CLED AGAR: PERUSTEET, KÄYTÖT JA VALMISTELU - BIOLOGIA - 2026

CLED agar (kystiini-laktoosi-Electrolyte suhteen puutteellisen) on kiinteän elatusaineen ero, jota käytetään diagnosointiin virtsatieinfektioiden. Viljelyalustan koostumus on suunniteltu virtsapatogeenien hyvää kasvua varten ja on ihanteellinen pesäkkeitä muodostavien yksiköiden (CFU) kvantifiointiin.

CLED-elatusaine ei ole selektiivinen, koska gram-negatiiviset ja gram-positiiviset mikro-organismit voivat kasvaa siinä. Mutta tämä ei ole ongelma, koska useimmat UTI: t ovat vain yhden tyyppisiä mikro-organismeja.

CLED-agar

Polymikrobisten infektioiden tapauksessa voidaan saada 2 tai 3 erilaista bakteeria, mutta se on hyvin harvinaista ja useimmiten se on saastuneita näytteitä.

Gramnegatiivisista bakteereista, jotka voivat kasvaa tässä väliaineessa, ovat Enterobacteriaceae-perheeseen kuuluvat bakteerit ja muut enteeriset bakteerit, joista virtsanäytteissä eristetään yleisimmin uropatogeenejä: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, muun muassa.

Samoin gram-positiivisten bakteerien joukossa, jotka voivat kasvaa tässä väliaineessa, ovat Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp ja jopa hiivat, kuten Candida albicans -kompleksi.

Elatusaineen kemiallisesta koostumuksesta johtuen se ei kuitenkaan salli joidenkin vaativien sukupuolielinten patogeenien, kuten Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, kasvua.

SIDETTU agar-peruste

CLED-elatusaineessa on energialähteenä lihauutetta, kaseiinin haiman hydrolysaattia ja gelatiinin hydrolysaattia. Ne tarjoavat ravinteita tarpeettomien bakteerien kehitykselle.

Se sisältää myös kystiiniä, aminohappoa, joka sallii koliformien kasvun, erotettavissa niiden pienestä koosta.

Samoin se sisältää laktoosia fermentoitavana hiilihydraattina, tästä syystä tämä väliaine on erilainen; kyky erottaa fermentoivat bakteerit ei-laktoosisesta fermentoinnista.

Fermentoivat bakteerit aiheuttavat väliaineen pH: n muutoksen happojen muodostumisen seurauksena, kehittäen keltaisia ​​pesäkkeitä, kun taas käymättömät bakteerit eivät aiheuta muutoksia väliaineessa, siksi ne saavat alkuperäisen agarin värin, vihreän.

Käymisreaktio paljastuu pH-indikaattorin läsnäolon avulla, joka tässä väliaineessa on bromitymolisininen.

Toisaalta väliaineen matala elektrolyyttipitoisuus estää Proteus-suvun tyypillistä invasiivista kasvua, jota kutsutaan parvivaikutukseksi. Tämä tuottaa edun muihin väliaineisiin nähden, koska se sallii CFU: ien laskemisen, mukaan lukien jos Proteus-suku on läsnä.

Alhainen elektrolyyttipitoisuus estää kuitenkin joidenkin Shigella-suvun lajien kasvua, mikä on haitta muihin väliaineisiin verrattuna.

Perustelu CLED-agarille (Bevis)

Tästä väliaineesta on olemassa variantti tai modifikaatio, jonka on valmistanut Bevis, joka sisällytti happamaan fuksiiniin (Andraden indikaattori) alkuperäiseen koostumukseen. Se toimii yhdessä bromitymolinsinisen kanssa erottaakseen käymisen muista kuin käymisbakteereista.

Ero tavanomaisen ja modifioidun väliaineen välillä on väri, jonka pesäkkeet ottavat. Laktoosia fermentoivien bakteerien tapauksessa pesäkkeet muuttuvat punertavanoranssiksi vaaleanpunaisella tai punaisella halogeenilla, kun taas käymättömät ovat sinertävän harmaita.

Sovellukset

CLED-agaria käytetään yksinomaan virtsanäytteiden siementamiseen. Tämän väliaineen käyttö on erityisen yleistä eurooppalaisissa laboratorioissa, kun taas Amerikassa sitä käytetään vähemmän.

