PERUNADEKSTROOSIAGAR: PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

Perunadekstroosiagar on keskikokoinen, kiinteä aine ei - selektiivinen ravinteiden kulttuuri. Bakteeri- ja sienilajit voivat kasvaa siinä, mutta sen käyttö on erityisesti tarkoitettu rihmasienten ja hiivien eristämiseen. Se tunnetaan myös PDA-väliaineena englanninkielisessä ilmaisussa Potato Dextrose Agar.

Se on erityisen hyödyllinen fytopatogeenisten sienien, toisin sanoen kasveihin vaikuttavien sienten, eristämiseen. Näytteiden kylvämiseksi tartunnan saaneista vihanneksista voidaan käyttää muita keinoja, kuten Sabouraud-agaria tai malta-agaria, mutta rutiinikäyttöön perunadekstroosi-agar on suositeltavampi, koska saadaan suurempi itiö.

Aspergillus niger ja Sinemas perunadekstroosiagarissa. Lähde: Alextrevelian 006 englanniksi Wikipedia / Joselrojas

Sitä käytetään myös sienipesäkkeiden laskemiseen kosmetiikan, farmaseuttisten tuotteiden ja eräiden maitotuotteiden näytteissä. Samoin se sopii kylvämään näytteitä ihohalkaisuista dermatofyyttien etsimiseksi, jotka kasvavat erittäin hyvin tässä väliaineessa kehittäen ominaisia ​​pigmenttejään.

Perunadekstroosiväliaine on erittäin yksinkertainen ja helppo valmistaa väliaine laboratoriossa. Se sisältää nimensä perusteella infuusion perunaa, dekstroosia ja agar-agaria. Lisäksi estäviä aineita voidaan lisätä estämään bakteerien kasvu ja lisäämään selektiivisyyttä sienilajien suhteen.

Perusta

Perunadekstroosiagar on viljelyelatusaine, joka tarjoaa rihmasienien ja hiivien kehitykseen tarvittavat ravintoelementit.

Perunainfuusion ja glukoosin yhdistelmä tarjoaa täydellisen energialähteen sienten tyydyttävään kasvuun. Vaikka agar on se, joka tarjoaa sakeuden väliaineelle.

Pelkkä elatusaine ei estä bakteerien kasvua, joten se on ei-selektiivinen elatusaine. Jotta se olisi selektiivinen, se tarvitsee lisätä estäviä aineita, kuten viinihappoa tai antibiootteja.

Valmistautuminen

-Oma kotitekoinen (ei-kaupallinen) perunadekstroosi-agar-valmiste

Petri-ruokia

Se on valmistettu seuraavasti:

Ensinnäkin perunat pestään erittäin hyvin poistamalla niiltä hallussaan oleva maaperä. Ne leikataan ohuiksi viipaleiksi kaikella ja kuorella. Punnitaan 200 grammaa perunaa ja keitetään litrassa tislattua vettä puolen tunnin ajan.

Ajan lopussa suodata tai suodata kaikki valmisteet juustoliinan läpi.

Saatu neste täytetään tislatulla vedellä, joka on enintään litra. 20 g agar-agaria ja 20 g dekstroosia lisätään infuusioon, sekoitetaan hyvin ja autoklavoidaan 121 ° C: ssa, 15 naulan paineessa 15 minuutin ajan.

Annetaan jäähtyä 50 ° C: seen ja tarjoillaan steriileissä Petri-maljoissa. Valmistettuja levyjä säilytetään jääkaapissa.

kiilat

Perunadekstroosiagar-kiilat voidaan myös valmistaa.

Tässä tapauksessa ennen sterilointia autoklaavissa 12-15 ml väliainetta asetetaan putkiin, myöhemmin ne autoklavoidaan ja jätettäessä ne sijaitsevat erityisillä tukialustoilla, kunnes se jähmettyy. Säilytä jääkaapissa.

Elatusaineen pH on 5,6 ± 0,2, mutta jotkut laboratoriot lisäävät 10-prosenttista viinihappoa pH: n alentamiseksi arvoon 3,1 ± 0,1 bakteerien kasvun estämiseksi.

