BAIRD PARKER AGAR: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

Agar Baird Parker on kiinteässä elatusaineessa, selektiivinen ja ero kulttuuriin. Se luotiin vuonna 1962 koagulaasipositiivisten stafylokokkien (Staphylococcus aureus) havaitsemiseksi ja laskemiseksi.

Se koostuu haiman kaseiinin hydrolysaatista, lihauutteesta, hiivauutteesta, litiumkloridista, glysiinistä, natriumpyruvaatista, kaliumtelluritista, agarista ja munankeltuaisen emulsiosta.

Tyypilliset Staphylococcus aureus -pesäkkeet Baird Parker-agarissa. Lähde: Daizy John

Baird Parker Agar perustuu S. aureuksen kykyyn vähentää telluuria ja tuottaa lesitiinaasia. Molemmat ominaisuudet muodostavat pesäkkeen, jolla on erityisiä ominaisuuksia tälle lajille. Siksi se on erittäin tehokas havaitsemaan tämä mikro-organismi.

S. aureuksen tyypilliset pesäkkeet ovat mustia tai tummanharmaaja, värittömällä reunalla ja niitä ympäröivällä vaalealla halogeenilla, joka erottaa ne muista mikro-organismeista. Tätä patogeeniä löytyy kliinisistä näytteistä, vesistä, kosmetiikasta ja raaka- tai keitetyistä ruuista.

Sen diagnosointi tai havaitseminen on äärimmäisen tärkeää, koska se tuottaa monenlaisia ​​patologioita, kuten ruokamyrkytys, ihottuneen ihon oireyhtymä, toksisen sokin oireyhtymä, paiseet, aivokalvontulehdus, septikemia, endokardiitti.

Perusta

Ravitseva voima

Haiman kaseiinihydrolysaatti, lihauute ja hiivauute ovat ravinteiden, vitamiinien ja mineraalien lähteitä, joita tarvitaan yleiseen mikrobien kehitykseen, kun taas pyruvaatti ja glysiini ovat yhdisteitä, jotka tukevat Staphylococcus aureus -bakteerin erityistä kasvua.

Valikoiva

Baird Parker -gagar on selektiivinen, koska se sisältää aineita, jotka estävät mukana olevan kasviston kasvua edistäen samalla S. aureuksen kehitystä. Inhiboivat yhdisteet ovat litiumkloridi ja kaliumtelliitti.

Ero

Tämä väliaine mahdollistaa S. aureuksen erottamisen muista koagulaasinegatiivisista stafylokokkista. S. aureuksella on kyky pelkistää telluriitti vapaaseen metalliseen mustaan ​​telluuriin, muodostaen mustia tai tummanharmaisia ​​pesäkkeitä.

Samoin munankeltuainen antaa substraatit osoittamaan lesitiini- ja lipaasientsyymin läsnäolon. S. aureus on lesitiinipositiivinen, ja siksi pesäkkeen ympärillä havaitaan selkeä halogeeni, mikä osoittaa, että lesitiini hydrolysoitui.

Tässä mielessä kiiltävien mustien tai tummanharmien pesäkkeiden esiintyminen tällä agarilla, joiden ympärillä on vaalea halo, osoittaa S. aureuksen esiintymisen.

Jos muodostuu saostusvyöhyke, se osoittaa lipaasiaktiivisuutta. Jotkut S. aureus -kannat ovat lipaasipositiivisia ja toiset negatiivisia.

Siinä tapauksessa, että S. aureus on lipaasipositiivinen, mustan tai tummanharmaan pesäkkeen ympärillä havaitaan läpinäkymätöntä aluetta ja sitten kevyttä halogeeniä lesitiinaasin vaikutuksesta.

Muista bakteerikologeista kuin S. aureus, jotka kykenevät kasvamaan tällä väliaineella, kehittyvät värittömät tai ruskeat pesäkkeet, joissa ei ole ympäröivää halogeenia.

Epätyypilliset mustat pesäkkeet voidaan nähdä myös värittömällä reunalla tai ilman, mutta ilman vaaleaa haloa. Näitä pesäkkeitä ei tulisi ottaa huomioon, ne eivät vastaa S. aureusta.

Valmistautuminen

Munankeltuaisen emulsio

Ota tuore kananmuna, pese se hyvin ja aseta se 70-prosenttiseen alkoholiin 2-3 tunniksi. Sitten muna avataan aseptisesti ja valkoinen erotetaan varovasti keltuaisesta. Sen jälkeen otetaan 50 ml keltuaista ja sekoitetaan 50 ml: n kanssa steriiliä fysiologista liuosta.

Kaliumtelliitti 1% paino / tilavuus

Jotkut liikerakennukset myyvät käyttövalmiina 1-prosenttista kaliumtelliittiä. Se lisätään väliaineeseen ennen kuin väliaine jähmettyy.

Tämän liuoksen valmistamiseksi laboratoriossa punnitaan ja liuotetaan 1,0 g kaliumtelluuria yhteen osaan vettä. Seuraavaksi vesimäärä täydennetään 100 ml: ksi. Liuos on steriloitava suodatusmenetelmällä.

Kasvatusalustan valmistus

Punnitaan 60 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 940 ml: aan tislattua vettä. Anna seoksen seistä noin 5-10 minuuttia.

