HEMATOKSYLIINI-EOSIINIVÄRJÄYS: OMINAISUUDET, KÄYTÖT, TEKNIIKAT - KEMIA - 2026

Hematoksyliini - eosiinilla on värjäys tekniikalla käyttäen yhdistelmä väriaineiden hematoksyliinillä ja eosiinilla. Tämä väriainepari muodostaa täydellisen duon, koska hematoksyliini toimii emäksisenä väriaineena ja eosiini on happoväriaine.

Emäksisten tai happovärien merkitseminen ei viittaa liuoksessa saatuun pH: hon, vaan puhuu pikemminkin vallitsevasta suhteesta niiden hallussa oleviin anionisiin tai kationisiin varauksiin tai kromoforiryhmän sijaintiin nähden.

Hematoksyliini - eosiinilla (HE) värjätty silikaattinen sarakkeinen epiteeli Lähde: Todd Straus ja Vladimir Osipov

Tässä mielessä hematoksyliiniä pidetään emäksisenä (kationisena) väriaineena, ja siksi sillä on affiniteetti happorakenteisiin, kuten solujen ytimeen. Vaikka eosiinilla, joka on happo (anioninen) väriaine, on affiniteetti emäksisiin tai emäksisiin rakenteisiin, kuten solusytoplasmaan.

Tästä syystä tätä väriaineyhdistelmää käytetään laajalti kudosten värjäykseen, koska se mahdollistaa ytimien ja sytoplasmien erottamisen selvästi. Ytimet värjäävät tummansiniseltä tai violetti ja sytoplasma vaaleanpunainen.

Hematoksyliini-eosiinivärjäys on yksi eniten käytettyjä värjäystekniikoita histologian ja sytologian alueella johtuen sen helposta käsittelystä ja alhaisista kustannuksista. Sitä käytetään visualisoimaan soluja, paksuja hermokuituja ja tiettyjen mikro-organismien läsnäoloa kudoksissa, kuten mm. Loiset, sienet ja bakteerit.

ominaisuudet

hematoksyliini

Hematoksyliini on neutraali väriaine. Komponentti, joka antaa värin (kromofori), sijaitsee kuitenkin molekyylin kationisessa tai emäksisessä keskuksessa. Siksi sen affiniteetti happorakenteisiin. Sen kemiallinen kaava on C ₁₆ H ₁₄ O ₆ ja sen tieteellinen nimi on 7,11b-dihydroindeno kromeeni-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Se värjää pääasiassa solujen ytimiä, koska ne ovat erittäin rikkaita nukleiinihapoista. Se voi myös värjätä virusperäisiä sytoplasmisia sulkeumia.

Jotta hematoksyliini värjäytyy, sen on oltava hapettuneessa tilassa ja sidottu metalliin. Jälkimmäinen palvelee kiinnittymistä kudokseen, eli se toimii peiteaineena.

Kun hematoksyliini hapetetaan, sitä kutsutaan hemateiiniksi. Hapetus saavutetaan altistamalla reagenssin happea (vanheneminen) tai aineilla, jotka auttavat sen hapettumista (kemiallinen hapettuminen).

eosiini

Eosiini on väriaine, joka värjää punaisella tai vaaleanpunaisella. Se ei liukene veteen, vaikka on olemassa vesiliukoinen versio. Yleensä eosiini valmistetaan liuottamalla alkoholiin (95 ° etanoli).

Se värjää sytoplasmat, lihaskuidut, sytoplasmisen organelit ja kollageenin, mutta ei värjää solutumia. Tämä johtuu siitä, että se on negatiivisesti varautunut, siksi sillä on affiniteetti positiivisesti varautuneisiin rakenteisiin.

Eosiinia on "Y" ja "B" kahta tyyppiä. Eosiini "Y" tunnetaan keltaisena eosiinina. Sen tieteellinen nimi on tetrabromi fl uorescein ja sen kemiallinen kaava on C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅.

