BHI-AGAR: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2025

BHI-agaria tai Brain Heart Infusion agaralustalla on ravintoaine kiinteä kulttuuriin. Espanjan kielessä me kutsumme sitä aivojen sydämen infuusio-agariksi. Se on ei-selektiivinen viljelyväliaine, mikä tarkoittaa, että kaikentyyppiset gram-positiiviset ja gram-negatiiviset bakteerit voivat kehittyä, samoin kuin jotkut hiiva- ja rihmasienet.

Se koostuu naudanlihan aivojen ja sydämen infuusiosta, pepsistä hydrolysaatista eläinkudoksista, kaseiinin haiman hydrolysaatista, natriumkloridista, glukoosista, dinatriumfosfaatista ja agarista.

BHI-levyt. Lähde: Kuva kirjoittanut MSc. Marielsa Gil.

On huomattava, että BHI-agar on yksi bakteriologian laboratorioissa yleisimmin käytettyjä elatusaineita. Sitä voidaan käyttää ilman lisäravinteita primääriviljelmänä, muista selektiivisistä väliaineista saatujen pesäkkeiden alaviljelmänä tai kantojen ylläpitämiseksi laboratoriossa.

Toisaalta se on ihanteellinen väliaine käytettäväksi emäksenä rikastettujen väliaineiden, kuten veriagarin ja suklaagarin valmistuksessa. Molemmat ovat ihanteellisia vaativien mikro-organismien eristämiseen ravitsemuksellisesta näkökulmasta. On kuitenkin huomattava, että koska se sisältää glukoosia, se ei sovellu hemolyysikuvioiden tarkkailuun.

Samoin BHI-agaria voidaan käyttää erityisten väliaineiden valmistukseen vaikeasti kasvavien patogeenisten mikro-organismien eristämiseksi tavallisissa väliaineissa, muun muassa Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae ja Histoplasma capsulatum.

Antibioottilisäaineella BHI-agarista tulee selektiivinen väliaine sienten eristämiseksi.

Perusta

Se on ravitseva kasvatusliuos maltillisesti vaativien mikro-organismien eristämiseksi, ja sen rikastuvuutta voidaan lisätä lisäämällä verta ja muita ravintolisäaineita.

Se on ei-selektiivinen viljelyelatusaine, joten se sallii useimpien gram-positiivisten ja gram-negatiivisten bakteerien sekä joidenkin sienten kasvun. Se voidaan kuitenkin tehdä selektiiviseksi lisäämällä antibiootteja.

Elatusaine sisältää vasikan aivojen ja sydämen infuusion, eläinkudosten pepsistä hydrolysaattia ja kaseiinin haiman hydrolysaattia; Kaikki nämä yhdisteet toimivat vitamiinien, aminohappojen, typen ja hiilen lähteinä.

Glukoosi on hiilihydraatti, joka tarjoaa energiaa mikro-organismeille, kun ne ovat käyneet sitä. Samaan aikaan natriumkloridi ja dinatriumfosfaatti ylläpitävät osmoottista tasapainoa ja tarjoavat pH: n, joka on lähellä neutraalisuutta. Lopuksi agar antaa keskimääräisen kiinteän konsistenssin.

Valmistautuminen

Punnitaan 52 grammaa kuivattua väliainetta ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Kuumenna seos lämmönlähteeseen kiehumiseen sekoittaen usein liukenemisprosessin aikana.

BHI-agarlevyjä tai -kiiloja voidaan valmistaa ilman lisäaineita.

kiilat

Kiilojen valmistamiseksi palvele valmistetta, kunnes puolet jokaisesta putkesta on täytetty, peitä ja steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan, poistuessaan makaa pohjalle, kunnes ne kiinteytyvät. Säilytä myöhemmin jääkaapissa käyttöön asti.

BHI-kiilat bakteriotekaan. Lähde: Kuva kirjoittanut MSc. Marielsa Gil.

levyt

Liuennut seos autoklavoidaan 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan, sen poistuessaan sen annetaan jäähtyä 50 ° C: seen ja 20 ml väliainetta tarjoillaan steriileissä Petri-maljoissa. Niiden annetaan jähmettyä, käännetään ylösalaisin ja säilytetään jääkaapissa käyttöönottoon asti. Anna levyjen lämmetä huoneenlämpötilaan ennen kylvöä.

Elatusaineen pH: n on pysyttävä 7,4 ± 0,2: ssa.

Raaka väliaine on beige ja valmistettu väliaine on vaalean keltaista.

Valmistelu veriagaria

Elatusaineen steriloinnin jälkeen jäähdytetään lämpötilaan noin 45-50 ° C, lisää sitten verta (50 ml), sekoitetaan varovasti homogenoimiseksi ja annostele aseptisesti 20 ml jokaisessa Petri-maljassa. Jos lautaselle muodostuu kuplia, kevyempi liekki tulisi kulkea nopeasti kuplien yli niiden poistamiseksi.

Samoin erityisiä väliaineita voidaan valmistaa lisäämällä vastaavat lisäaineet, kun seos saavuttaa lämpötilan 45-50 ° C.

Väliaine pysyy kirsikanpunaisena.

