Agar Hektoen tai Hektoen enteerisesti agar kiinteä alusta on selektiivinen ja ero kulttuuriin. King ja Metzger loivat sen Hektoen-instituutissa Shigella- ja Salmonella-sukujen enteropatogeenisten bakteerien eristämiseksi.
Elatusaine koostuu protektoospeptonista, hiivauutteesta, sappisuoloista, laktoosista, sakkaroosista, salisiinista, natriumtiosulfaatista, natriumkloridista, rautasitraatista, ammoniumsitraatista, bromitymolisinisestä, happamasta fuksiinista ja agarista. Tämä formulaatio mahdollistaa Shigella- ja Salmonella-sukujen erottamisen muista bakteereista, jotka kykenevät kasvamaan tässä väliaineessa.
A. Neitsyt Hektoen-agar B. Siemenet Hektoen-agar. Lähde: Flickr.com/Alkuperäinen lähettäjä oli Philippinjl ranskalaisessa Wikipediassa.
Vaikka on myös muita väliaineita, joilla on sama tehtävä kuin Hektoen-agarilla, sillä on suurempi etu muihin väliaineisiin verrattuna, etenkin kun haluat palauttaa Shigella-lajit.
Kummankin sukupuolen lajit aiheuttavat ihmisille vakavia maha-suolikanavan ongelmia saastuneiden elintarvikkeiden kulutuksen vuoksi; siksi tartunta on ulostetta - suun kautta. Siksi Hektoen-agarin käyttö on osoitettu pääasiassa uloste- ja ruuanäytteiden mikrobiologisissa analyyseissä.
Perusta
Hektoen-agar sisältää peptoneja ja hiivauutetta ravinteiden lähteenä tarjoamalla välttämättömiä elementtejä mikrobien kehitykseen.
Sillä on kuitenkin myös sappisuoloja, jotka vaikuttavat estämällä joidenkin bakteerien, etenkin gram-positiivisten ja joidenkin gram-negatiivisten, kasvua. Tästä syystä sitä pidetään valikoivana väliaineena.
Toisaalta Hektoen-agar on differentiaalinen väliaine. Tämä ominaisuus annetaan käymiskelpoisten hiilihydraattien, kuten laktoosin, sakkaroosin ja salisiinin, läsnä ollessa yhdessä pH-indikaattorijärjestelmän kanssa, jota edustavat bromitymolisininen ja hapan fuksiini.
Kaikille bakteereille, jotka kykenevät kasvamaan tällä väliaineella ja jotka eivät kuulu Salmonella- ja Shigella-sukuun, kehittyvät lohi- tai appelsiinipesäkkeet, Proteus-sukua lukuun ottamatta. Tämä johtuu yhden tai useamman läsnä olevan hiilihydraatin käymisestä, joka happamoittaa väliainetta, mikä saa pH-indikaattorin kääntymään.
Shigella- ja Salmonella-suvut puolestaan eivät kykene fermentoimaan mitään läsnä olevista hiilihydraateista käyttämällä energianlähteenä vain peptoneja, jotka alkaloivat väliainetta ja siksi niiden pesäkkeet ovat sinivihreitä.
Bakteerit, jotka kykenevät muodostamaan rikkivetyä (väritöntä kaasua), voidaan myös erottaa tässä väliaineessa. Natriumtiosulfaatti toimii rikin lähteenä, kun taas rautasitraatti on kehittäjä. Molemmat yhdisteet mahdollistavat mustan raudasulfidisaostuman muodostumisen, joka osoittaa reaktion.
Koloniassa keskellä oleva musta sakka, jonka ympärillä on läpinäkyvä halo, antaa kalansilmän ulkonäön. Tämä ominaisuus viittaa Salmonella-suvun esiintymiseen.
Lopuksi natriumkloridi ylläpitää osmoottista tasapainoa ja agar tarjoaa väliaineelle kiinteän konsistenssin.
Valmistautuminen
Punnitaan 76 g dehydratoitua väliainetta ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Ravista seosta voimakkaasti ja anna sen sitten levätä 10 - 15 minuuttia. Sitä voidaan kuumentaa ja keittää antaen kiertoliikkeitä täydelliseen liukenemiseensa. Tätä alustaa ei autoklaavoida.
