Setrimidi agar tai setrimidi on selektiivinen kiinteällä kasvualustalla suunniteltu eristämiseksi Pseudomonas aeruginosa. Se perustuu tämän lajin tyypillisten pigmenttien tuotannon osoittamiseen, ja se tehtiin King, Wardin ja Raneyn luoman Tech-agarin modifikaatiosta.
Alkuperäinen kaava sisälsi magnesiumkloridin, kaliumsulfaatin suoloja, haiman hajotusgelatiinin ja agar-agarin. Kaavan modifiointi koostui setrimidin (setyylitrimetyyliammoniumbromidin) ja glyserolin lisäämisestä.
Cetrimidiagar kylvöllä Pseudomonas aeruginosa -lähteellä Lähde: BiotechMichael, Wikimedia Commonsista
Cetrimidiagar on hyödyllinen näytteiden mikrobiologisissa tutkimuksissa, joissa epäillään esiintyvän Pseudomonas aeruginosaa. On huomattava, että tämä bakteeri on erittäin tärkeä, koska vaikka se on osa normaalia ympäristömikrobioota, se käyttäytyy usein opportunistisena patogeenina.
Tästä syystä yksi yleisimmistä tämän bakteerin aiheuttamista ongelmista on sairaalainfektiot, ts. Sairaalaympäristössä esiintyvät infektiot, jotka hyökkäävät potilaisiin, joilla on masentunut immuunijärjestelmä.
Toisaalta johtuen tämän mikro-organismin affiniteetista kosteuteen, haavoittuvimmat kontaminaatiokohteet ovat: avustetut hengityslaitteet, lääkkeet, sumuttimet, vesilähteet, ilmastointilaitteet, desinfiointiaineet, saippualiuos, injektoitavat liuokset, avoimet haavat, katetrit, virtsaputket, mm.
Tässä mielessä setrimidiagar on käyttökelpoinen suoritettaessa mikrobiologisia kontrolleja ja viljelmiä aiemmin mainituille elementeille.
Perusta
Cetrimidiagar perustuu elatusaineen kykyyn edistää P. aeruginosa -kasvua, stimuloida sen pigmenttien tuotantoa ja estää puolestaan muiden mikro-organismien kasvua.
Nämä ominaisuudet johtuvat sen komponenttien toiminnasta. Läsnä oleva gelatiinipeptoni toimii typen, vitamiinien ja mineraalien lähteenä. Glyseroli tai glyseriini toimii hiilen lähteenä.
Setrimidi (setyylitrimetyyliammoniumbromidi) puolestaan on aine, joka estää muiden bakteerien kuin P. aeruginosa kasvua, mukaan lukien muut samaan sukuun kuuluvat lajit.
Inhibitio tapahtuu, koska setamidi toimii kationisena pesuaineena, ja se pystyy destabiloimaan useimpien bakteerien plasmamembraanin, lukuun ottamatta P. aeruginosaa ja joitain muita, jotka selviävät.
Toisaalta se sisältää magnesiumkloridia ja kaliumsulfaattia. Nämä yhdisteet stimuloivat fenotyyppistä ilmentymistä, joka liittyy Pseudomonas aeruginosan kykyyn tuottaa erilaisia pigmenttejä, mukaan lukien: pyosyaniini, pyoverdiini, pyorrubiini, pyomelaniini ja fluoreseiini. Lopuksi se sisältää agar-agaria, joka antaa sille kiinteän konsistenssin.
Tulkinta
Tässä agarissa saatu kasvu tulkitaan seuraavasti:
Pyöreiden, sileiden, säännöllisillä reunoilla olevien pesäkkeiden havaitseminen tuottamalla sinertäviä, vihreitä, ruskeita tai punertavia pigmenttejä sekä hedelmällisen hajun (aminoasetofenonin) päästöt ovat oletettu tulos tämän bakteerin esiintymisestä mainitussa näytteessä.
Toisaalta, kirkkaan vihertävänkeltaisen pigmentin havaitseminen pesäkkeissä viittaa P. aeruginosaan, kun malja altistetaan ultraviolettivalolle.
P. aeruginosa -pesäkkeiden fluoresenssi cetrimidiagarilla ultraviolettivalossa.
On huomattava, että jokainen havaittu väri johtuu tietyn pigmentin tuotannosta. Sinivihreä pigmentti vastaa pyosyaniinin tuotantoa, vihreästä pyoverdiiniin, punertavasta pyorubiiniin, ruskeasta pyomelaniiniin ja kirkkaan kelta-vihreän fluoresenssin UV-valossa fluoreseiiniksi.
