SABOURAUD-AGAR: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

Sabouraud, joka tunnetaan myös nimellä Sabouraud dekstroosiagar, on kiinteä alusta, erityisesti rikastettu eristämistä ja kehittämiseen sienten, kuten hiivat, homeet ja dermatofyytit.

Tämän vuoksi tästä väliaineesta ei voida puuttua mikrobiologisessa laboratoriossa patogeenisten tai opportunististen sienten esiintymisen tutkimiseksi joko kliinisistä tai ei-kliinisistä näytteistä. Samoin se on ihanteellinen myös rihmasbakteerien, kuten Streptomyces ja Nocardias, kasvuun. Sen käyttö on erittäin laajaa, koska sitä voidaan käyttää ihmisten, eläinten, kasvien ja teollisuuden mykologiassa.

A. Tarpeeton Sabouraud-agar. B. Sabouraud-agar, hiottu kylvö. Lähde: Kuvat kirjoittanut kirjailija MSc. Marielsa gil

Tämän väliaineen loi vuonna 1896 merkittävä ihotautilääkäri Raimond Sabouraud, josta tuli maailmankuulu erikoislääkäri pääasiassa dermatofyyttien aiheuttamien päänahan häiriöiden suhteen.

Sen luominen oli niin tärkeä, että sitä on käytetty siitä lähtien ja se pysyy nykyäänkin, vaikkakin joillakin muutoksilla.

Vaikka bakteerit ovat erityisiä sienille, bakteerit voivat kasvaa tässä väliaineessa, siksi näytteissä, joissa on sekoitettuja kasvistoja, antibioottien sisällyttäminen niiden valmistukseen vaaditaan mahdollisen bakteerifloora kasvun estämiseksi.

Antibiootti on valittava huolellisesti ja ottaen huomioon parannettavan sienen tyyppi, koska jotkut ovat estettyjen tiettyjen aineiden läsnäollessa.

Perusta

Sabouraud-dekstroosiagar on väliaine, joka alkuperäisessä formulaatiossaan on heikosti selektiivistä, johtuen sen happamasta pH: sta 5,6 ± 0,2, mutta bakteereja voi silti kehittyä, lähinnä pitkittyneissä inkubaatioissa.

Elatusaine sisältää kaseiinipeptonia ja haiman sulatettua eläinkudosta, jotka tarjoavat hiilen ja typen lähteen mikro-organismien kasvua varten.

Se sisältää myös korkean konsentraation glukoosia, joka toimii energialähteenä edistäen sienten kasvua bakteerien yli. Kaikki tämä sekoitetaan agar-agariin, komponenttiin, joka antaa sille oikean konsistenssin.

Toisaalta Sabouraud-dekstroosi-agar voi olla selektiivinen, jos siihen lisätään antibiootteja.

Antibioottien kanssa se on erityisen hyödyllinen näytteissä haavoista, avoimista haavoista tai muissa näytteissä, joissa epäillään suurta bakteerikontaminaatiota.

Yleisimmin käytetyt Sabouraud-dekstroosi-agarin ja antibioottien yhdistelmät

-Saburaud-agar kloramfenikolilla: ihanteellinen hiivien ja rihmasienten palauttamiseen.

- Sabouraud-agar gentamysiinin ja kloramfenikolin kanssa: Lähes kaikki rihmasienet ja hiivat kasvavat tässä väliaineessa, ja se estää suurta määrää bakteereja, mukaan lukien Enterobacteriaceae, Pseudomonas ja Staphylococcus.

- Sabouraud-agar sykloheksimidillä: se on erityisen hyödyllinen näytteistä iholta tai hengitysteistä, kunhan epäily on dimorfisia sieniä.

Sykloheksimidiä tulisi käyttää varoen; Vaikka sitä käytetään estämään ei-patogeenisten tai ympäristössä olevien sienien ja hiivojen kasvua, joita voi olla läsnä näytteessä epäpuhtauksina, se myös estää joidenkin sienten, kuten Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp ja muiden opportunististen sienien kasvua.

- Sabouraud-agar kloramfenikolin ja sykloheksimidin kanssa: sitä käytetään pääasiassa dermatofyyttien ja dimorfisten sienten eristämiseen. Sillä on haittana, että se estää joitain opportunististen sienien lajeja, kuten Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes tai C. neoformans.