Näytteenoton on täytettävä tietyt parametrit luotettavien tulosten saamiseksi, mukaan lukien:

• Älä ota antibiootteja ennen näytteenottoa.
• Ota mieluiten virtsan ensimmäinen asia aamulla, koska se on väkevämpää, kun näytettä ei ole mahdollista ottaa invasiivisilla menetelmillä.
• Pese sukuelimet hyvin ennen näytteen ottamista.
• Hävitä ensimmäinen virtsaaminen ja aseta sitten astia.
• Kerää 25–30 ml virtsaa hyvin merkittyyn steriiliin astiaan.
• Vie heti laboratorioon jäällä.
• Se on käsiteltävä 2 tunnin kuluessa myöntämisestä tai jäähdytettävä 4 ° C: ssa enintään 24 tunnin ajan.

Virtsanäytteiden siemennys

Virtsanäyte laimennetaan suhteella 1:50.

Laimentamiseksi laitetaan 0,5 ml potilaan virtsaa ja laimennetaan 24,5 ml: lla steriiliä fysiologista liuosta.

Mitataan 0,1 ml laimennettua virtsaa ja levitetään pinta drigalski-lastalla CLED-väliaineeseen. Tämä on paras kylvomenetelmä pesäkkeiden laskemiseen. Tästä syystä sitä käytetään virtsanäytteissä, koska tulokset on ilmaistava CFU / ml.

Saatujen pesäkkeiden kvantifioimiseksi toimitaan seuraavasti: laske pesäkkeet levyltä ja kerro kertoimella 10 ja sitten 50. Tämä antaa sinulle virtsan määrän CFU / ml.

Tulkinta

Määrä yli 100 000 CFU / ml -– Ilmaisee virtsainfektiota

Laskee alle 1000 CFU / ml- - Ei tartuntaa

Laskee välillä 1000-10 000 CFU / ml -– Epävarma, mahdollinen kontaminaatio, toista näytteenotto.

ID

CLED-agarilla kasvatetuilla pesäkkeillä tulisi olla gramma ja mikroorganismin morfotintoriaalisista ominaisuuksista riippuen suoritetaan tietty alaviljelmä.

Esimerkiksi, jos se on gram-negatiivinen bacillus, se kylvään MacConkey-agar-agariin, jossa vahvistetaan laktoosin käyminen tai puuttuminen. Lisäksi ravinne-agar kiinnitetään oksidaasikokeen suorittamiseksi.

Mikäli grammi paljastaa gram-positiivisia kokkeja, se voidaan viljellä uudelleen suolaisella mannitoliagarilla ja ravintoaine-agarilla. Jälkimmäisessä suoritetaan katalaasikoe. Lopuksi, jos hiivoja havaitaan, se kylvään Sabouraud-agar-agarille.

Monet laboratoriot välttävät CLED-väliaineen käyttöä ja käyttävät mieluummin vain veriagaria, MacConkeya ja ravintoaineagaria virtsanäytteiden siementtämiseen.

Valmistautuminen

Liuotetaan pullossa, jossa on yksi litra tislattua vettä, 36,2 g CLED-agarjauhetta. 5 minuutin seisottua lämmitä uudelleen suspendoitu agar sekoittaen jatkuvasti kiehumaan yhden minuutin ajan.

Sitten steriloidaan 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan autoklaavissa. Ajan lopussa se poistetaan autoklaavista ja annetaan jäähtyä 45 ° C: n lämpötilaan. Seuraavaksi tarjoillaan 15 - 20 ml jokaisessa steriilissä Petri-maljassa.

Levyjen tarjoamismenetelmä on suoritettava laminaarivirtauskupujen sisällä tai Bunsen-polttimen edessä likaantumisen välttämiseksi.

Tarjotut levyt jätetään jähmettymään, järjestetään käänteiseen telineeseen ja säilytetään jääkaapissa (2 - 8 ° C) käytön asti.

Valmistetun väliaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,3 ± 0,2.

Viitteet

1. Suositukset virtsatulehduksen mikrobiologiseen diagnoosiin. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57 - 63. Saatavana osoitteessa: scielo.org.
2. Panchi J. Virtsatieinfektioita aiheuttavien mikrobien tunnistaminen potilailla, joille tehdään virtsarakon katetrointia. 2016. Yliopistotutkinto kliinisen laboratorion kandidaatin tutkinnon suorittamiseksi. Ambaton tekninen yliopisto. Ecuadorissa.
3. Britannia Laboratories. CLED väliaine. Saatavana osoitteessa: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Käyttöohjeet, CLED-agar. 2013 Saatavana osoitteessa: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Mikrobiologian peruskäsikirja. Saatavana osoitteessa: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED-agarvaihtoehto virtsan viljelyrutiinissa. Ennakoiva ja vertaileva arviointi. Diagnostinen mikrobioli-tartunta Dis. 1992; 15 (4): 287 - 90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Käytännön kliininen mikrobiologia. Cadizin yliopisto, 2. painos. UCA: n julkaisupalvelu.