Agar Biggy on kiinteä alusta selektiivinen ja ero kulttuuriin. Se oli suunniteltu eristämään ja auttamaan tärkeimpien Candida-lajien tunnistamisessa. Sen nimi BIGGY tulee englannin lyhenteestä vismuttiglukoosiglysiinihiiri.
Alkuperäisen kaavan on luonut Nickerson, minkä vuoksi tämä väliaine tunnetaan myös nimellä Nickerson-agar. Tällä hetkellä se koostuu hiivauutteesta, glysiinistä, dekstroosista, ammoniumsitraatista, vismuttisitraatista, natriumsulfiitista ja agarista.
BIGGY-agarin graafinen esitys. Lähde: Flickr.com
BIGGY-agar on muotoiltu kompleksien C. albicans, C. tropicalis, C. krusei ja C. kefyr lajien erilaistamiseksi, mutta kasvaa myös muita lajeja, kuten Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum. ja Saccharomyces cerevisiae.
Sillä on hyvä herkkyys ja spesifisyys, mutta verrattuna muihin väliaineisiin, joilla on samanlainen toiminta, se on toisella sijalla, ylittäen CHROMagarin. Tästä syystä monet laboratoriot mieluummin jälkimmäistä, vaikka se on paljon kalliimpaa.
On oltava selvää, että BIGGY-agarin ja muiden vastaavien välineiden käyttö auttaa nopeaa oletettua tunnistamista, mutta ei koskaan vahvistavaa. Tästä syystä on oltava käytettävissä muita tunnistusmenetelmiä; esimerkiksi Vitek 32 ja API 20 tunnistusjärjestelmät.
Perusta
BiGGY-agaria pidetään osittain selektiivisenä väliaineena hiivien, etenkin Candida-suvun, eristämiseen, vaikka muut suvut voivat kasvaa.
Se on myös differentiaalinen väliaine, koska mukana olevista lajeista havaitaan erilaisia ominaisuuksia ulkonäön, värin, muodon ja koon suhteen. Sitä pidetään kromogeenisena väliaineena, koska pesäkkeissä on kehittynyt erilaisia värejä.
Hiivapesäkkeiden väri johtuu vismutisulfiitin läsnäolosta agarissa. Nickerson tajusi, että Candida-suvun hiivat suorittavat vismuttisulfiitin solunulkoisen pelkistyksen muuttamalla vismuttisulfidiksi (liukenematon musta aine). Tuloksena on vaaleanruskeita tai mustia pesäkkeitä.
Tämä agar sisältää hiivauutetta ja dekstroosia, joka tarjoaa perusravinteiden ja energian lähteen hiivakehitykseen. Glysiini on hiivakasvustimulantti, kun taas se estää tiettyjen bakteerien kasvua.
Samassa mielessä ammonium- ja vismuttisitraatti, samoin kuin natriumsulfiitti toimivat bakteerien kasvun estäjinä. Agar on aine, joka antaa keskipitkän kiinteän konsistenssin.
Valmistautuminen
Punnitaan 45 g dehydratoitua kasvualustaa ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Ravistetaan ja lämmitetään seosta kiehuen yhden minuutin ajan täydelliseen liukenemiseen. Tätä viljelyväliainetta ei voida autoklavoida.
Jäähdytettyä noin 45 ° C: seen vesihauteessa, kaada 20 ml steriileihin Petri-maljoihin.
Kuivatun väliaineen väri on kellertävän harmaa ja valmistettu on kellertävän valkoinen geeli, jossa voidaan havaita lievää flokkuloituvaa sakkaa.
PH: n tulisi olla 6,8 ± 0,2.
Valmistettu väliaine tulee säilyttää jääkaapissa (4 ° C) ja suojata valolta. Koska se on väliaine, jota ei voida autoklaavoida, se olisi käytettävä mahdollisimman pian. Sen käyttöä suositellaan ennen 3 päivää valmistuksen jälkeen.
Käyttää
Levyjä inkuboidaan huoneenlämpötilassa (25 ° C) 24, 48 ja 72 tuntia, ja inkubaatioaikaa voidaan pidentää viiteen päivään.
Jokaisella Candida-lajilla on tiettyjä ominaisuuksia, jotka tekevät niistä eron toisistaan. Väliaineen valmistajat kuvaavat seuraavat ominaisuudet kullekin lajille:
-Candida albicans -kompleksi: kehittyy tällä agarilla sileinä, pyöreinä, ruskeina tai mustina pesäkkeinä, joilla on pieni myseelinraja. Lukuun ottamatta sitä, että tumma väri ei hajota keskelle.
-Candida tropicalis: kirkkaat, pienet, tummanruskeat pesäkkeet, joissa on musta keskusta ja pieni myseelinraja. Tumma väri hajoaa kohti keskustaa, mikä on tyypillistä tälle lajille 72 tunnin inkuboinnin jälkeen.
-Candida krusei kehittää suuria, litteitä, karkean näköisiä pesäkkeitä, joiden reunus on ruskea tai mustanpunainen.
-Candida parakrusei: keskikokoiset pesäkkeet, suurimman osan ajasta karkeita, litteitä. Väri voi vaihdella kirkkaasta tummanpunaisesta ruskeasta vaaleanpunaiseen ruskeaan. Pesäkkeiden rajalla on laaja, kellertävä siensekoite.
-Candida stellatoidea: kehittyy keskipitkät, litteät pesäkkeet, tummanruskeat, melkein mustat. Luuydinkehitys on hyvin vähäistä.
Yücesoyn ja Marolin vuonna 2003 tekemä tutkimus osoitti, että CHROMagar-elatusaineella on parempi herkkyys ja spesifisyys erilaisten Candida-lajien erilaistumiselle ja tunnistamiselle kuin BIGGY-agarilla.
QA
Steriiliyden kontrolloimiseksi inokuloimattomia levyjä inkuboidaan 25 ° C: n lämpötilassa pimeässä 24-48 tunnin ajan, minkä ei odoteta olevan minkäänlaista kasvua tai värimuutosta.
Elatusaineen laadunvalvontaan suositellaan ATCC-kantoja:
Candida albicans ATCC 60193 -kompleksi, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Kaikissa niissä kasvun odotetaan kasvavan, kuten yllä on kuvattu.
Myös seuraavia kantoja voidaan käyttää:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ja Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Kahdessa ensimmäisessä on odotettavissa kokonaisinhibitio, mutta jos osittain kasvaa, pesäkkeet ovat kermanvärisiä.
S. aureuksen tapauksessa sen odotetaan estävän täydellisesti, mutta jos se kasvaa osittain, sen pesäkkeet ovat valkoisia.
rajoitukset
Jotkut bakteerit kykenevät kasvamaan tässä väliaineessa ja voivat jopa muuttua tummiksi, mikä simuloi Candida-siirtomaa, mutta kun pestään pesäke ja tarkkaillaan sitä mikroskoopin alla, se hävitetään helposti.
Taulukko: Joidenkin hiivasolujen ominaisuudet BIGGY-agarilla Yücesoy M: n ja Marol S.: n työn mukaan.
Lähde: Yücesoy M, Marol S. CHROMAGAR Candida ja BIGGY-agarin suorittaminen hiivalajien tunnistamiseksi. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Viitteet
- Yücesoy M, Marol S. CHROMAGAR Candida ja BIGGY-agarin suorittaminen hiivalajien tunnistamiseksi. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Tekniset tiedot BIGGY Agar. Saatavana osoitteessa: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. BIGGY agar. Saatavana osoitteessa: condalab.com
- BD Laboratories. BD BiGGY-agar (vismutti-glukoosiglysiinihiiva-agari). 2011.Saatavilla osoitteessa: bd.com