Valmistautuminen
Punnitaan 43 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan tislattuun veteen. Lisää 10 ml glyserolia. Vie seos lämmönlähteeseen. Anna sen kiehua muutama minuutti, kunnes se on täysin liuennut.
Autoklaavi 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Anna seistä ja tarjoile steriileissä Petri-maljoissa, kun lämpötila on noin 50 ° C.
Annetaan jähmettyä, käännä päin, tilata plaqueros ja säilyttää jääkaapissa käyttöönottoon saakka. Cetrimidi-agarlevyt tulisi poistaa jääkaapista ennen siementen siementtämistä ja antaa niiden lämmetä huoneenlämpöiseksi.
Elatusaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,2 ± 0,2.
Kuivatun väliaineen väri on beige ja valmiste on läpinäkymätöntä valkoista.
Sovellukset
Cetrimidiagariin voidaan kylvää kaikenlaisia näytteitä, joissa epäillään Pseudomonas aeruginosa -taudin esiintymistä. Siksi se on hyödyllinen kaikilla mikrobiologian aloilla (ympäristö, teollisuus, kliininen, vesi ja ruoka).
On erittäin tärkeää analysoida sairaalaympäristöä ja siten pystyä soveltamaan korjaavia toimenpiteitä, koska tämä mikro-organismi saavuttaa potilaat saastuneiden laitteiden, lääkkeiden, liuosten ja tarvikkeiden kautta, joita potilas käyttää.
Tällä tavalla mikro-organismi voi tartuttaa immunosuppressoituneiden potilaiden alahengitysteitä, virtsateitä ja haavoja.
P. aeruginosa -bakteerin pesäkelaskelmat voidaan tehdä myös mikrobien rajatesteissä.
kylvetty
Cetrimidiagaria voidaan käyttää primaariviljelmänä. Levy ympätään yhdelle reunastaan ja sieltä se jakautuu loppuun loppuun muulle levylle. Nestemäiset näytteet voidaan siementtää pintaan drigalski-lastalla.
Levyjä inkuboidaan aerobisesti 37 ° C: ssa 24 tunnin inkuboinnin ajan.
rajoitukset
-Pieni osa Pseudomonas aeruginosas -kannoista ei tuota pyosyaniinia, joten väärä negatiivinen voidaan tulkita.
-Jotkut kliinisesti tärkeät Pseudomonas-lajit estetään tässä väliaineessa.
- Huolimatta Pseudomonas aeruginosalle kuvattuja ominaisuuksia, ne on vahvistettava lisätodistuksilla. Koe, jota ei kannata jättää väliin, on oksidaasikoe, sen on oltava positiivinen.
-Jotkut enterobakteerit voivat kasvaa tässä väliaineessa ja kehittää keltaisen pigmentin, mutta se eroaa Pseudomonas aeruginosasta siinä, että kun levy altistetaan ultraviolettivalolle, siinä ei ole fluoresenssia.
- Serratia marcescens onnistuu kehittämään ja tuottaa vaaleanpunaisen pigmentin.
-Jos setrimidi-agarilla kylvetyt levyt altistetaan jonkin aikaa huoneenlämmössä, P. aeruginosa -kannat voivat menettää ultraviolettivalossa havaitun fluoresenssin, mutta ominaisuus saadaan talteen, jos niitä inkuboidaan uudelleen 37 ° C: ssa.
QA
Setrimidiagarin hyvän suorituskyvyn analysoimiseksi voidaan käyttää kontrollikantoja, kuten: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 ja Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Odotetut tulokset ovat:
- Hyvä kasvu P. aeruginosalle, sinivihreällä pigmentillä ja positiivisella fluoreseiinilla.
- S. maltophilia ja S. aureus inhiboituvat osittain tai kokonaan.
- Escherichia colin odotetaan estävän kokonaan.
Viitteet
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Pseudomonas aeruginosan kliinisten isolaattien fenotyyppinen ja serologinen karakterisointi. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Cetrimidi-agariemäs. 2014. Saatavissa osoitteessa: condalab.com
- Britannia Laboratories. Cetrimidiagar. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
- BD Laboratories. BD-pseudoseliagar (Cetrimide-agar). 2013.Saatavilla osoitteessa: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, CA, Cetrimide-agar. 2009.Saatavilla osoitteessa: