MAISJAUHO AGAR: TAUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2025

Maissijauho-agarilla on kiinteän elatusaineen, alhainen ravitseva teho, joka on käyttökelpoinen jatkoviljelyn tiettyjen sienten ja osoittamiseksi klamydosporeja kannoissa Candida albicans monimutkainen. Englanniksi se tunnetaan nimellä Corn Meal Agar.

Tavanomaisella maissijauheen väliaineella on hyvin yksinkertainen koostumus, se sisältää maissijauhoa, agar-agaria ja vettä. Alhaisen ravintotasonsa vuoksi se on ihanteellinen käytettäväksi sienikannan, etenkin mustien sienien, ylläpitämiseksi kohtuullisen ajan.

A. Candida albicans -kompleksin graafinen esitys maissijauha-agarilla. B. Mikroskoopin alla nähty Candida albicans -kompleksin klamydosporit, jotka on muodostettu maissijauha-agarille. Lähde: A. GrahamColm / B. Kirjoittaja: CDC / Dr. William Kaplan, kohteliaisuus: Kansanterveyskuvakirjasto.

Tässä väliaineessa suositaan Candida albicans -kompleksin itiöimistä, jos 1% Tween 80: tä lisätään agarin valmistuksen aikana. Klamydospoorien muodostuminen on ominaista tälle lajille ja käytännössä ainoa, joka vaikuttaa ihmisiin.

On muitakin lajeja, jotka muodostavat klamydospoorit, mutta ne eivät todennäköisesti vaikuta ihmisiin, kuten pingviininpoistoissa esiintyvä Candida australis tai C. clausenii, joka on harvoin esiintyvä saprofyyti. Samoin poikkeuksellisesti lajit C. stellatoidea ja C. tropicalis voivat muodostaa ne.

Toisaalta glukoosin lisääminen maissijauheen väliaineeseen edistää pigmenttien muodostumista Trichophytom rubrum -kannoissa.

On tärkeätä korostaa, että on sieniä, jotka eivät muodosta hyphae- tai pseudohyphae-maisiajauhoagaria, kuten Cryptococcus neoformans, jotka eroavat muista suvuista.

Maisjauhoagar voidaan valmistaa kotona laboratoriossa tai myös kaupallisia elatusaineita.

Perusta

Maisjauho on substraatti, agar on kiinteyttävä aine ja vesi on liuotin.

Maisjauhoagaria voidaan täydentää tween 80: lla (sorbitaanimono-oleaatti tai polysorbaattipolyesteri 80). Tämä yhdiste vähentää väliaineen pintajännitystä sen emulgointivoiman vuoksi.

Se luo myös vihamielisen ympäristön, joka estää liiallista solujen lisääntymistä ja stimuloi hyfajen kasvua, suosimalla myös klamydospoorien tuotantoa; jälkimmäinen tarkasteli vastusrakenteita. Tämä rakenne auttaa tunnistamaan Candida albicans -lajit.

Omasta puolestaan ​​tässä väliaineessa oleva glukoosi lisää joidenkin sienten pigmentinmuodostuskykyä.

On huomattava, että maissijauheen väliaine glukoosin kanssa ei ole käyttökelpoinen klamydospoorien osoittamiseen Candida albicans -kompleksissa.

Valmistautuminen

Kotitekoinen maissi-agarivalmistus

Punnitaan 47 g keltaista maissijauhetta ja liuotetaan 500 ml: aan tislattua vettä. Kuumenna 60 ° C: seen sekoittaen valmistetta noin tunnin ajan. Suodata sitten harso- ja puuvillapalan läpi, valinnaisesti se voidaan suodattaa uudelleen johtamalla valmiste Whatman nro 2 -suodatinpaperin läpi.

Täytetään tilavuuteen 1000 ml tislatulla vedellä. Lisää 17 g agar-agaria, kuumenna, kunnes se on liuennut. Autoklaavi 15 minuutin ajan 121 ºC: ssa.

Tarjoa steriileissä Petri-maljoissa. Säilytä jääkaapissa.

Valmistetun väliaineen väri on valkeahko ja muodoltaan muhkaava.

Lisää 10 g glukoosia, jos haluat valmistaa maissijauhetta glukoosilla edellä kuvattuun valmisteeseen.

Kaupallinen maissijauho agar

Punnitaan 17 g dehydratoitua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Seosta voidaan lämmittää ravistamalla varovasti, jotta se liukenee kokonaan. Steriloidaan autoklaavissa 121 ºC: n paineessa 15 lb 15 minuutin ajan.

Kaada steriileihin Petri-maljoihin. Anna kiinteytyä. Käännä käännös ja säilytä jääkaapissa käyttöönottoon asti. Temper ennen käyttöä.

PH: n tulisi olla 6,0 ± 0,2 lämpötilassa 25 ºC.

