CZAPEK-AGAR: PERUSTEET, VALMISTELU, KÄYTTÖ JA RAJOITUKSET - BIOLOGIA - 2026

Czapek (CZA) on selektiivinen kiinteä alusta on suunniteltu erityisesti kasvavien saprofyyttisten bakteerien ja sienten. Sen ovat luoneet puolalaisen alkuperän kasvitieteilijä Friedrich Johann Franz Czapek ja amerikkalainen kemisti Arthur Wayland Dox; tästä syystä tätä agaria tunnetaan myös nimellä Czapek-Dox-väliaine.

Alkuperäinen väliaine oli nestemäistä, mutta agaria lisättiin myöhemmin sen tekemiseksi kiinteäksi väliaineeksi. Czapek-väliaine koostuu natriumnitraatista, kaksikaliumfosfaatista, magnesiumsulfaatista, kaliumkloridista, rautasulfaatista, sakkaroosista, agarista ja tislatusta vedestä.

Czapek-agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Lähde: A. Medmyco / B. Kuva: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

Czapek-agarin pH on 7,3, mutta on olemassa variantti, johon lisätään 10% maitohappoa, jonka pH pysyy arvossa 3,5. Tätä happamaa alustaa käytetään happofiilisten mikro-organismien viljelyyn.

Toisaalta, jotkut liikerakennukset muuttivat Czapek-agarin koostumusta vaihtamalla magnesiumsulfaattia ja kaksikaliumfosfaattia glyserofosfaatilla; tämä modifikaatio estää tavanomaisella kaavalla havaitun magnesiumfosfaattisakan muodostumisen. Samoin on toinen vaihtoehto, johon hiivauutetta lisätään.

Viimeinkin American Public Health Association APHA suosittelee Czapek-agaria Actinomycetes sp: n, Aspergillus sp: n, Paecilomyces sp: n ja Penicillium sp. Näille lajeille on ominaista ympäristömikro-organismit ja opportunistiset patogeenit.

Perusta

Tämä väliaine sisältää sakkaroosia; Tämä hiilihydraatti toimii hiililähteenä, kun taas natriumnitraatti on typpilähde, mutta toisin kuin muut väliaineet, toimitettu typpi on epäorgaaninen.

Tästä syystä Czapek-alustaa pidetään selektiivisenä, koska vain mikro-organismit, jotka kykenevät käyttämään epäorgaanisia yhdisteitä ainoana typpilähteenä, voivat kasvaa.

Väliaineen osmolaarisuutta säätelevänä aineena on bipaliumin fosfaatti. Magnesiumsulfaatti, kaliumkloridi ja rautasulfaatti puolestaan ​​tarjoavat välttämättömiä mineraaleja saprofyyttisten (vapaasti elävien) mikro-organismien kasvuun. Tämä kaava muodostaa magnesiumfosfaatin sakan.

Lopuksi agar-agar on yhdiste, joka antaa kiinteän konsistenssin väliaineelle ja vesi on liuotin kaikille komponenteille.

Muunnetulla Czapek-agar-kaavalla ei muodostu saostumia, ja se parantaa joidenkin sienten kasvukykyä.

Hapan Czapek-agarin äärimmäinen happamuus tekee siitä selektiivisemmän väliaineen, joka sallii vain happofiilisten mikro-organismien kasvun ja pystyy hyödyntämään epäorgaanista typpeä. Samaan aikaan Czapek-hiiva-agar parantaa tiettyjen sienten suorituskykyä.

Valmistautuminen

Keskikokoinen Czapek-Dox

Punnitaan 49 g dehydratoitua kasvualustaa ja liuotetaan tislattuun veteen. Kuumenna kunnes se kiehuu. Ravista seosta usein, kunnes se on täysin liuennut.

-Czapek Agar-kiilat

Jaa liuennut seos putkiin ja autoklaavi 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Kun irrotat autoklaavista, homogenoi ennen putkien laskemista ja anna jähmettyä.

-Czapek-agarlevyt

Autoklaavoi liuennut seos 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan ja anna sen jäähtyä 50 ° C: seen, homogenoidaan ja kaadetaan 20 ml steriileihin Petri-maljoihin. Anna jähmettyä, käännä ylösalaisin ja säilytä jääkaapissa käyttöönottoon asti.

PH: n tulisi olla 7,3 ± 0,2. Kuivatun väliaineen väri on valkoinen ja valmistettu väliaine on vaaleankeltaista, hieman sameaa johtuen flokkuloivasta saostumasta.

Czapek-elatusaine happamassa pH: ssa

Valmista kuten on kuvattu, mutta lisäämällä 10 ml steriiliä 10-prosenttista maitohappoa kutakin valmistetun väliaineen litraa kohti. Muokatun Czapek-elatusaineen tulisi olla pH: ssa 3,5 ± 0,2.

Muokattu Czapek Medium

Punnitaan 45,4 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan vettä. Loppuvalmiste on sama kuin edellä on kuvattu. Kuivatun väliaineen väri on valkoinen ja valmistettu väliaine on vaaleaa. Elatusaineen lopullinen pH on 6,8 ± 0,2.