Levitä lämpöä sekoittamalla väliainetta usein liukenemisprosessin parantamiseksi. Kiehauta minuutin ajan. Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Annetaan seistä, kunnes se saavuttaa 45 ° C: n lämpötilan, ja lisätään 50 ml munankeltuaisen emulsiota ja 10 ml 1-prosenttista telluuria. Sekoita hyvin ja kaada 15 - 20 ml steriileihin Petri-maljoihin.

Annetaan jähmettyä, tilataan käänteisesti plakeiksi ja säilytetään jääkaapissa käyttöönottoon saakka.

Valmistetun väliaineen lopullisen pH: n on oltava 6,8 ± 0,2.

Ennen näytteen siementtämistä odota, että levy saavuttaa huoneenlämpötilan. Siemenet levyt juoksuttamalla tai kylvöllä Drigalski-lastalla.

Kuivatun väliaineen väri on vaaleanruskea ja valmistetun väliaineen väri on vaalean keltaista.

Käyttää

Kliiniset näytteet

Kliiniset näytteet kylvetään suoraan, jolloin osa materiaalista purkautuu levyn toiseen päähän, ja sieltä se raidataan uupumalla. Inkuboi 24 - 48 tuntia 35-37 ° C: ssa.

Ruoanäytteet

Punnitaan 10 g ruuanäytettä ja homogenoidaan 90 ml: ssa 0,1-prosenttista peptonivettä, josta tehdään tarvittaessa laimennoksia. Inokuloi levyt kolmena kappaleena 0,3 ml: lla valmistettuja liuoksia ja siemen pintaan Drigalski-lastalla. Inkuboi 24 - 48 tuntia 35-37 ° C: ssa.

Tämä menetelmä mahdollistaa saatujen tyypillisten pesäkkeiden laskemisen ja on ihanteellinen, kun S. aureuksen esiintymisen epäillään olevan yli 10 CFU / g / ml näytettä.

Jos S. aureuksen määrän epäillään olevan pieni tai mukana olevaa kasvistoa on paljon, on suositeltavaa rikastaa näytettä tryptikaasi-soijaliemessä 10 -%: isella NaCl: lla ja 1%: lla natriumpyruvaattia. Tämä edistää S. aureuksen kasvua ja estää mukana olevan kasviston kehittymistä. Sameat putket kylvetään Baird Parker-agarille.

Vesinäytteet

Steriloidussa tyhjösuodatusjärjestelmässä suodatetaan 100 ml tutkimusvettä ja sen jälkeen 0,4 mikronin mikrohuokoinen kalvo poistetaan steriileillä pihdillä ja asetetaan Baird Parker -levylle. Inkuboi 24 - 48 tuntia 35-37 ° C: ssa. Tämä tekniikka mahdollistaa tyypillisten S. aureus -pesäkkeiden laskemisen.

QA

Tunnettuja kantoja, kuten Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 tai Proteus mirabilis ATCC 43071, voidaan käyttää Baird Parker-agarin laadun arviointiin.

S. aureus ATCC -kantojen tiedetään vähentävän telluuria, ja ne ovat lipaasi- ja lesitiinaasipositiivisia. Siksi on oltava tyydyttävää kehitystä ja kasvaa kuperia pesäkkeitä, joissa on musta keskusta ja väritön reuna, läpinäkymättömällä halogeenilla ja vaalealla uloimmalla halogeenilla.

S. epidermidiksen odotetaan puolestaan ​​kehittyvän heikosti tällä väliaineella, ruskehtava-harmaan tai mustan pesäkkeineen ilman vaaleaa halogeenia.

E. colin ja P. mirabiliksen odotetaan estävän kokonaan tai osittain. Kasvatuksen tapauksessa ruskeat pesäkkeet kehittyvät ilman läpinäkymätöntä aluetta tai vaaleaa halogeenia.

suosituksia

- Väliainetta ei tule kuumentaa, kun telluriitti ja munankeltuainen on lisätty.

- Munankeltuaisen emulsion valmistelu ja sen lisääminen keskelle on erittäin haavoittuva vaihe saastumiseksi. On noudatettava erityistä varovaisuutta.

-Jos siellä on tyypillisiä S. aureuksen pesäkkeitä, se tulisi vahvistaa asettamalla koagulaasikoe mainittuun kantaan.

-Jos koagulaasin suhteen on epäilyttäviä tuloksia, muut varmennustestit tulisi asentaa.

- Ole varovainen, ettet sekoita tyypillisiä S. aureus -pesäkkeitä epätyypillisiin mustiin pesäkkeisiin.

Viitteet

1. Wikipedian avustajat. Baird-Parker-agar. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 15. maaliskuuta 2017, kello 19:36 UTC. Saatavana: wikipedia.org/ Käytetty 18. helmikuuta 2019.
2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006.Saatavilla osoitteessa: bd.com
3. Britannia Laboratories. Baird Parkerin agarpohja. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Saatavana osoitteessa:
5. Britannia Laboratories. Kaliumtelliitti. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Enterotoksigeenisen Staphylococcus aureus tyypin A kuljetus ruokatorvien nenä- ja nieluväripeitteissä. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelan standardi Covenin 1292-89. (1989). Elintarvikkeita. Staphylococcus aureuksen eristäminen ja laskeminen. Saatavana osoitteessa: sencamer.gob.ve