SAPEN ESKULIINIAGAR: PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2026

Sappi eskuliini agar on selektiivinen ja ero väliaine kiinteän kulttuuriin. Sitä käytetään diagnostisena testinä määrittämään tietyn mikro-organismin kyky kasvaa elatusaineessa, joka sisältää sappia, ja myös hajottamaan glukosidieskuliinin eskuletiiniksi ja glukoosiksi.

Tätä diagnostista testiä käytetään erottamaan Streptococcus-suvun lajeja, jotka kuuluvat ryhmään D (sapen eskuliinipositiivinen), muista Streptococcus-ryhmistä, jotka reagoivat negatiivisesti tähän testiin.

Sapen eskuliini-agarmalja, siemennetty Enterococcus-kannalla (testi positiivinen). Lähde: Koneella luettavaa kirjailijaa ei toimitettu. Philippinjl oletti (perustuu tekijänoikeusvaatimuksiin).

On huomattava, että jotkut viridans-ryhmän streptokokit voivat hydrolysoida eskuliinia, mutta eivät kykene kasvamaan sapen läsnä ollessa pitoisuutena 40%, siksi tässä väliaineessa tämän ryhmän reaktio on negatiivinen.

Toisaalta sappieskuliiniväliaine on myös käyttökelpoinen Listeria monocytogenes- tai Aerococcus sp -lajien diagnoosissa, koska nämä mikro-organismit ovat sapen eskuliinipositiivisia.

Esculin-sappi-agar koostuu peptonista, lihauutteesta, härkäsapesta, eskuliinista, rautasitraatista, agarista ja tislatusta vedestä. Jotkut kaupalliset talot sisältävät natriumatsidin väliainekoostumuksen sisällä.

Elatusaine voidaan valmistaa laboratoriossa, jos sinulla on kaikki yhdisteet erikseen tai se voidaan valmistaa kaupallisesta dehydratoidusta väliaineesta.

Perusta

Sappieskuliiniväliaine sisältää peptoneja ja lihauutetta, molemmat yhdisteet tarjoavat tarvittavat ravintoaineet mikro-organismien kasvulle.

Se sisältää myös eskuliinia; Tämä yhdiste on glykosidi, joka muodostuu yksinkertaisen monosakkaridin (glukoosin) liitoksesta yhdisteen kanssa, jota kutsutaan 6,7-dihydroksikumariiniksi tai eskuletiiniksi (aglukoniksi), kytkettynä asetaali- tai glukosidisidoksella.

Koe perustuu osoittamaan, kykenevätkö bakteerit hydrolysoimaan eskuliinin. Jos näin tapahtuu, eskuliini hajoaa eskuletiiniksi ja glukoosiksi. Esculetina reagoi väliaineessa olevan raudan kanssa muodostaen tummanruskeaa, melkein mustaa yhdistettä.

Tämä tarkoittaa, että ferrisitraatti toimii reaktionkehittäjänä. Tämä ominaisuus tekee sapen esculin agarista differentiaalisen väliaineen.

Sappi puolestaan ​​on estäjä, joka estää joidenkin mikro-organismien kasvua, siksi bakteerin on kyettävä kasvamaan ennen eskuliinin jakamista sapen läsnä ollessa. Siksi tätä väliainetta pidetään selektiivisenä.

Bakteerit, jotka voivat kehittyä tässä ympäristössä, ovat pääasiassa niitä, jotka elävät suolistossa.

Tässä mielessä jotkut kaupalliset yritykset lisäävät väliaineeseen natriumatsidia estämään edelleen suolistossa olevien gramnegatiivisten bakteerien kasvua lisäämällä elatusaineen selektiivisyyttä Streptococcus-kasvun kannalta.

Lopuksi agar antaa väliaineelle kiinteän konsistenssin ja vesi on yhdisteiden liuotin.

Valmistautuminen

Sapen eskuliiniagarin kotitekoinen valmistelu

Punnita:

5 g peptoneja

3 g lihauutetta

40 g naudan sappia

1 g eskuliinia

0,5 g rautasitraattia

15 g agaria

1000 ml tislattua vettä

Jos lisätään natriumatsidia, punnitaan 0,25 g / litra ja lisätään seokseen.

Liuota komponentit litraan tislattua vettä, kuumenna, kunnes yhdisteet ovat täysin liuenneet. Levitä 5 ml 16 x 125 mm: n kierrekorkin koeputkiin. Autoklaavi 121 ° C: ssa, 15 naulan paine 15 minuutin ajan.

Poista autoklaavista ja kallista putkia kannattimelle niin, että agar jähmettyy leveäksi huilun nokkaksi.

