AGAR HERRA: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2025

Agar MRS on selektiivinen kiinteä alusta kulttuuri eristämiseen käytetty ja luettelointi maitohappobakteerien, erityisesti Lactobacillus-suvun. Tämän agarin loivat vuonna 1960 ihmiset, Rogosa ja Sharpe, kantaen samaa nimeä, mutta monimutkaisuudestaan ​​johtuen käytetään usein lyhennettä MRS.

Se koostuu protioosipeptonista, lihauutteesta, hiivauutteesta, glukoosista, sorbitaanimono- oleaatista, dikaliumfosfaatista, natriumasetaatista, ammoniumsitraatista, magnesiumsulfaatista, mangaanisulfaatista ja agarista.

Man Rogosa ja Sharpe Agar (MRS) kylvettiin Lactobacillus sp. Lähde: Tämän artikkelin kirjoittajien lahjoittama valokuva: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Tutkimuksen aikana otettu valokuva, jonka otsikko on: Maitohappobakteerien ja probioottipotentiaalisten bifidobakteerien arviointi rintamaidossa ja vastasyntyneiden ulosteessa.

Tämä koostumus mahdollistaa maitohappobakteereiden asianmukaisen kehittymisen kliinisistä näytteistä, kuten ulosteista, emättimen tyhjentämisestä, suun kautta otettavista näytteistä ja rintamaidosta, samoin kuin meijeri- ja liharuokista.

Sitä ei käytetä rutiininomaisesti kliinisissä laboratorioissa, koska maitohappobakteerit osallistuvat harvoin sairauden prosesseihin. Ruoka-mikrobiologian alalla MRS-agarin käyttö on kuitenkin yleisempää.

Toisaalta tätä väliainetta käyttävät jotkut tutkimuskeskukset, joiden tavoitteena on maitohappobakteerien tutkiminen.

Perusta

Ihmisen, Rogosan ja Sharpe-agarin koostumus on melko monimutkainen. Hajottamalla kunkin komponentin toiminta voidaan selittää sen perusta.

Protoseptopeptoni, lihauute, hiivauute ja glukoosi ovat ravintoaineita, jotka tarjoavat hiilen, typen, vitamiinien ja mineraalien lähteitä, jotka ovat välttämättömiä bakteerien kasvulle. Lisäksi glukoosi on universaali energialähde, jota käytetään useimmissa elatusaineissa.

Toisaalta maitohappobakteerien kasvun edistämiseksi tarvitaan Lactobacilluksen ja vastaavien bakteerien metaboliassa välttämättömiä kofaktoreita (kationeja); Nämä yhdisteet ovat natrium-, magnesium- ja mangaanisuolat.

Samoin sorbitaanimono- oleaatti tai polysorbaatti 80 ovat tärkeä rasvahappojen lähde, koska ne imeytyvät ravintoaineiksi.

Lisäksi sorbitaanimonoleaatti ja ammoniumsitraatti vaikuttavat estämällä mukana olevien kasvistojen, etenkin gram-negatiivisten bakteerien, kehitystä tarjoamalla tämän agarin selektiivisen luonteen.

Lopuksi, agar-agar on se, joka antaa kiinteän konsistenssin väliaineelle.

On myös muita variantteja Man Rogosa Sharpe-agarista; yhtä niistä on täydennetty kysteiinillä (MRSc), joka on erittäin hyödyllinen bifidobakteerien eristämisessä muiden mikro-organismien joukossa. Toisaalta on olemassa MRS-elatusaine, jota on täydennetty neomysiinillä, paromomysiinillä, nalidiksiinihapolla ja litiumkloridilla, ja jotka ovat erityisiä bifidobakteerien selektiiviselle laskemiselle maitotuotteissa.

Valmistautuminen

Punnitaan 68,25 grammaa kuivattua väliainetta ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Anna seistä 5 minuuttia. Liukena kokonaan kääntämällä lämmönlähteeseen, sekoittaen usein, ja keitä 1 - 2 minuuttia. Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Autoklaavista poistuttaessa anna seistä muutama minuutti ja jakaa vielä kuumana steriileissä Petri-maljoissa.

Annetaan jähmettyä ja kääntää levyt ylös, järjestää levytelineisiin ja jääkaappiin asti käyttöön. Anna levyjen lämmetä huoneenlämpötilaan ennen käyttöä.

Elatusaineen pH: n tulisi olla 6,4 ± 0,2. Jotkut liikerakennukset suosittelevat pH: ta välillä 5,5 - 5,9.

Kuivattu väliaine on väriltään beige ja valmistettu tummasta keltaista.

Sekä dehydratoitu väliaine että valmistetut levyt tulisi säilyttää 2 - 8 ° C: ssa.

Sovellukset

MRS-agarlevyt voivat olla pinnan siemeniä (tyhjennys tai Drigalski-lastut). Se voidaan myös kylvää syvyydellä. Levyjä olisi inkuboitiin 37 ° C: ssa microaerophilicity (4% O ₂ ja 5-10% CO ₂) ja 24-72 tuntia.

Kylvomenetelmä valitaan tavoitteen mukaan (eristäminen tai laskeminen).

Pesäkkeiden ominaisuudet

Lactobacilluksen oletetut pesäkkeet kasvavat vaaleanvalkoisina ja näyttävät tässä agarista limaisen tai kermaisen. Ne on myöhemmin tunnistettava.

Maitohappobakteerien eristäminen

Tätä varten käytetään pinnan kylvöä. Käytettävät näytteet vaativat aiemman menettelyn.

