RAVITSEVA AGAR: PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2026

Ravintoagarilla on epäselektiivinen väliaine eikä ero kiinteän kulttuuri. Tässä kasvualustassa kasvaa kaikenlaisia ​​bakteereja, jotka eivät ole ravinnon kannalta vaativia.

Se on yksinkertainen väliaine ja nimestä huolimatta sisältää pienemmän ravintoarvon verrattuna muihin vastaaviin väliaineisiin, kuten Brain Heart Infusion Agar tai Trypticase Soy Agar.

Pesäkkeet luottavat ravintoaine agariin

Sen hyödyllisyys laboratoriossa on hyvin monipuolinen. Sitä käytetään pääasiassa lajien subkulttuuriin, kantojen ylläpitämiseen ja pesäkkeiden laskemiseen perustana mm. Veriagarin valmistukselle.

Samoin joidenkin bakteerikantojen tuottamien pigmenttituotteiden voidaan erottaa poikkeuksellisesti vaaleanbeigevärinsä vuoksi, kuten Pseudomonas aeruginosan vihertävä pigmentti, Serratia marcescensin tuottama tiilipunainen pigmentti huoneenlämpötilassa, Staphylococcus -keltaisen kultakeltainen pigmentti. aureus, muun muassa.

Lisäksi se on yksi markkinoiden halvimmista kasvavista kasvualustoista.

Perusta

Kuten jo edellä mainittiin, se on hyvin yksinkertainen väliaine, joka perustuu ravinteiden tarjoamiseen bakteerien kasvulle ilman rajoituksia ja ilman monimutkaisia ​​tulkintareaktioita.

Koska väliaine on läpikuultava, se on ihanteellinen pesäkkeiden laskemiseen syvyyskasvatusmenetelmällä.

Sävellys

Se koostuu pääasiassa lihauutteesta tai hiivauutteesta, peptoneista tai haiman gelatiinihajotteesta, agar-agarista, natriumkloridista ja tislatusta vedestä.

Liha- tai hiivauute ja peptonit edustavat välttämättömiä hiilen ja mineraalien lähteitä (typpi, fosfori ja rikki), joita bakteerit käyttävät energian lähteenä ja kasvutekijöinä.

Samoin agar-agar on kaikkien kiinteiden viljelyalustojen emäs, joka tulee korvaamaan liivate, joka oli ensimmäinen emäsyhdiste, jota Robert Koch käytti antamaan kiinteät konsistenssit väliaineelleen.

Agar on polysakkaridi, joka koostuu galaktoosista, galaktomannaanista, agaroosista ja agaropektiinistä. Se asettuu 40 ° C: seen ja sulaa lähes 100 ° C: seen.

Natriumkloridi puolestaan ​​tarjoaa väliaineelle osmolaarisuuden, joka tarvitaan bakteerien kehitykseen.

Viimeinkin vesi palvelee lyofilisoitujen yhdisteiden hydratointia ja liuottamista. Tislattua vettä, joka on säädetty neutraaliin pH-arvoon, tulisi käyttää. Vesijohtovettä ei tule käyttää, koska se sisältää kalsiumia ja magnesiumia, joka voi reagoida väliaineessa olevien fosfaattien kanssa ja muodostaa liukenemattomia suoloja.

Valmistautuminen

Yhdelle litralle ravintoagaria punnitaan 31 g dehydratoitua alustaa. Sijoita se pulloon ja liuosta litraan tislattua vettä. Kuumenna 5 minuutin seisomisen jälkeen lämmönlähteellä ja sekoita jatkuvasti, kunnes kiehuu 1 tai 2 minuuttia.

Kasvatusalustan valmistus.

Kolvi asetetaan sitten autoklaaviin ja steriloidaan 121 ° C: ssa 20 minuutin ajan.

Sterilointi autoklaavissa

Ajan lopussa se poistetaan autoklaavista ja tarjoillaan steriileissä Petri-maljoissa käyttämällä laminaarivirtauskupua tai Bunsen-poltinta.

Jos Petri-maljoja on kertakäyttöisiä (muovia), väliaine on jaettava, kun agarin lämpötila on noin 50 ° C, jotta liiallinen kuumuus ei estä niiden muodonmuutosta.

Annetaan jähmettyä ja varastoidaan kääntyvällä levypidikkeellä ja jäähdytetään 2–8 ° C: ssa käyttöön asti.

Levyt on karkaistava ennen niiden siementtämistä. Ravinne-agarlevyjä ei tule käyttää, jos ne ovat saastuneita tai kuivattuja.

Valmistetun väliaineen pH on asetettava arvoon 7,3 ± 0,2.

Sovellukset

Se on yksinkertaisin elatusaine, jota käytetään mikrobiologisessa laboratoriossa. Sen formulaatio on erinomainen ei-vaativien bakteerien kasvuun.