- Sabouraud-agar kloramfenikolilla, streptomysiinillä, penisilliini G: llä ja sykloheksimidillä: se on ihanteellinen näytteille, jotka ovat erittäin bakteerien ja saprofyyttisten sienten saastuttamia, mutta sen haittana on, että se estää aktinomycesien ja noocardioiden kasvua edellä mainittujen opportunististen sienten lisäksi.

Valmistautuminen

Jos sinulla on ainesosia erikseen, se voidaan valmistaa seuraavasti:

Sabouraud-dekstroosi-agar

Punnita:

- 40 g dekstroosia

- 10 g peptonia

- 15 g agar-agaria

- Mittaa 1000 ml tislattua vettä

Kaikki aineosat sekoitetaan, pH säädetään arvoon 5,6. Liuotetut aineet liuotetaan keittämällä, 20 ml väliainetta jaetaan putkiin, joiden koko on 25 x 150 mm, ilman reunaa ja mieluiten puuvillakorkilla.

Putket puuvillakorkilla. Lähde: Kuva kirjoittanut MSc. Marielsa gil

Muita putkikokoja voidaan myös käyttää saatavuudesta riippuen.

Ne autoklavoidaan 10 minuutin ajan paineilmakehässä (121 ° C). Autoklaavointiaikaa ei tulisi ylittää. Autoklaavista poistuessaan putkia kallistetaan tuen avulla, kunnes ne jähmettyvät huilun nokkaan.

Toinen tapa on liuottaa aineosat kuumentamalla, kunnes se kiehuu. Autoklaavi 10 minuutin ajan samassa pullossa ja levitä sitten 20 ml Petri-maljoihin.

Jos sinulla on Sabouraud-dekstroosi-agar-väliainetta, joka sisältää jo kaikki aineosat, punnitse kauppayhtiön määrittelemä määrä litralle vettä. Muut vaiheet ovat samat kuin yllä kuvatut.

Sabouraud dekstroosi-agar (Emmonien muunnos)

Punnita:

- 20 g dekstroosia

- 10 g peptonia

- 17 g agar-agaria

- Mittaa 1000 ml tislattua vettä

Kaikki aineosat sekoitetaan, pH säädetään arvoon 6,9. Jatka samalla tavalla kuin edellinen tapaus.

On kaupallisia taloja, jotka tarjoavat väliaineen kaikilla ainesosilla. Punnitse ja valmista tällöin lisäyksessä kuvatulla tavalla.

Sabouraud-dekstroosiagar (Emmons-muunnos) kloramfenikolilla

Kloramfenikolin kantoliuos

- Punnitaan 500 mg kloramfenikoliemästä

- Mittaa 100 ml 95-prosenttista etanolia

- Sekoita

Sabouraud dekstroosi-agar-väliaine (Emmons) valmistetaan kuten aiemmin on kuvattu ja lisää jokaiselle väliaineen litralle 10 ml kloramfenikolin kantaliuosta ennen autoklavointia.

Sabouraud Emmons dekstroosi-agari sykloheksimidin kanssa

Sykloheksimidi-varastoliuos

- Punnitaan 5 g sykloheksimidiä

- Mittaa 100 ml asetonia

- Sekoita

Sabouraud-dekstroosiagariaine (Emmons) valmistetaan kuten on jo kuvattu ja lisää jokaiselle väliaineen litralle 10 ml sykloheksimidi-kantaliuosta ennen autoklavointia.

Sabouraud-dekstroosiagar (Emmonit) kloramfenikolin ja sykloheksimidin kanssa

Sabouraud-dekstroosiagariaine (Emmons) valmistetaan kuten on jo kuvattu ja lisää jokaiselle väliaineen litralle 10 ml kloramfenikolin kantaliuosta ja 10 ml sykloheksimidi-kantaliuosta ennen autoklavointia.

Muut antibiootit, joita voidaan lisätä

20 000 - 60 000 yksikköä penisilliiniä litraa kohti väliainetta.

30 mg streptomysiiniä litraa kohti väliainetta.

Molemmat on sisällytettävä, kun väliaine on autoklavoitu, jäähdytetty hieman (50 - 55 ° C).

0,04 g neomysiiniä litraa kohti väliainetta.

0,04 g gentamysiiniä litraa kohti väliainetta.

