SUKLAA-AGAR: PERUSTA, KÄYTÖT JA VALMISTELU - BIOLOGIA - 2025

Suklaa-agar on kiinteän elatusaineen, rikastettu, ei - selektiivinen ja ei - ero. Sitä käytetään pääasiassa ravinnon kannalta vaativien mikro-organismien eristämiseen, vaikka siinä voi kasvaa minkä tahansa tyyppisiä bakteereja.

Tästä syystä sen hyödyllisyys kasvaa erityisesti siemenessä näytteitä, jotka ovat normaalisti steriilejä, kuten CSF ja nivelneste. Vaikka se sisältyy myös valittuihin keinoihin polymikrobisten näytteiden kylvämiseksi, mutta näissä tapauksissa on tarpeen lisätä antibiootteja, jotka estävät samanaikaista kasvistoa.

Suklaa-agar bakteerikasvustolla

Tällä väliaineella on ominainen ruskea väri, joka on hyvin samanlainen kuin suklaa, tästäkin nimestä. Valmiste on hyvin samanlainen kuin veriagar, vain tässä tapauksessa veri on lämmitettävä, jotta punasolut hajoavat.

Sen valmistus, kuten veriagar, on hyvin herkkä, koska se on helposti saastunut. Tästä syystä monet laboratoriot mieluummin hankkivat tämän väliaineen, jonka kaupalliset yritykset ovat jo laatineet ja takaavat sen laadun.

Perusta

Tämä väliaine koostuu ravinnepitoisesta agaripohjasta ja lämmitetystä verestä. Punasolujen hemolyysi tuottaa tekijä X (hemiini) ja tekijä V (NAD), joita tarvitaan joidenkin mikro-organismien, kuten Haemophilus-suvun, kasvuun. Se on myös erittäin hyödyllinen Neisserias sp.

Kuten veriagar, erilaisia ​​elatusaineita voidaan käyttää perus-agarina tarpeen mukaan. Käytettyjen väliaineiden joukossa ovat aivojen sydäninfuusio ja trypticase-soija-agar, vaikka suositeltavimpia ovat Columbia-agar, Müeller Hinton, GC-agar ja Thayer Martin-agar.

Jotkut suklaagar-variantit sisältävät kaupallisesti saatavana väkevöitetyn lisäyksen nimeltä Isovitalex tai Polivitex.

Nämä lisät sisältävät vitamiini B ₁₂, L-glutamiinia, adeniini, guaniini-hydrokloridia, p-aminobentsoehappo, nikotiiniamidiadeniinidinukleotidi (NAD), tiamiinipyrofosfaatti, ferrinitraattia, tiamiinihydrokloridi, kysteiini hydrokloridi, L-kystiini, ja glukoosia.

On tärkeää huomata, että suklaagar on rikkaampaa kuin veriagar, mutta se ei salli hemolyysikuvioiden havaitsemista.

Sovellukset

Lähde: pixnio.com. Kirjoittaja:

Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Columbia-agarilla valmistettu suklaagar

Tämä väliaine sisältää haiman kaseiinin ja sydämen sulatteen, lihan peptidigeelin, natriumkloridin, agarin, hiivauutteen ja maissitärkkelyksen. Se on myös runsaasti vitamiineja, mineraaleja ja välttämättömiä aminohappoja.

Tämä lämmitetty veripohja on ihanteellinen Neisseria-suvun bakteerien eristämiseen. Toisaalta, jos väliaineeseen lisätään lisäksi Brucella-lisäainetta, mainittu mikro-organismi voidaan eristää. Tuloksia parannetaan hevosveren avulla.

GC-perus-agarilla valmistettu suklaagar (gonokokille)

Tämä väliaine sisältää peptoneja, maissitärkkelystä, yksiemäksisiä ja kaksiemäksisiä puskureita, natriumkloridia ja agaria.

Useimmissa kaupallisesti valmistetuissa suklaagar-esityksissä on tämä emäs ja ne eivät sisällä lämmitettyä verta, vaan pikemminkin synteettistä seosta hemiinistä ja kasvutekijöiden, vitamiinien, mineraalien, aminohappojen, tekijän V ja glukoosin kemiallista lisäystä.

Müeller Hinton-agarilla valmistettu suklaagar

Sitä käytetään testaamaan niukkojen mikro-organismien, kuten Streptococcus pneumoniae, antimikrobinen herkkyys käyttämällä 5% lämmitettyä lampaan verta.

Sitä käytetään myös Neisserian ja Haemophiluksen primaariseen eristämiseen, mutta erityisessä tapauksessa Haemophiluksen eristämisessä hevosveren käyttö on edullista, koska se on rikas tekijöiden X ja V lähde.