Sovellukset

Käytä ilman lisäravinteita

BHI-agar ilman lisäaineita on käyttökelpoinen primaariviljelmänä ja kylvien, vähän tai keskipitkällä vaativien mikro-organismien kantojen kylvämiseen niiden myöhempää tunnistamista varten.

Koska se on vaalea väliaine, se on ihanteellinen pigmenttien tarkkailuun, ja koska se ei sisällä häiritseviä aineita, sille voidaan suorittaa joitain biokemiallisia testejä, kuten oksidaasi ja katalaasi, tai siitä voidaan asentaa muita biokemiallisia testejä. agaria.

Samoin BHI-agarkiiloja käytetään laajalti kantojen ylläpitämiseen tietyn ajan laboratoriossa (bakterioteca).

Levyjä tai kiiloja, joiden pinnalla kylvään bakteerikantoja, inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 - 48 tuntia. Samaan aikaan sienissä lämpötila ja inkubaatioaika riippuvat haettavan sienen tyypistä.

Perusagarina muiden väliaineiden valmistamiseksi

Tällä pohjalla voidaan valmistaa rikastettuja ja selektiivisiä väliaineita.

rikastettu

Sen päätehtävä on toimia perustana veriagarin valmistukselle rutiinikäyttöön mikrobiologian laboratorioissa. Erityisesti BHI-emäs edistää Streptococcus sp. Sillä on kuitenkin se haitta, että se ei ole sopiva tarkkailemaan hemolyysikuvioita, koska se sisältää glukoosia.

Sitä käytetään myös kanin tai hevosen veriagarin valmistuksessa Haemophilus sp. Parhaan tuloksen saamiseksi voidaan lisätä rikastuslisä (IsoVitaleX).

Jos näytteet tulevat hengitysteistä, bakitrasiinia voidaan lisätä agariin seuraamaan kasvistoa estämään ja lisäämään Haemophilus sp.

Vaihtoehtoisesti voidaan valmistaa kystiini-telluriitilla varustettu veriagar (lammas tai ihminen) Corynebacterium difhtheriaen eristämiseksi. Samoin on hyödyllistä valmistaa kanin veriagar, lisäämällä kystiiniä ja glukoosia Francisella tularensisin eristämiseen.

Kylvö on veriagarmaljoilla tapahtuu sammuminen ja ne inkuboidaan 35-37 ° C: ssa 24-48 tunnin ajan microaerophilicity (5-10% CO ₂).

Valikoiva

Tämä väliaine, johon on lisätty antibiootteja, voi korvata Sabouraud-agarin sienten eristämiseksi.

BHI-agarin yhdistelmä kloramfenikolin - gentamysiinin tai penisilliinin -, streptomysiinin ja hevosen veren kanssa on ihanteellinen Histoplasma capsulatumin eristämiseen.

Eristettävästä mikro-organismista riippuen suositellaan inkubointia 35-37 ° C: n lämpötilassa tai huoneenlämpötilassa aerobioosissa. Joskus inkubointi on välttämätöntä molemmissa lämpötila-alueissa, käyttämällä tätä 2 levyä.

Joitakin sieniä, kuten Trichophyton mentagrophytes, on inkuboitava huoneenlämpötilassa enintään 7 päivän ajan.

QA

Jokaisesta valmistetusta erästä suositellaan inkuboimaan yhtä levyä tai kiilaa 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan ja tarkistamaan, ettei siinä ole kasvua; Se on erityisen tärkeätä valmistettaessa veriagaria, koska se on helposti saastunut väliaine.

Toisaalta elatusaineen laatua voidaan arvioida inokuloimalla tunnettuja tai sertifioituja standardikantoja ja tarkkailemalla niiden kehitystä.

Tässä mielessä BHI-agarin arvioimiseksi ilman lisäaineita voidaan käyttää Escherichia coli ATCC 25922-, Staphylococcus aureus ATCC 25923- tai Candida albicans ATCC 10231 -kantoja. Niitä inkuboidaan 37 ° C: ssa aerobioosissa 24 - 48 tuntia. Kaikissa tapauksissa odotetaan tyydyttävää kasvua.

Streptococcus pyogenes ATCC 19615-, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305- tai Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 -kannat voidaan ympättää veriagarlevyjen arvioimiseksi.

Bakteerikantoja inkuboidaan 37 ° C: ssa mikroaerofiilisyydessä 24 tunnin ajan, kun taas sieniä inkuboidaan huoneenlämpötilassa kosteassa kammiossa korkeintaan 7 päivän ajan. Kaikissa tapauksissa odotetaan tyydyttävää kasvua.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. Aivosydäninfuusio-agar. 2015. Saatavana osoitteessa: britanialab.com.
2. BD Laboratories. Aivosydäninfuusio (BHI) agar. 2013.Saatavilla osoitteessa: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
4. Neogeenilaboratorio. Aivosydäninfuusio-agar. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Veriagar: perusta, käyttö ja valmistelu. 2018. Saatavissa osoitteessa: lifeder.com.
6. Wikipedian avustajat. Aivojen sydäninfuusio. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 19. syyskuuta 2018, 03:58 UTC. Saatavana osoitteessa: wikipedia.org. Saavutettu 2. maaliskuuta 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.