Kun väliaine saavuttaa noin 45 ° C: n lämpötilan, 20 ml: n tilavuus kaadetaan suoraan steriileihin Petri-maljoihin.
Agarin annetaan jähmettyä. Tuolloin ne ovat käyttövalmiita. On suositeltavaa käyttää niitä heti. Jos tämä ei ole mahdollista, niitä pidetään jääkaapissa käytöstä asti.
Levyt tulee poistaa jääkaapista etukäteen ennen siementen sieppaamista huoneenlämpöiseksi.
Elatusaineen pH: n tulisi olla 7,5 ± 0,2. Kuivatun väliaineen väri on violetti ja valmistettu väliaine on ruskehtavanvihreä.
Käyttää
Hektoen-agarin käyttöä suositellaan Shigella- ja Salmonella-suvun bakteerien etsimiseksi ulosteesta ja ruuanäytteistä.
Mahdollisuus eristää nämä bakteerit lisääntyy huomattavasti, jos näyte on aiemmin rikastettu erityisillä liemeillä, kuten seleniittiliemi, kystiini seleniittilieme, tetrationaattilieme jne.
Viljelyn on oltava vahvaa ja kylvö tapahtuu viipaloimalla. Levyjä inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 - 48 tuntia aerobioosissa.
Inkubointia 48 tunnin ajan suositellaan, koska pesäkkeiden ominaisuudet ovat selkeämpiä niiden tulkitsemiseksi ja eriyttämiseksi tällä hetkellä.
QA
Laadunvalvonnan suorittamiseksi tällä väliaineella käytetään sertifioituja bakteerikantoja, kuten: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 ja Shigella sonnei ATCC 25931.
Odotetut tulokset ovat seuraavat: Salmonella typhimurium ja Salmonella enteritidis -bakteerien tulisi kehittää sinivihreät pesäkkeet mustalla keskuksella tai ilman. Shigella-lajit kasvavat sinivihreinä pesäkkeinä.
Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 ja Staphylococcus aureus ATCC 25923 kannat voivat myös olla mukana.
Näissä tapauksissa havaitut ominaispiirteet ovat seuraavat: E. coli ja K. pneumoniae kehittävät tässä väliaineessa lohi-oranssin pesäkkeitä, joiden ympärillä on samanvärisiä sakkaa. Proteus kehittää sinivihreät pesäkkeet mustan keskuksen kanssa tai ilman.
Vaikka S. aureus ja E. faecalis on estettävä, E. faecalis on toisinaan onnistunut kasvamaan hyvin pieninä, keltaisina pesäkkeinä.
Toisaalta, koska tätä väliainetta ei autoklaavoida, on tärkeää arvioida väliaineen steriiliys. Siksi jokaisesta valmistetusta erästä yhtä tai kahta rokottamatonta levyä tulisi inkuboida 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan aerobioosissa.
Ilmeisesti minkäänlaista kasvua ei odoteta lautaselle.
rajoitukset
- Proteus-lajit voivat kehittyä tässä väliaineessa, ja niiden pesäkkeiden ominaisuudet voidaan sekoittaa Salmonella- tai Shigella-lajeihin. Tästä syystä epäilyttävät pesäkkeet on vahvistettava biokemiallisilla testeillä.
-On välttämätöntä, että tämän väliaineen käyttö liitetään muihin vähemmän selektiivisiin agareihin, koska jos haettu mikro-organismi löytyy pieninä pitoisuuksina, se ei ehkä kehity tässä väliaineessa.
- Älä ylikuumenna valmistuksen aikana, koska liiallinen lämpö muuttaa väliaineen koostumusta.
- Yleensä voi esiintyä laktoosia fermentoivia Salmonella-pesäkkeitä, jotka saattavat jäädä huomaamatta.
Viitteet
- Wikipedian avustajat. Hektoen-enteerinen agar. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 13. maaliskuuta 2019, 23:38 UTC. Saatavilla:.wikipedia.org / Pääsy 16. maaliskuuta 2019.
- BD Laboratories. BD Hektoen Enteriiniagar (HE Agar). 2013.Saatavilla osoitteessa: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoenin enteerinen agar. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo -laboratoriot. Hektoen-agar. Saatavana osoitteessa: f-soria.es
- Difco & BBL -käsikirja, Hektoen Enteric Agar. 2. painos. Saatavana: bd.com/europe