Samassa mielessä muut laboratoriot lisäävät mieluummin antibiootteja, jotta se olisi selektiivinen sienten viljelyyn ja estäisi bakteerien kasvua.

- Perunadekstroosiagarin kaupallinen valmistus

Punnitaan 39 g kaupallisesti saatua dehydratoitua väliainetta ja liuotetaan yhteen litraan tislattua vettä. Anna sen levätä 5 minuuttia.

Seosta kuumennetaan usein sekoittaen, kunnes se on täysin liuennut. Seuraavaksi se steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Levyt tai kiilat voidaan valmistaa. Suorita yllä kuvatulla tavalla.

PH pysyy arvossa 5,6 ± 0,2. Jos halutaan pH 3,1, tulisi lisätä 14 ml steriiliä 20-prosenttista viinihappoa ennen tarjoilua levyille.

Raaka väliaine on beige ja valmistettu väliaine on vaaleankeltaista, lievästi samea tai opalisoiva.

Sovellukset

Menetelmä kasvinäytteiden kylvöksi perunadekstroosiagarille

- Tahrattuihin lehtiin

Lehdet leikataan paloiksi.

Aseta lehtipalat (värjätyt ja terveet palat) 50 cm3: n lasiin, jossa on 50% alkoholia, pinnan desinfioimiseksi 20 - 30 sekunniksi. Heitä alkoholi pois ja lisää 20% natriumhypokloriittia 40-50 sekunniksi, jos ne ovat ohuita lehtiä, ja lisää aika 80 sekuntiin, jos se on kuorta ja tukkeja.

Poista natriumhypokloriitti ja ota desinfioidut kappaleet steriileillä pihdillä ja aseta ne väliaineen pintaan (enintään 10 kappaletta). Aseta päivämäärä ja inkuboi lämpötilassa 20-30 ° C.

-Hedelmille ja mukuloille

Jos hedelmät ovat lihaisia, avaa hedelmät, joihin sieni vaikuttaa, ja ota palat steriilillä skalpellilla sekä sairaista että terveistä osista ja aseta ne agarin pinnalle.

Jos hedelmä on sitrushedelmää, kuten sitruuna tai appelsiini, se on avattava ja sen siemenet kylvettävä.

Kun hedelmien pintaan vaikuttaa ja itiöitä havaitaan, ihanteellinen on käyttää ritilämenetelmää lautasella; Tämä koostuu itiöiden koskettamisesta steriloidulla ja jäähdytetyllä ”L” -muotoisella lastalla ja sitten siksak-siementen tekeminen 2-3 kertaa agarille.

- jyville

Ne desinfioidaan lehteissä kuvatulla tavalla ja asetetaan myöhemmin agarille.

-Oksille ja varrelle

Kuori raaputetaan irti, ja myöhemmät palat terveestä ja sairaasta osasta otetaan ja kylvetään suoraan agarille.

Siementettyjä levyjä inkuboidaan aerobisesti 20 - 30 ° C: ssa 72 tunnin ajan.

Iho-, hius- tai kynsinäytteiden kylvömenetelmä perunadekstroosi-agar-agarille

Näytteenotto tulisi suorittaa käyttämällä nro 11-skalpelliterää joko leikattujen hiusten, iho-asteikkojen tai kynsien leikkaamiseksi dermatofyyttejä. Ennen näytteen ottamista alue desinfioidaan 70-prosenttisella alkoholilla.

-Nahanäyte

Hilseilevissä leesioissa vaurion reuna tulisi raapia, koska sieni löytyy todennäköisemmin sieltä.

Eksudatiivisissa leesioissa näyte otetaan kuivalla tai märällä tamponilla. Kylvä heti perunadekstroosi-agar- tai Sabouraud-agarille. Vältä kuljetusvälineitä.

Toinen näytteenottomenetelmä on Mariatin ja Adan Camposin maton neliötekniikka. Tässä tapauksessa vaurioitunut alue hierotaan viisi kertaa steriilillä villapalalla myöhempää viljelyä varten.