Erityiset näkökohdat

Turvallisuuden vuoksi on edullista kylvää Sabouraud-dekstroosi-agaria kiilamaisiin putkiin (kalteva huilun nokkaan) kuin Petri-maljoihin, itiöiden leviämisen ja hengittämisen välttämiseksi.

On tärkeää, että Sabouraud-agar-putket peitetään puuvillalla eikä kierrekorkilla, koska puoliaerobisten olosuhteiden on osoitettu estävän itiöiden muodostumista joissakin kannoissa, esimerkiksi Coccidioides immitis. Useimmat sienet ovat myös aerobisia.

Älä sulje ilmatiiviisti, jos käytät kierrekorkkia.

QA

Valmistetulle medialle on tehtävä laadunvalvonta sen asianmukaisen toiminnan varmistamiseksi. Tätä varten tietyt kontrollikannot kylvetään.

Sabouraud-dekstroosi-agarille kloramfenikolin kanssa voidaan käyttää Candida albicansin ATCC-kantoja, joilla on oltava erinomainen kasvu. Toinen levy inokuloidaan Escherichia coli -kannoilla, jotka on estettävä kokonaan.

Inokuloimatonta levyä myös inkuboidaan, jossa mikään mikro-organismi ei saisi kasvaa.

Trichophyton mentagrophyyt -kantoja voidaan käyttää Sabouraud-dekstroosi-agarille kloramfenikolin ja sykloheksimidin kanssa, ja niiden tulisi kehittyä hyvin. Toinen levy inokuloidaan Aspergillus flavus -kannalla, jossa kasvun on oltava vähän tai ei ollenkaan. Lisäksi inokuloimatonta levyä inkuboidaan steriiliyden osoittamiseksi.

Sabouraud-dekstroosiagarille sykloheksimidin kanssa käytetään Candida albicans-, Trichophyton rubrum- tai Microsporum canis -kantoja, joiden on osoitettava hyvää kasvua.

Samoin mukaan sisältyy Aspergillus flavus -kanta, jolla on vain vähän kasvua tai ei ollenkaan. Lopuksi inkuboi rokottamatonta levyä steriiliyden kontrolloimiseksi.

Sovellukset

Ensisijainen kulttuuri

Klassinen Sabouraud-dekstroosiagar sisältää 4 grammaa dekstroosia, ja se on erinomainen primaarinen eristysväliaine, koska se osoittaa kunkin sienen ominaisen morfologian.

Se on myös erinomainen osoittamaan pigmentin tuotantoa. Se ei kuitenkaan ole paras tapa itiön havaitsemiseen.

Sitä ei myöskään suositella Blastomyces dermatitidis -lajin viljelyyn, jota estää läsnä oleva korkea glukoosipitoisuus.

Toisaalta viljelyssä on otettava huomioon tietyt näkökohdat.

Jotkut sienet kasvavat parhaiten huoneenlämmössä, kuten muotit, toiset kasvavat menestyksekkäästi lämpötilassa 37 ° C, kuten jotkut hiivat, ja toiset voivat kasvaa molemmissa lämpötiloissa (dimorfiset sienet).

Tästä syystä on joskus tarpeen käyttää useita Sabouraud-agarmaljoja samalle näytteelle, koska useaan kertaan siemennetään yhden levyn inkuboimiseksi huoneenlämpötilassa ja toisen 37 ° C: ssa.

Esimerkiksi Sporothrix schenckii kylvään kahdelle levylle; yhtä inkuboidaan huoneenlämpötilassa muottifaasin saamiseksi ja toista inkuboidaan 37 ° C: ssa hiivafaasin saamiseksi, mutta jälkimmäisessä on välttämätöntä lisätä 5% verta veteen väliaineeseen.

Muissa tapauksissa, kuten mysetoomanäytteissä, kaksi Sabouraud-agarlevyä ympätään, toisessa kloramfenikolilla ja toisella sykloheksimidillä. Ensimmäinen sallii sienistä peräisin olevien mykooman aiheuttavien aineiden (Eumycetoma) kasvun ja toiset bakteereista peräisin olevan mysetooman aiheuttavat aineet, kuten aktinomyketoomat.

itiöinnin

Emmons Modified Sabouraud Dextroosi-agar sisältää 2 grammaa dekstroosia, ja sitä käytetään paitsi eristämiseen, myös sienten itiöimiseen ja säilyttämiseen.

