ORCEIN: PERUSTA JA VALMISTELU - KEMIA - 2026

Orceína on luonnollinen värillinen violetti, uuttaa erilaisista jäkälien kuten Orchilla tai archill, fruticose lichen Rocella tinctoria ja kehräjäkälät Parella pääasiassa. Rocella tinctoriaa löytyy Afrikan ja Amerikan mantereelta, vaikka se voidaan korvata muilla Euroopassa sijaitsevilla lajeilla.

Tätä tahraa on käytetty laajasti sytogeneettisissä tutkimuksissa muinaisista ajoista lähtien. Tässä mielessä etikkahappoa sisältävä oseiinivalmiste otettiin käyttöön LaCourt-konsernissa vuonna 1941, minkä vuoksi sitä kutsuttiin alun perin LaCourt-tekniikkaksi.

Orkeniinin ja askeiiniliuoksen kemiallinen rakenne. Lähde: Wikipedia.org/ Oguenther de.wikipediassa (Dr. Guenther)

Samoin yksinkertaisuuden ja alhaisten kustannusten vuoksi sitä on käytetty lakman valmistukseen (jäkälistä uutettu tahra) ja histologisiin tutkimuksiin (solujen ja kudosten värjäys).

Useissa tutkimuksissa on käytetty tätä värjäystä yhdessä muiden kemikaalien, kuten ammoniakkipikarminaatin ja etikkahapon kanssa, elastisten kuitujen ja kromosomien värjäämiseen. Orceiinia käytetään edelleen eläinten ja kasvien sytogeneettisissä tutkimuksissa.

Äskettäin Silva et ai. 2017 käytti tätä värjäystä onnistuneesti tarkkailemaan erilaisia ​​muutoksia, jotka tapahtuvat peukalon ihon kimmoisissa kuiduissa Chilen vanhemmilla aikuisilla. Tämä tutkimus paljasti kuinka peukalon kuidut muuttuvat ikääntyessä.

Tässä mielessä elastisten kuitujen havaittiin olevan väriltään ruskehtavan mustia yli 80-vuotiailla henkilöillä; kun taas nuorimmassa (60-vuotiaasta) heidät nähdään punertavanruskeina. Sytoplasma ja muut solurakenteet muuttuvat kellertävänvihreäksi.

Tämä sallii vahvistaa elastisten kuitujen läsnäolon ja tilan niiden muodon, määrän ja eheyden suhteen. Toisaalta on myös osoitettu, että orcein on suuri apu aneurysmien tunnistamisessa ja valtimotulehduksen diagnosoinnissa muiden sairauksien lisäksi.

Perusta

Orcein on osa oksatsiiniryhmää väriaineita, ja värjäys perustuu sen affiniteettiin DNA: han. Väriaine sitoutuu tämän molekyylin negatiiviseen varaukseen, jota edustaa fosfaattiryhmä. Siksi kromosomit värjätään violetilla.

Muut solun rakenteet saavat kuitenkin eri värin. Erityisesti elastisten kuitujen tapauksessa ne ovat väriltään punertavanruskeita, solun ytimet sinisestä tummaan violettiin, kun taas kollageeni ei värjää.

Tästä syystä orkeiinia käytetään värjäämään kromatiinia ja erottelemaan sukupuoli joillakin kärpäsenlajeilla. Samoin hepatiitti B -antigeenien tuottama ydin ja jotkut maksan sulkeumat voidaan värjätä.

Orcein-liuoksilla on erityisiä tehtäviä värjäyksessä. Orcein A: n tehtävänä on pehmentää solujen kalvoja, aiheuttaa niiden kuolemaa ja halvata niiden jakautumisprosessi. Sillä välin orkesiini B on vastuussa värjäytymisen saattamisesta loppuun tarttuessaan kromosomeihin.

Valmistautuminen

1-prosenttinen asetoorkeeniliuos

Asetoaseiinin 1-prosenttisen liuoksen valmistamiseksi liuotetaan 2 grammaa asekeiinia 45 ml: aan jääetikkaa, edullisesti kuumaa, ja lisätään huoneenlämpötilassa 55 ml tislattua vettä.

Sitten sitä sekoitetaan jatkuvasti homogenoimaan liuos antamaan myöhemmin sen levätä, kunnes se jäähtyy. Lopuksi sitä säilytetään 4ºC: n lämpötilassa tummissa purkeissa. Tätä valmistetta käytti Flores 2012, tarkkailemaan lehmän munasolujen kypsymisvaiheita.

Tässä tapauksessa esimerkiksi asetoaseiini-liuos asetetaan kudokselle, joka on aikaisemmin kiinnitetty etikkahappo-etanoliin 24 tunniksi. Tämä värjäysprosessi suoritetaan 30 minuutin ajan ja kudos värjäytyy myöhemmin.

Samoin sitä voidaan käyttää monisoluisten kudosten organelien tunnistamiseen. Tällöin posken limakalvon leviäminen värjätään tipalla asetonorcesiiniliuosta, peitelasi asetetaan objektilasille ja solun ydin alarakenteineen voidaan välittömästi havaita.

Laktoproponinen liuos - 1%

Lisäksi otseiinia voidaan valmistaa muiden kemikaalien, kuten maitohapon ja propionihapon kanssa. Tätä varten liuotetaan yksi gramma oseiinia esisekoitettuun liuokseen huoneenlämpötilassa 23 ml maitohappoa ja 23 ml propionihappoa; tilavuus täytetään tislatulla vedellä 100 ml: n tilavuuteen asti.