Näyte voidaan laittaa suoraan elatusaineeseen.

-Hiusnäyte

Taudista riippuen sairastunut osa voidaan katkaista tai juurtua. Aseta näyte viljelyalustaan.

- Kynsinäyte

Tietty osa vahingoittuneesta kynnestä voidaan raapia tai leikata. Se riippuu vamman tyypistä.

Leikkaa näyte 1 mm: n paloiksi ennen kylvää, jotta sienen kosketus todennäköisyys kasvatusliuokseen kasvaa.

Tunnistamismenettely

Levyllä saadut pesäkkeet eristetään putkissa, jotka sisältävät perunadekstroosiagaria pesäkkeiden makroskooppisen tutkimuksen suorittamiseksi (ulkonäkö, väri, konsistenssi, kehitysaste).

Mikroskooppinen tutkimus (rakenteiden ja niiden muodostumien tarkkailu) voidaan suorittaa mikroviljelmillä tai suoralla havainnoinnilla mikroskoopin alla objektin ja objektin välillä.

Pesäkkeiden lukumäärä

Tätä väliainetta voidaan käyttää myös määrittämään kasvi-, ruoka-, kosmeettisissa tai lääkenäytteissä olevat sieni- ja hiivakuormat. Tätä tarkoitusta varten käytetään perunadekstroosiagaria, jota on täydennetty antibiooteilla, kuten: (kloramfenikoli, klooritetrasykliini tai molemmat).

Kaada 1 ml näytettä - mieluummin laimennettuna - steriiliin ja tyhjään Petri-maljaan, sulaa sitten perunadekstroosiagar-tyyny ja anna jäähtyä 45 ° C: seen. Kaada Petri-maljalle ja pyöritä kunnes se on homogenoitunut. Anna sen levätä, kunnes se kiinteytyy.

Inkuboidaan aerobisesti lämpötilassa 20-25 ° C (muotit) tai 30-32 ° C (hiivat) vähintään 5 - 7 vuorokautta halutun sienetyypin ja näytteen tyypin mukaan. Kahta levyä voidaan käyttää inkuboimaan molemmissa lämpötila-alueissa.

Sienipesäkkeiden laskeminen ruoanäytteestä. Perunadekstroosi-agar täydennettynä antibiooteilla. Lähde: Pxhere.com kuva / 777267

Sienikantojen ylläpito

Perunadekstroosiagaria voidaan käyttää elinkelpoisten sienikantojen ylläpitämiseen useita vuosia.

Tätä varten sieniä kasvatetaan perunadekstroosi-agar-kiilakiiloissa ja kun sieni on kasvanut, se peitetään mineraaliöljyllä. Öljy tulisi steriloida autoklaavissa 45 minuutin ajan, ja sen viskositeetti on noin 300-330 Saybolt. Öljyn tulee olla 1 - 2 cm viistepään yläpuolella.

QA

Kustakin valmistetusta erästä otetaan 1 tai 2 levyä ja inkuboidaan niitä 25 ° C: ssa 48 tuntia tai 20 ° C: ssa 96 tuntia. Hyvä steriiliyskontrolli on sellainen, jossa pesäkekehitystä ei havaita.

Tunnettuja tai sertifioituja ohjauskantoja voidaan myös käyttää, kuten:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Hyvää kasvua odotetaan kaikissa tapauksissa.

Viitteet

1. Britannia Laboratories. Glukoosi-agarperuna. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
2. Neogen Laboratories. Perunadekstroosi-agar. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab-laboratorio. Perunadekstroosiagar. Saatavana osoitteessa insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Yleinen mykologia. 1994. Venezuelan keskusyliopiston toinen painos, Library Editions. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Mikrobiologisen laadun arviointi kansallisen tuotantolaboratorion luomivärilampussa, kompakti jauhetyypissä, vertailumenetelmän Pharmacopea Usp 2005. mukaan. Guatemalan San Carlosin yliopisto.
7. Cuétara M. Pintanäytteiden käsittely. Iberoamerican Journal of Mycology. 2007; ss. 1-12