Rintamaidonäytteiden osalta on suositeltavaa sentrifugoida 1 ml näytettä nopeudella 14 000 rpm 10 minuutin ajan rasvakerroksen poistamiseksi. 900 ui heitetään pois, ja jäljelle jäävissä 100 ui sedimentti suspendoidaan ja kaadetaan MRS-agar-pinnan pinnalle, ja sen jälkeen se tulisi jakaa tasaisesti Drigalski-lastalla.

Ulosteenäytteiden tapauksessa yksi (1) gramma ulosteesta punnitaan ja homogenoidaan 9 ml: ssa 0,1% steriiliä peptonivettä, mikä vastaa 1/10 laimennusta. Sitten tehdään sarjalaimennuksia, kunnes lopullinen laimennus on ^10-4.

Lopuksi otetaan 100 ui 10 - ², 10 - ³ ja 10 - ^4- laimennoksista ja jokaiselle laimennukselle siirretään MRS-agar, jakaen tasaisesti Drigalski-lastalla.

Maitohappobakteerit lasketaan

Tässä tapauksessa kylvö tehdään syvyydellä.

Rintamaidonäytteistä otetaan 1 ml ja asetetaan steriiliin kartiomaiseen muoviputkeen. MRS-agaria lisätään suunnilleen 40 ° C: n lämpötilassa lopulliseen tilavuuteen 25 ml, jolloin saadaan homogeeninen seos. Seuraavaksi se kaadetaan steriileihin Petri-maljoihin tasaisesti ja annetaan seistä polymeroitumiseen saakka.

Ulosteenäytteille tehdään laimennukset, kuten aiemmin on kuvattu. Ota 1 ml jokaisesta laimennuksesta ja aseta se steriileihin kartiomaisiin muoviputkiin. Sula MRS-agaria lisätään 25 ml: n tilavuuteen.

Kunkin laimennoksen seos kaadetaan tasaisesti steriileihin Petri-maljoihin. Lopuksi sen annetaan levätä polymeroitumiseen saakka.

Pesäkkeet lasketaan Man Rogosa- ja Sharpe (MRS)-agariin. Lähde: Tälle artikkelille lahjoitettu valokuva. Tekijät: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Kuva otettu tutkimuksen aikana otsikolla: Maitohappobakteereiden ja probioottipotentiaalisten bifidobakteerien arviointi rintamaitoon ja imeväisten ulosteisiin.

Tutkimuksen taso

Maitohappobakteerien tutkiminen herättää joka päivä enemmän kiinnostusta. Erityisesti tutkijat pyrkivät oppimaan uusista kannoista ja niiden potentiaalista aloitusfermenteiksi standardoinnissa maitotuotteiden valmistuksessa muun muassa.

Tässä mielessä Alvarado et ai. (2007) käytti MRS-agaria suorittamaan tutkimuksen, jossa ne eristettiin, tunnistettiin ja karakterisoitiin maitohappobakteereja, jotka esiintyivät käsityöläisessä Andien savustetussa Venezuelan juustossa.

Juustossa he löysivät Lactococcus- ja Lactobacillus-suvun bakteerit ja päättelivät, että eristettyjen kantojen seokset ovat sopivia lähtökannoiksi juustojen valmistuksessa pastöroidusta maidosta.

Toisaalta Sánchez et ai. (2017) käytti MRS-agaria maitohappobakteereiden esiintymiseen porsaiden ruuansulatuksessa, jotta niitä voitaisiin käyttää natiivina probiootteina, jotka lisäävät terveiden porsaiden tuottavuutta.

Tällä väliaineella he onnistuivat eristämään neljä lajia: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae ja Pediococcus pentosaceus.

Samoin Báez et ai. (2019) käytti MRS-agaria arvioimaan maitohappobakteereita (LAB) ja bifidobakteereita, joilla on probioottinen potentiaali rintamaitoon ja imeväisten ulosteisiin.

He onnistuivat eristämään 11 ​​BAL- ja 3 Bifidobacteria sp -maitoa rintamaitoon ja 8 BAL ja 2 Bifidobacteria sp. ulosteessa. Kaikki täyttivät tietyt parametrit, jotka todistavat ne bakteereina, joilla on probioottinen vaikutus.

Kirjoittajat päättelivät, että sekä rintamaito että yksinomaan imettävien imeväisten uloste toimivat probioottisten bakteerien luonnollisina lähteinä.

QA

MRS-agarin laadun arvioimiseksi kontrollikantoja, kuten:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358 ja Escherichia coli.

Odotetut tulokset ovat tyydyttävää kasvua kuuden ensimmäisen bakteerin suhteen, kun taas E. coli ja Bacillus cereus on estettävä kokonaan.

Viitteet

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Venezuelalaisen savustetun Andien käsityökjuuston maitohappobakteerien eristäminen, tunnistaminen ja karakterisointi. Sen käyttö aloituskulttuurina. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301 - 308. Saatavana osoitteessa: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Maitohappobakteerien eristäminen possujen ruuansulatuksesta. Rev. vet. Peru 2017; 28 (3): 730 - 736. Saatavana osoitteessa: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Probioottipotentiaalisten maitohappobakteerien ja bifidobakteerien arviointi rintamaitoon ja imeväisten ulosteisiin Acevedon kunnassa, Miranda 2017. Perustutkinnon suorittaminen kandidaatin tutkinnon suorittamiseksi Bioanalysis. Carabobon yliopisto, Venezuela.
4. Britannia Laboratory. MRS agar. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
5. Wikipedian avustajat. MRS agar. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 10. tammikuuta 2018, kello 19:44 UTC. Saatavana: wikipedia.org Käytetty 17. helmikuuta 2019.
6. Roy D. Elatusaineet bifidobakteerien eristämiseksi ja laskemiseksi maitotuotteissa. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167 - 82.