Toisaalta eosiinia "B" kutsutaan joskus sinertäväksi erytrosiiniksi B. Sen tieteellinen nimi on dibromodynitro fl uorescein ja kaava on C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O- ₉. Molemmat ovat hyvin samankaltaisia, ja ero yhden tai toisen käytön välillä ei ole oikeasti havaittavissa. Kuitenkin suosituin on eosiini "Y".

Eosiinilla on ominaisuus erottaa elävä ja kuollut solu, koska se kykenee ylittämään membraanin värjätäkseen sytoplasmansa vain solujen ollessa kuolleina, jolloin solun sytoplasma jättää väritöntä, jos se pysyy elossa.

Sovellukset

Hermokudoksen värjäys

Paksut hermokuidut voidaan värjätä ja tunnistaa hematoksyyli-eosiinilla. Se ei ole kuitenkaan hyödyllinen ohuiden hermokuitujen värjäyksessä, koska jälkimmäisen visualisoimiseksi tarvitaan hopeavärjäys.

Histologiset ihoosien tahrat

Ihon kiimaisen kerroksen värjäyksessä vaikuttava väriaine on eosiini, koska tällä tasolla soluilla ei ole ydintä.

Ihon rakeisessa kerroksessa hematoksyliini värjää keratohyalinrakeet voimakkaasti rakeissa olevien solujen sisällä. Päinvastoin, ihon selkäkerros on värjätty heikosti hematoksyliinillä, kun taas pohja- tai alkiokerros on melko värjätty.

Eosiini värjää kaikkien solujen sytoplasman ja värin voimakkuus voi vaihdella kerroksittain.

Ulosteenäytteiden värjäys hematoksyyli-eosiinilla

Gómez ym., Vuonna 2005 osoittivat, että hematoksyliini-eosiinivärjäys oli tehokkaampi tunnistaa Entamoeba histolytica- ja Entamoeba-erojen aiheuttamat amoebiasis-tapaukset kuin tuore visualisointimenetelmä (suolaliuos ja lugol) potilailla, joilla on akuutti ripulitauti.

Sen on myös osoitettu olevan erittäin herkkä erittymään erytrophagosytoosiin (ameryet, jotka ovat imeytyneet punasoluihin).

Histologisten leikkeiden värjäys infektion diagnoosiksi

Walwyn ym., Vuonna 2004 ehdottivat histologisten tahrojen käyttöä infektiota aiheuttavien mikro-organismien havaitsemiseksi.

Hematoksyliini-eosiinivärjäystä käyttämällä he pystyivät visualisoimaan Clostridiumin, Actinomycesin, spirillaen tai Candidan aiheuttamat infektiot. He pystyivät myös tarkkailemaan loisen Sarcoptes escabiei esiintymistä ihon osissa ja sytomegaloviruksen ja herpeksen aiheuttamia virusten sulkeumia eri kudosten osissa.

Tekniikat

Histologisiin näytteisiin

Histologinen leikkausvärjäys kulkee sarjan vaiheiden läpi. Ensimmäinen asia on hankkia histologinen osa. Tämä on vahattava, jotta myöhemmin saadaan leikkeet (erittäin hienot) mikrotomilla. Tekniikka koostuu seuraavista vaiheista:

1-Ylimääräisen parafiinin poistaminen: tähän voidaan käyttää ksyloolia tai Heme-D: tä, upota 3–5 minuutiksi.

Näytteen uudelleenhydratointi: Tämä saavutetaan upottamalla näyte eri alkoholipitoisuuksiin (etanoli) alenevassa järjestyksessä (100 °, 90 °, 70 °). Kaikissa tapauksissa 7 minuutin ajan.

3-Ylimääräisen alkoholin poistaminen: tätä varten se upotetaan veteen 7 minuutiksi.

4-värjäys hematoksyliinillä: näyte upotetaan 6-10 minuutiksi astiaan, joka sisältää hematoksyliiniä. Valotusaika riippuu näytteen koosta ja paksuudesta.