Czapek-hiivaväliaine

Kutsutaan myös Czapek-hiivauute-agariksi (CYA). Se sisältää klassisen Czapek-agarin ja hiivauutteen elementtejä.

Käyttää

Czapek-alustaa käytetään saprofyyttisten mikro-organismien etsimiseen muun muassa maaperästä, vihanneksista, jyvistä, ilmasta, hyönteisistä.

Czapek-agaria happamassa pH: ssa käytetään happofiilisten mikro-organismien kasvattamiseen, kun taas modifioitu Czapek-agar on erityisen käyttökelpoinen klamydospoorien muodostumiseen Candida albicans -kompleksin lajeissa.

Lopuksi, Czapek-hiiva-agar on erittäin hyödyllinen Aspergilluksen ja Penicilliumin eristämiseksi.

kylvetty

-Czapek-agar

Aktinomyseetien etsimiseksi maaperässä toimitaan seuraavasti: näytettä käsitellään fenolisoidulla vedellä 30 minuutin ajan ja sitten kylvään 1 ml suspensiota Czapek-agar-agarille. Inkuboi 28 ° C: ssa 5 - 7 päivää.

Vihannes-, jyvä- ja hyönteisnäytteitä varten ne asetetaan suoraan agarille. Voit myös laimentaa ja siemeniä 0,1 ml agarin pinnalle.

-Muokattu Czapek-agar

Siemennyskäyttöön käytetään suoraa silmukkaa tai neulaa, se kyllästetään tamponilla ja agar inokuloidaan tekemällä puhkaisu, kunnes se koskettaa levyn pohjaa. Inkuboidaan 24 tuntia 28 ° C: ssa ja tutkitaan mikroskoopilla levyn ylä- ja alapuolella, onko muodostunut klamydospooria.

Inkubointilämpötila ja -aika

Inkubointilämpötila ja -aika vaihtelevat eristettävien mikro-organismien tyypin mukaan. Levyjä inkuboidaan yleensä yhden tai kahden viikon ajan lämpötila-alueella 20-25 ° C.

Joillekin kannoille on kuitenkin erityisiä olosuhteita. Esimerkiksi suurin osa Aspergillus-suvun lajeista kasvaa optimaalisesti 30 ° C: ssa; kuitenkin A. fumigatus kasvaa 50 ° C: ssa.

Yhden tai kahden viikon inkubaatioajanjakson suhteen on normaalia, Candida albicans voi kuitenkin kehittyä 24–48 tunnissa 25 ° C: ssa.

Joidenkin pesäkkeiden ominaispiirteet tällä väliaineella

-Penicillium atrovenetum

Se kehittyy 12 päivän inkubaatiossa 27 ° C: ssa. Heidän pesäkkeensä ovat pieniä (25 mm).

Pesäkkeillä on samettinen ulkonäkö, selkeä valkoinen reunus ja sinivihreä sävy keskellä, joka muuttuu harmaaksi ikääntyessään. Pesäkkeen kääntöpuoli on oranssi, jolloin keskiosa on samanvärinen pigmentin tuotannon vuoksi.

-Aspergillus niger

Se kehittyy valkoisesta keltaiseen sienihihakseen ja mustiin itiöihin.

-Candida albicans

Kermaisia ​​vaaleanbeigejä pesäkkeitä kehittyy. Modifioidussa Czapek-agarissa se muodostaa klamydosporit.

-Aspergillus parasiticus

Tummanvihreä sienseliumi kehittyy 7 päivässä 25 ° C: ssa.

QA

Viljelyalustan laadun arvioimiseksi voidaan istuttaa varmennettuja kontrollikantoja, kuten: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger kehittää valkoisen tai keltaisen sieneliön ja mustat itiöt noin viidessä päivässä, kun taas Candida albicansilla on tyydyttävä kasvu 24 tunnin inkubaatiossa 25 ° C: ssa; pesäkkeet ovat kermanvärisiä.

rajoitukset

Jotkut tutkimukset ovat paljastaneet, että Actinomycetes-proteiinien talteen ottamiseksi parhaiten saanut agar on perunadekstroosi-agar, jossa Czapek-agar on toisella sijalla, mutta Aspergilluksen ja Penicilliumin talteenottamisessa Czapek-agar on se, joka tarjoaa korkeimman talteenottoasteen.

Viitteet

1. Dávila M, et ai. Antagonistiset aktinomaseetit maatalouden kannalta tärkeitä fytopatogeenisiä sieniä vastaan. Rev. Mex. Science. Agríc 2013, 4 (8): 1187 - 196. Saatavana osoitteessa: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, vehnät Á. Asterogiini niger -kantojen eristäminen, jotka tuottavat okratoksiini A: ta, varastoidussa vihreässä kahvissa (Coffea arabica). Rev. Mex. Mic. 2010; 32: 63 - 68. Saatavana osoitteessa.scielo.org.
3. Wikipedian avustajat. Czapek-väliaine. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 13. tammikuuta 2019, 20:30 UTC. Saatavana osoitteessa: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Muokattu Czapek-Dox-agari. Saatavana osoitteessa: condalab.com
5. Viljelymedian mikropaketti. Czapek-Dox-agar. Diosponible: Medioscultivo.com