Tällä laktopropionisella otseiiniliuoksella on mahdollista tarkkailla kasvisolujen mejoottisen jakautumisen eri vaiheita. Tässä tapauksessa ennalta kiinteä ja hydrolysoitu näyte asetetaan 15 minuutiksi laktopropioniseen asetseiniliuokseen ja kudos levitetään mikroskooppilevyille.

Duquen vuoden 2016 polygeenisiä kromosomeja koskevassa tutkimuksessa hän käytti valmistetta, joka sisälsi 2 grammaa etikkahapossa laimennettua askeiinia ja 85% maitohappoa, laimennettuna 65% etikkahappoliuoksella. Lopuksi hän tarkasteli kromosomeja Drosophila melanogasterin sylkirauhasissa.

Orcein A ja Orcein B

On tärkeää huomata, että näytteestä ja arvioitavasta riippuen valmistetaan sopiva oseiiniliuos. Siten esimerkiksi 1 N suolahappoa lisätään orkesiini A -liuokseen jakautuvien solujen tarkkailemiseksi.

Samalla kun asetseiini B -liuos liuotetaan 45-prosenttiseen etikkahappoon. Tämä tekniikka on lyhennetty värjäysmenetelmä ja sitä käytetään yleensä lisäaineena kromosomaalisten rakenteiden värjäykseen.

Lopulliset ajatukset

Lecanoran, Parmelian ja Umbilicarian kaltaisia ​​jäkälöitä, kuten Lecanora, Parmelia ja Umbilicaria, on löydetty jo vuosisatojen ajan Amerikan mantereen maista, kuten Argentiina, jotka ovat suuria orkeiinilähteitä. Myös Euroopan alueet, kuten Kanariansaaret, olivat tuolloin suuria orkilla-tuottajia.

Tuotetta vietiin saman maanosan muihin kaupunkeihin, kuten Genovaan, ja muihin maihin, kuten Englantiin, kun taas Hollanti monopolisti lakmuksen valmistuksen orkillasta. Siksi tätä jäkästä vähennettiin myöhemmin, kunnes se oli pian sukupuuttoon kuollut.

Tämä johti orkilla korvaamiseen muilla kasveilla, joilla oli väriaineominaisuuksia. Synteettisten väriaineiden esiintyminen kuitenkin osaltaan lopetti kaupan tämän orkeiinilähteen jäkälän kanssa.

Tämä oli mahdollista Cocqin ansiosta, joka kuvasi vuonna 1812 orkeiinin synteesiä ja tiesi sen sitten syntetisoivan fenoliyhdisteen nimeltä orcinoli. Tästä huolimatta luonnollinen otseiini on kuitenkin edelleen suositeltavin.

Tämä voi johtua siitä, että orcinoli on erittäin voimakkaasti tuoksuva yhdiste, ja sen pitkäaikainen altistuminen voi aiheuttaa terveysriskejä, kuten hajujen havaitsemiskyvyn menetyksen. Nämä aivolisäkkeen vauriot voivat siirtyä väliaikaisesta pysyväksi, mitä suurempi altistus on.

Viitteet

1. Ortega L, García R, Morales C. "Sienien tuottaman lakkaasin käyttö mikrobiologisten väriaineiden (orkeniini ja kristallivioletti) hajottamiseen." Nuoret tieteessä 2. 2015; 633-637. Saatavana osoitteessa: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína ja elastiset kuidut. Lääketiede (Buenos Aires) 2003; 63: 453 - 456. Saatavana osoitteessa: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Peukalon lentävän kasvojen ihon histologiset ominaispiirteet chileläisillä, joilla on Dactylogram-häipyminen. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107 - 1113. Saatavana osoitteessa: scielo.conicyt.
4. Orrillo M, Merideth B. "Perunan lisääntymisbiologia ja sytogenetiikka." Kansainvälinen perunakeskus (CIP). Tekninen käsikirja. Saatavana osoitteessa: research.cip.cgiar.org/
5. Flores F. "Lehmän munasolujen (bos taurus) kerääminen, viljely ja in vitro kypsytys Bolivian ylängöllä.". Altiplanon kansallinen yliopisto, Puno-Peru; 2012.Saatavilla osoitteessa: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Polyteeniset kromosomit: Katsaus endoreduplikaation ilmiöön. Kolumbian kansallinen yliopisto, Medellín; 2016. Saatavana osoitteessa: edu.
7. Camarena F. Solu- ja molekyylibiologia. Harjoitteluopas. Kalifornian Bajan autonominen yliopisto. 2017.Saatavilla osoitteessa pez.ens.uabc.mx.
8. FAO / IAEA. 2018. Ohjeet villien ja kasvatettujen Anastrepha ludens (Loew) -kärpästen erottamiseksi normaaleista kannoista (”bioseksuaaliset”) ja geneettisesti sukupuolisista kannoista (Tapachula-7), säteilytetyt ja säteilyttämättömät. Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF ja Soto García DN YK: n elintarvike- ja maatalousjärjestö. Rooma, Italia, 95 sivua
9. Orseiiniin. (2018, 30. marraskuuta). Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. Kuulemispäivämäärä: 03:38, 31. heinäkuuta 2019 es.wikipedia.org.
10. Merck Millipore. (2018, 16. heinäkuuta). Orcein-mikroskopia sertistainimikroskopiaa varten. Saatavana osoitteessa merckmillipore.com