Tässä väliaineessa voidaan ottaa talteen Blastomyces dermatitidis -kannat.

säilyttäminen

Sieniviljelmien säilyttämiseksi niitä voidaan säilyttää jääkaapissa (2–8 ° C). Säilytysaika voi vaihdella 2 - 8 viikkoa. Tämän ajan jälkeen heidät on subkulttuuroitava prosessin toistamiseksi.

Jotkut sienet säilyvät parhaiten huoneenlämmössä, kuten Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum ja Microsporum audounii.

Kannan ylläpitämistä voidaan pidentää pleomorfismin välttämiseksi, jos dekstroosi poistetaan kokonaan agarista ja jos agarin määrää väliaineessa vähennetään kuivuuden välttämiseksi.

mikroviljelmiä

Joidenkin rihmasienten tunnistamiseksi on välttämätöntä suorittaa mikroviljelmiä Sabouraud-agarilla tai muilla erityisillä keinoilla seksuaalisen ja epäseksuaalisen lisääntymisen rakenteiden tarkkailemiseksi.

Ihmisen mykologiassa

Sitä käytetään pääasiassa sieni-sairauksien, erityisesti ihon ja sen kiinnitysten (hiusten ja kynsien), diagnosointiin.

Näytteet voivat olla eritteitä, eritteitä, iho, hiukset, kynnet, yskö, CSF tai virtsa. Yleisesti eristetyt patogeenit ovat dermatofyytit, sienet, jotka aiheuttavat ihonalaisia ​​ja systeemisiä mykoosia.

Eläinten mykologia

Sieni-infektiot vaikuttavat usein eläimiin, siksi Sabouraud-agar on yhtä hyödyllinen eläinten mykologiassa kuin se on ihmisillä.

Esimerkiksi dermatofyytit voivat usein vaikuttaa eläimiin. Näin on tilanteessa Microsporum canis var moonum, joka tarttuu usein koiriin, kissoihin, hevosiin, sioihin ja apinoihin. Samoin Microsporum gypseum tartuttaa koiria, kissoja ja karjaa.

Microsporum gallinae vaikuttaa lintuihin, kuten kanoihin, kukkoihin ja kanoihin.

Muut sienet, kuten Zymonema farciminosum, ovat myös sairauksien syy eläimissä, pääasiassa hevosissa, muulissa ja aaseissa, aiheuttaen merkittävää tulehduksia imusuonissa.

Sporothrix schenkii ja Histoplasma capsulatum vaikuttavat kotieläimiin ja ihmisiin.

Ympäristömikologia

Monet patogeeniset tai opportunistiset sienet voivat keskittyä milloin tahansa tiettyyn ympäristöön, etenkin klinikoiden ja sairaaloiden leikkaussaliin ja tehohoidon yksiköihin. Siksi on välttämätöntä valvoa niitä.

Muita herkkiä tiloja ovat kirjastot ja vanhat rakennukset, joihin ympäristö sienien keskittyminen voi vaikuttaa.

Ympäristötutkimuksissa Sabouraud-dekstroosiagaria käytetään sienten eristämiseen.

Teollinen mykologia

Sabouraud-dekstroosiagaria ei voi puuttua muun muassa kosmetiikan, ruuan, juomien, nahan, tekstiilien tuotannossa esiintyvien saastuneiden sienien tutkimiseen.

Kasvien mykologia

Kasvit kärsivät myös sienten aiheuttamista taudeista, jotka vaikuttavat kasvin eri osiin ja jotka voivat jopa lopettaa sadonkorjuun aiheuttaen suuria tappioita maataloudelle.

Viitteet

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikoosien mikrobiologinen diagnoosi ja antifungaaliset herkkyystutkimukset. Espanjan tartuntatautien ja kliinisen mikrobiologian seuran suositukset. Saatavana osoitteessa coesant-seimc.org
2. ValteK-laboratorio. (2009). Sabouraud-dekstroosi-agar sykloheksimidillä. Saatavana osoitteessa andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Eläinlääketieteellinen mykologia. Kansallinen maatalouden yliopisto. Nicaraguassa.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Yleinen mykologia. 1994. Venezuelan keskusyliopiston toinen painos, Library Editions. Venezuela Caracas.