5-ylimäärän hematoksyliinin eliminointi: se pestään vedellä 5 minuutin ajan ja sitten suoritetaan nopea kulku (10 - 20 sekuntia) happaman alkoholin läpi. Myöhemmin se pestään uudelleen vedellä 5 minuutin ajan. Sitten se upotetaan etanoliin 96 °: seen 1 minuutiksi.

6-värjäys eosiinilla: tätä varten näyte upotetaan 5 minuutiksi eosiinialustalle.

Näytteen 7-nestehukka: tätä varten se menee alkoholialustojen (etanoli) läpi, mutta tällä kertaa nousevassa järjestyksessä. (70 °, 90 °, 100 °). (Vastaavasti 5 sekuntia, 5 sekuntia, 1 minuutti).

8 - Näytteen selkeyttäminen: tätä varten se altistetaan ksylolille 5-10 minuutin ajan ja kuivataan sulkemiseksi pysyvästi Kanada-balsamilla tai muulla vastaavalla materiaalilla.

Ulosteenäytteille, jotka etsivät

Levy tehdään objektilasiin potilaan ulosteesta ja kiinnitetään 80-prosenttisella alkoholilla 5 minuutiksi. Arkki upotetaan hematoksyliiniin 5 minuutiksi ja pestään välittömästi vedellä.

Seuraavaksi se upotetaan nopeasti happamaan alkoholiin ja sitten ammoniakkiveteen. Se pestään vedellä. Se on värjätty 5 minuutin ajan eosiinissa. Näyte dehydratoidaan, kuten tekniikan tasossa selitetään, ja lopuksi huuhdellaan ksyleenillä.

Reagenssien valmistus

- Hematoksyliini

Liuota yhteen litraan tislattua vettä 50 grammaa kalium- tai ammoniumalumiinisulfaattia. Kun se on liuennut täysin, lisää 1 gramma kiteytettyä hematoksyliiniä. Kun se liukenee täysin, lisätään 1 g sitruunahappoa yhdessä 50 g kloraalihydraatin ja 0,2 g natriumjodaatin kanssa.

Seosta keitetään 5 minuutin ajan, sitten sen annetaan jäähtyä ja suodatetaan mahdollisten jäljelle jääneiden kiinteiden hiukkasten poistamiseksi. Näin valmistettu reagenssi voidaan käyttää välittömästi.

- Eosin

Se voidaan valmistaa alkoholipohjaisella pohjalla tai vesipohjaisella pohjalla.

Alkoholinen eosiini

Liuota 0,5 grammaan eosiinia "Y" 100 ml: aan etanolia 95 °: ssa. Lisää sitten muutama tippa jääetikkaa.

2% vesipitoista eosiinia

Liuota 1250 ml: aan tislattua vettä 25 grammaa vesiliukoista eosiinia "Y". Lisää sitten muutama tippa jääetikkaa.

Hapan alkoholi

Mitataan 0,5 ml väkevää suolahappoa ja täytetään 100 ml: ksi absoluuttisella alkoholilla.

Ammoniakkivettä

Mitataan 0,5 ml väkevää ammoniakkia ja täytetään 100 ml: ksi tislatulla vedellä.

Viitteet

1. Navarrete, G. Ihon histologia. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130 - 133. Saatavana osoitteessa: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Entamoeba histolytica / E: n tunnistaminen Poikkea tuoreella amööbitekniikalla verrattuna sen värjäytymiseen hematoksyyli-eosiinilla akuutissa ripulissa. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Saatavana osoitteessa: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Histologisten tekniikoiden hyödyllisyys infektion diagnoosissa anatomisissa näytteissä. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Saatavana osoitteessa: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW -reagenssit. Hematoksyliini-eosiinin tahra. 2017, Espanja. Saatavana osoitteessa itwreagents.com
6. Eosiini. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 7. marraskuuta 2018, 08:18 UTC. 4. elokuuta 2019, 22:13 fi.wikipedia.org
7. "Hematoksyliini." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 3. toukokuuta 2019, 11:23 UTC. 4. elokuuta 2019, 22:48 wikipedia.org