Sen pääkäyttö selitetään alla:

Perustana veriagarin valmistukselle

Tätä väliainetta käytetään joskus emäksenä veriagarin valmistukseen, mutta se ei ole yleisimmin käytetty emäs.

Stimuloi itiöitä muodostavien bakteerien itiötä

Tämä elatusaine on erityisen käyttökelpoinen itiöitä muodostavien bakteerien, kuten Bacillus sp.

Tätä varten kylvään Bacillus-suvun kanta ja inkuboidaan 24 tuntia 37 ° C: ssa aerobioosissa. Kun pesäkkeet ovat kasvaneet, levylle kohdistetaan lämpötilarasitus, ts. Uunin lämpötila nostetaan 44 ° C: seen ja jätetään vielä 24 tunniksi tai asetetaan jääkaappiin 24 tunniksi.

Ajan lopussa viljelmälevyt tehdään ja värjätään Gram-värjäyksellä tai Shaeffer-Fulton-itiövärillä. Niissä havaitaan bakteerit, joissa on endosporaa (itiöt bacilluksen sisällä) ja eksospoorit (itiöt bacilluksen ulkopuolella).

Kannan ylläpito

Jotkut tutkimus- tai yliopisto-opetusta tukevat laboratoriot vaativat kliinisesti tärkeiden bakteerien ylläpitämistä mahdollisimman pitkään, jotta bakteeripankkia (bakterioteca) voidaan käyttää tutkimustyöhön tai opetuskäytäntöjen valmisteluun, jos Opiskelija oppii käsittelemään ja tunnistamaan näitä mikro-organismeja.

Ravinne-agaria sekä aivojen sydämen infuusio-agaria voidaan käyttää tähän tarkoitukseen. Agar valmistetaan, kaadetaan putkiin bakeliittikannella ja kallistetaan pohjalle siten, että agar jähmettyy muodostaen lohkon alaosaan ja viisteen pinnalle (huilu nokka).

Jokaiseen putkeen on merkitty siemennettävien bakteerien nimi ja päivämäärä. Jokainen bakteereista ympätään viistoon ja inkuboidaan 24 tunnin ajan. Kun pesäkkeet ovat kasvaneet, putkia säilytetään huoneenlämpötilassa.

Bakterioteka on uusittava 1–3 kuukaudeksi väliaineen saastumisen ja kuivumisen sekä bakteerien kuoleman välttämiseksi.

Vain ei-nirso bakteereja voidaan ylläpitää tällä tavoin.

Pesäkkeiden lukumäärä

Vaikka pesäkkeiden laskemiseksi on olemassa erityisiä keinoja, kuten vakiolaskuriagar, ravintoaine-agaria voidaan käyttää tähän tarkoitukseen joko kylvöllä pinnalla drigalski-lastalla tai syvyydellä. Tästä syystä se on erittäin hyödyllinen ruoan ja veden mikrobiologisessa analyysissä.

Käynnissä diagnostiset testit

Koska se on väliaine, joka ei sisällä verta tai muita lisäaineita, se on ihanteellinen ottaa tällä väliaineella kasvatetut pesäkkeet katalaasikokeen suorittamiseksi.

Samoin sen vaalean värin takia on osoitettu suorittavan oksidaasitestit suoraan kylvetyn agarin alueella, ilman häiriöitä.

Mesofiilisten aerobien talteenotto vapaa-ajan suolavesistä (rannat)

Ravinne-agar, joka on valmistettu 10-prosenttisella merivedellä, on hyödyllinen mesofiilisten aerobien arvioimiseksi rannan vesillä.

Tällä tavoin voidaan arvioida veden todellinen saastumisaste näillä mikro-organismeilla, koska tämän tyyppisissä näytteissä tulokset ovat päällekkäisiä, kun käytetään tavanomaisella tavalla valmistettuja elatusaineita.

Tämän osoitti Cortez et ai. vuonna 2013 tutkimustyössä.

Tämä voidaan selittää johtuen äkillisestä muutoksesta, jonka bakteerit käyvät läpi mennessä ylinsuolatusta ympäristöstä vähän suolaa sisältävään ympäristöön, minkä vuoksi mikro-organismit siirtyvät letargiatilaan, jossa ne ovat elinkykyisiä, mutta eivät viljelykelpoisia.

Viitteet

1. "Ravitseva agar." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 13. syyskuuta 2016, kello 20:33 UTC. 29. joulukuuta 2018, 21:04 fi.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, Toimitus Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Merivedellä valmistetun elatusaineen vaikutus terveysindikaattoreihin kylpylöiden merivedessä Chichirivichessä, Falcónin osavaltiossa, Venezuelassa. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M ja Cardoso M. Veden mikrobiologinen laatu sikiöiden annosta varten. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42 - 49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Käytännön kliininen mikrobiologia. Cadizin yliopisto, 2. painos. UCA: n julkaisupalvelu.