Maisjauho agar Tween 80: llä

ISO 18416 -standardin noudattamiseksi maissijauha-agar on valmistettava seuraavasti:

Punnitaan 65 grammaa litrassa ja lisätään 10 ml Tween 80: tä. Kuumennetaan ja keitetään muutama minuutti, kunnes liukeneminen on tärkeää, ettet ylikuumene liikaa. Steriloidaan 121 ºC: ssa 15 minuutin ajan.

Maisjauhoagar glukoosilla

Trichophyton rubrum -pesäkkeiden kromogeenisen tehon parantamiseksi ja niiden erottamiseksi T. mentagrophytes -bakteereista voidaan alkuperäiseen kaavaan lisätä 0,2% glukoosia. Sinulla ei tarvitse olla Tween 80, koska glukoosi estää klamydosporien muodostumista.

Käyttää

Pääasiassa maissijauha-agarin käyttö on tarkoitettu Candida-kantojen tutkimiseen, auttaen niiden tunnistamista albicans-lajien klamydospoorien tunnusomaisella havainnoinnilla. Toisin sanoen tämän agarin käyttö toimii apumenetelmänä näiden hiivien tunnistamiseen.

Sekä saprofyyttiset että patogeeniset lajit voivat kehittyä tälle agarille, mutta kukin muodostaa ominaisia ​​myseelirakenteita. Esimerkiksi Torulopsis-suvun lajit eivät tuota myseeliä ja lisääntyvät vain blastoconidian avulla.

Samoin Trichosporon- ja Geotrichum -lajit tuottavat artrokonidioita maissijauho-agarilla, ja joskus on vaikea erottaa toisistaan.

Geotrichum-suvun Arthroconidia tuottaa hyphaen jatkeen, joka muistuttaa jääkiekkoa.

Myös pigmenttien tuottaminen käyttämällä maissijauhetta agaria, jota on täydennetty glukoosilla, on hyödyllinen Trichophytom rubrumin tunnistamisessa.

kylvetty

Ensisijaisesta viljelyelatusaineesta - Sabouraud-agarista - kliinisistä näytteistä, kosmetiikasta ja maaperästä saadut epäilyttävät Candida-pesäkkeet viljellään muun muassa maissijauho-agarilla. Elatusaine siemennetään ja inkuboidaan 22 ° C: ssa 24 - 48 tuntia. Inkubointiaikaa voidaan pidentää tarvittaessa.

Chlamydosporin esittely

Tätä tarkoitusta varten maissijauha-agar Tween 80: llä on inokuloitava käyttämällä Dalmau-tekniikkaa. Tämä menetelmä käsittää osan epäillystä siirtokunnasta platinakahvan kanssa ja kolmen yhdensuuntaisen leikkauksen tekemisen keskeltä pitäen kahvan 45 °: n lämpötilassa. Leikkaukset tulisi erottaa 1 cm: n etäisyydellä toisistaan.

Sen jälkeen aikaisemmin liekitty peite-esine asetetaan kylvettyihin raitoihin siten, että puoli peitetään ja toinen paljastuu.

Inkuboi kylvölevyjä 30 ° C: ssa 48-72 tuntia ja tutkitaan sitten mikroskoopin alla kannen luiston läpi.

Sienikantojen ylläpito

Kantojen ylläpitämiseksi siemennetyt ja kasvatetut levyt pidetään jääkaapissa (4 - 8 ºC). Tällä tavalla ne voivat kestää useita viikkoja ja niitä voidaan käyttää opetus- tai tutkimustarkoituksiin.

QA

Steriiliyden kontrolloimiseksi levyä inkuboidaan ilman inokulaatiota huoneenlämpötilassa, on odotettavissa, että kasvua tai värin muutosta ei tapahdu.

Laadunvalvontaa varten voidaan kylvää tunnettuja kantoja, kuten: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Odotetut tulokset ovat S. aureuksen ja E. colin osittainen estäminen. Muissa kannoissa odotetaan tyydyttävää kasvua.

Aspergillus niger kasvaa mustien ja itiöiden muodostuneiden pesäkkeiden kanssa noin 5 päivän inkubointiajassa.

Candida albicans -hiivapesäkkeet, joilla on klamydospoorituotanto.

Saccharomyces cerevisiae tuottaa suuria hiivasoluja.

rajoitukset

Levyn pohjaan muodostuu keltainen sakka, jota ei pidä sekoittaa pesäkkeisiin.

Viitteet

1. Neogen Laboratories. Maissiaterian agar. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com.
2. Viljelymedian mikropaketti. Maissiaterian agar. Saatavana osoitteessa: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Hiivatunnistusopas. Saatavana osoitteessa: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Kansanterveys, 2002; 19 (4): 206 - 208. Saatavana osoitteessa: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Yleinen mykologia. 1994. Venezuelan keskusyliopiston toinen painos, Library Editions. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Vertaileva tutkimus eräistä makro- ja mikroskooppimenetelmistä Candida-suvun eristämiseksi ja tunnistamiseksi. Colombian Rev. of Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33 - 57. Saatavana osoitteessa: Ciencias.unal.edu.co