate USP indikaattorilla. 2015.Saatavilla osoitteessa: labBritania.com.
2. Chios Sas -laboratoriot. 2019. Thioglycollate-lieme. Saatavana osoitteessa: quios.com.co
3. Laboratories BD -nestetioglykollaattiväliaine (FTM). 2003.Saatavilla osoitteessa: bd.com/Europe
4. Putkissa valmistetut BBL-alustat anaerobisten mikro-organismien viljelyä varten. Thioglycollate-alusta. 2013.Saatavilla osoitteessa: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.