Toisaalta, jos kylvettävä näyte tulee ei-steriililtä alueelta, suositellaan antibioottien lisäämistä alueen normaalin kasviston estämiseksi.

Esimerkki hengitysnäytteistä, joissa epäillään Haemophilus-suvun bakteerien esiintymistä, bakitrasiinia käytetään estämään stafülokokin, mikrokokin, streptokokin ja saprofyyttisten neisserioiden kasvua.

Sukupuolielinten chancre-näytteissä, joissa epäillään Haemophilus ducreyi -lajia, on käytetty seuraavalla tavalla valmistettua suklaagaria, joka on valmistettu seuraavalla tavalla: Müeller - Hinton-agar, jossa on 5% suklaata hevosen verta, 1% isovitalex -rikastetta ja 3 ug / ml vankomysiiniä.

Thayer Martin agarilla valmistettu suklaagar

Tämä väliaine on erityinen Neisseria gonorrhoeaen eristämiseen. Sen on sisällettävä antibiootteja seuraamaan kasvistoa. Karitsan verta käytetään.

Valmistautuminen

Sinun pitäisi nähdä merkinnät käytettävän perus-agarin valmistamiseksi. Niitä on kuivatun väliaineen säiliön takana. Ne kuvaavat yleensä, kuinka paljon sinun on punnittava litran kasvualustan valmistamiseksi.

Tarkka tarvittava määrä voidaan valmistaa laboratoriossa, se voi olla enemmän tai vähemmän kuin litra.

laskelmat

Kolmen säännön perusteella lasketaan, kuinka paljon punnitaan halutun tilavuuden valmistamiseksi. Esimerkki:

Jos yhden litran kohdalla on tarpeen punnita 40 g ja laboratorio tarvitsee 800 ml, sanotaan:

1 000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Kaava on seuraava:

X = 32 g (800 ml: n punnittava määrä).

Punnitaan ja liuotetaan

Tarvittava määrä punnitaan ja asetetaan pulloon veden kanssa.

Kuumenna kohtalaisella lämmöllä ja sekoita varovasti pyörivillä liikkeillä, kunnes dehydratoitu väliaine liukenee kokonaan antaen sen kiehua 1 minuutin ajan.

Steriloida

Kolvi asetetaan autoklaaviin väliaineen steriloimiseksi 121 ° C: ssa 20 minuutin ajan.

Veren aggregaatti

Autoklaavista poistettaessa sen annetaan seistä, kunnes väliaineen lämpötila on noin 56-70 ° C veren sijoittamiseksi ja sekoitetaan, kunnes väliaine muuttuu ruskeaksi.

Jos lisäät lisäravinteita, tämä on aika tehdä se. Seuraavaksi sekoitetaan ja tarjoillaan 20 ml jokaiselle steriilille Petri-maljalle.

Koko toimenpide tulisi suorittaa laminaarivirtauskaapissa tai Bunsen-polttimen ympärillä.

Anna seistä, kunnes ne jähmettyvät ja säilytä kääntyvästi jääkaapissa.

Toinen tapa valmistaa suklaa-agaria käyttämättä verta

Perusväliaine valmistetaan kuten yllä on kuvattu, kaupallisesti saatu dehydratoitu hemoglobiini liuotetaan ja steriloidaan autoklaavissa.

Molempien liuosten annetaan jäähtyä 50 ° C: seen, ne yhdistetään ja lisäys lisätään. Sekoita aseptisissa olosuhteissa ja tarjoile sitten steriileissä Petri-maljoissa.

QA

On tärkeää, että veri asetetaan ilmoitettuun lämpötilaan, koska se on ihanteellinen veren punasolujen lyysaamiseen ja samalla tekijän V ylläpitämiseen, joka on lämpöherkkä.

Kuplien ei tulisi jäädä agarin pintaan. Jokaisesta 100 levyn erästä yhtä tai kahta levyä tulisi inkuboida uunissa 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan niiden steriiliyden varmistamiseksi.

Parhaan tuloksen saavuttamiseksi suklaagaria tulisi käyttää pian valmistuksen jälkeen.

Kontrollbakteerikantoja olisi pidettävä laboratoriossa, jotta voidaan arvioida tuoreen väliaineen tehokkuutta tärkeimpien kliinisesti tärkeiden herkkyyttä aiheuttavien mikro-organismien kasvulle.

Viitteet

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Käytännön kliininen mikrobiologia. Cadizin yliopisto, 2. painos. UCA: n julkaisupalvelu.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, Toimitus Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. GC-Biocen Agar -perusviljelyalustan käytön toteutettavuus mikrobiologian laboratoriossa. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237 - 238. Saatavana osoitteessa: scielo.sld.
5. Wikipedian avustajat. Suklaa-agar. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 17. joulukuuta 2018, kello 19:54 UTC. Saatavana osoitteessa: en.wikipedia.org.