Säilytä jääkaapissa käyttöön asti. Lämmitä huoneenlämpöiseksi ennen kylvöä.

Sapen eskuliiniagarmaljat voidaan myös valmistaa; tässä tapauksessa koko seos autoklavoidaan pullossa ja jaetaan sen jälkeen steriileihin Petri-maljoihin. Anna niiden jähmettyä ja säilytä jääkaapissa.

Elatusaineen pH: n on oltava 6,6 ± 0,2.

Sapen eskuliiniagarin valmistus kaupallisesta väliaineesta

Punnitse lisäyksessä määritetty määrä. Tämä voi vaihdella liiketalosta toiseen. Seuraavaksi jatka samalla tavalla kuin edellä selitettiin.

Elatusaineen pH: n tulisi olla 6,6 ± 0,2. Kuivatun väliaineen väri on vaalean beige ja valmistettu väliaine on tummanruskea.

Kaupallinen sappieskuliiniväliaine. Lähde: Kuva kirjoittanut MSc. Marielsa Gil.

Sovellukset

Sappieskuliiniväliainetta käytetään pääasiassa D-ryhmän streptokokin (sapen eskuliinipositiivisen) erottamiseen muista Streptococcus-ryhmistä (sapen eskuliini-negatiivinen).

Yhdistämällä ylisuolattu liemen kasvutesti sappieskuliinitestiin voidaan tunnistaa erityinen ryhmä D-streptokokki, nimeltään Enterococcus.

Tämä erityinen Streptococcus-ryhmä kuuluu edellä mainitun suvun D-ryhmään ja ne kykenevät hydrolysoimaan eskuliinia sapen läsnä ollessa samoin kuin muut ryhmän D jäsenet, mutta ne kykenevät myös kehittymään hypersuolaisessa väliaineessa (BHI kloorivedyn kanssa 6,5% natrium) ominaisuus, joka tekee eron.

Siksi streptokokkeja, jotka hydrolysoivat eskuliinin sappia, mutta jotka eivät kasva yli suolavedessä olevassa liemessä, kutsutaan ei-enterokokkeja ryhmän D streptokokkeiksi.

kylvetty

Inokuloidaan väliaine edullisesti puhdasta Todd-Hewitt 24 tunnin liemestä.

Lisää 2 tippaa kasvualustan pintaan Pasteur-pipetillä ja levitä väliaineeseen platina-silmukalla.

Inkuboidaan 35 ° C: ssa 48 tunnin ajan, kun inkubaatioaika on kulunut, sitä voidaan tarkkailla nähdäko positiivinen reaktio. Jos reaktio pysyy ajan kuluessa negatiivisena, sitä voidaan inkuboida jopa 72 tuntiin.

Tulkinta

Positiivinen reaktio: huilun nokassa esiintyy tummanruskea, melkein musta väri (putkikokeen tapauksessa) tai agarin tummeneminen pesäkkeiden ympärillä (levytesti).

Negatiivinen reaktio: Väliaineen mustaamista ei tapahdu tai alle puolessa putkessa on mustia esiintymiä 72 tunnin inkubaation jälkeen. Toisaalta bakteerikasvua elatusaineessa ilman mustan värin esiintymistä olisi pidettävä negatiivisena testinä.

QA

Elatusaineen laadun arvioimiseksi on oltava käytettävissä Enterococcus faecalis ATCC 29212 -kanta positiivisena kontrollina ja Streptococcus-kanta, joka ei kuulu ryhmään D, negatiivisena kontrollina.

rajoitukset

-Media, joka ei sisällä natriumatsidia, sallii enteeristen gramnegatiivisten bakteerien kasvun. Jotkut heistä voivat mustuttaa keskiosan.

- Jotkut kaupalliset talot lisäävät pieniä sappipitoisuuksia (10%), ja tästä syystä jotkut streptokokit, jotka eivät kuulu ryhmään D, voivat kehittyä elatusaineessa ja hydrolysoida eskuliinia, mikä voi aiheuttaa virheitä tulkinnassa.

Viitteet

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisesti tärkeiden bakteerien tunnistamiseksi. 3. toim. Toimituksellinen Panamericana. Buenos Aires. Argentiina.
4. Lab. Britannia. Esculin-sappi atside-agarilla. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
5. "Sappi Esculin Agar." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 22. elokuuta 2017, klo 17.30 UTC. 22. huhtikuuta 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Sappi Esculin Agar Slants. 2015.Saatavilla osoitteessa: bd.com
7. Neogen Laboratories. Sapen eskuliiniagar. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com