Mannitoli suola agar tai mannitolia suola on kiinteässä elatusaineessa, selektiivinen ja ero kulttuuriin. Chapman on sen luonut patogeenisten grampositiivisten kokkien, erityisesti Staphylococcus aureuksen, eristämiseksi.
Kuitenkin on myös hyödyllistä eristää muiden lajien joukosta Staphylococus epidermidis, joka voi joskus esiintyä opportunistisena patogeenina, ja Staphylococcus saprophyticus, tunnustettu virtsapatogeeni.
A. Fiola valmistetulla suolaisella mannitoliagar-elatusaineella. B. Suolatut mannitoli-agarmaljat, jotka on kylvetty fermentoivilla ja ei-fermentoivilla mannitolibakteerikannoilla. Lähde: A ja B: Kuvat kirjoittanut tekijä MSc. Marielsa Gil.
Jotkut enterokokit pystyvät kasvamaan tällä väliaineella, samoin kuin tietyt gram-positiiviset itiöt muodostavat sauvat.
Tämä väliaine on erittäin hyödyllinen kliinisten näytteiden analysoinnissa, mutta sitä käytetään myös elintarvikkeiden mikrobiologisissa tutkimuksissa ja muun muassa teollisuustuotteiden, kuten kosmetiikan, lääkkeiden, laadunvalvonnassa.
Suolainen mannitoliagar koostuu uutteista ja peptoneista naudanlihasta, tripteinistä, mannitolista, natriumkloridista, fenolipunaisesta ja agarista.
Perusta
Mannitoliagar on selektiivinen korkean suolapitoisuuden ansiosta. Suolaisuus toimii estävänä aineena ja estää gram-negatiivisten bakteerien kasvua.
Se on myös ero johtuen hiilihydraatti mannitolin ja fenolipunaisen pH-indikaattorin läsnäolosta. Tästä bakteerit, jotka kykenevät fermentoimaan mannitolia, tuottavat hapot, happamoittaen väliaineen, muuttamalla pesäkkeet ja väliaineen keltaiseksi.
Toisaalta pesäkkeet, jotka eivät fermentoi mannitolia, kasvavat elatusaineessa ottaen ravintoaineet, joita liha- ja tripteiniuutteet ja peptonit tarjoavat. Sieltä bakteerit uuttavat hiiltä, typpeä, vitamiineja ja mineraaleja, jotka ovat tarpeen niiden kasvuun.
Pesäkkeet voivat tässä tapauksessa olla heikkoja tai voimakkaasti vaaleanpunaisia, ja väliaine pysyy samana värinä tai muuttuu fuksiaksi.
Agar on aine, joka tarjoaa johdonmukaisuuden väliaineelle.
Valmistautuminen
Litran suolaisen mannitoliagarin valmistamiseksi punnitaan 111 g edullisen kaupallisen yrityksen dehydratoitua väliainetta ja liuotetaan 1000 ml: aan tislattua vettä pullon avulla.
Lämpöä lisätään väliainetta sekoittamalla usein liukenemisprosessin parantamiseksi. Keitä minuutin ajan.
Kolvi asetetaan autoklaaviin 121 ° C: seen 15 minuutiksi.
Ajan kuluttua poista injektiopullo autoklaavista, anna sen levätä ja tarjoile 15 - 20 ml steriileissä Petri-maljoissa, kun lämpötila on noin 50 - 55 ° C.
Sen annetaan jähmettyä, tilaamalla käänteisesti plakeroiksi ja pitämällä jääkaapissa käyttöönottoon asti. Ennen näytteen siementtämistä odota, että levy saavuttaa huoneenlämpötilan.
Levyt ympätään juoksuttamalla tai kylvöimalla drigalski-lastalla. Valmistetun väliaineen lopullisen pH: n on oltava 7,4 ± 0,2
Kuivatun väliaineen väri on vaaleanbeige ja valmistetun väliaineen väri on oranssinpunainen.
Sovellukset
Korkean selektiivisyytensä vuoksi tämä väliaine on ihanteellinen kylvää näytteitä sekoitetussa kasvistoissa, joissa haluat etsiä Staphylococus aureus -bakteerin esiintymistä tämän suvun pääpatogeeninä.
Tässä mielessä yksi sen yleisimmistä käyttötavoista on nielun eritteiden ja nenän erittyvien näytteiden mikrobiologisessa analyysissä, erityisesti oireettomien S. aureus -kantajien havaitsemiseksi.
Jotkut maat ovat ottaneet tämän analyysin käyttöön pakollisena vaatimuksena ihmisille, jotka haluavat työskennellä ruoan myyjinä.
Tämä valvonta estää S. aureuksen kantajia tarttumasta välttääkseen näin massiivisen ruokamyrkytyksen stafyokokkien aiheuttaman enterotoksiinin saastuttamien ruokien vuoksi.
Sitä voidaan myös sisällyttää muun muassa haavainfektioiden, veriviljelyjen, CSF: n, keuhkojen veren huuhtelun siemeniin.
Suolattu mannitoliagar on käyttökelpoinen pesäkkeiden eristämiseksi uudelleen virtsiviljelmistä CLED-agarista tai veriagarista, jonka gramma on paljastanut gram-positiivisia cockeja klustereissa.
Se pätee myös elintarvikkeiden, juomaveden, maaperän mikrobiologiseen analyysiin muun muassa sovelluksissa.
QA
Kun erä maljoja, joissa on suolaista mannitoli-agaria, on valmistettu, on suositeltavaa suorittaa laadunvalvonta. Kontrollikannat kylvetään osoittamaan, onko kasvua vai ei.
Tunnettuja Staphylococcus aureus -kantoja voidaan käyttää positiivisena kontrollina. Sen pitäisi kasvaa tyydyttävästi kehittyen keltaisia pesäkkeitä, ja väliaine muuttuu myös samanväriseksi.
Samoin on tarkoituksenmukaista sisällyttää tunnettu Staphylococcus epidermidis -kanta. Sen pitäisi kasvaa tyydyttävästi kehittyessä vaaleanpunaisia pesäkkeitä, ja väliaine pysyy samana värinä tai tummuu voimakkaammaksi vaaleanpunaiseksi.
Negatiivisena kontrollina käytetään kantoja, joiden ei pitäisi kasvaa tällä väliaineella. Esimerkiksi tunnettua Escherichia colin tai Klebsiella pneumoniae -kantaa voidaan kasvattaa. Odotettu tulos on täydellinen estäminen, toisin sanoen ei kasvua.
Lisäksi rokottamatonta levyä on inkuboitava. Siinä ei pitäisi olla kasvua tai värinmuutosta.
On tärkeää, että levyä ei käytetä, jos muun muassa on merkkejä pilaantumisesta, kuten kontaminaatio, kuivuminen, värimuutokset.
Lopulliset ajatukset
Kun käytetään suolaista mannitoli-agar-alustaa, on huomioitava joitain tärkeitä näkökohtia:
- Keltaisten pesäkkeiden kasvun saaminen ei tarkoita, että se olisi Staphylococcus aureus. On syytä muistaa, että jotkut Enterococcus-kannat voivat kasvaa tässä väliaineessa ja fermentoida mannitolia, samoin kuin tiettyjä itiöitä muodostavia grampositiivisia sauvoja.
Siksi on tärkeää suorittaa grammi pesäkkeelle ja testi katalaasille.
-Sitä vastoin on otettava huomioon, että muut Staphylococcus-lajit kuin aureus kykenevät myös fermentoimaan mannitolia. Siksi on tärkeää siirtää pesäke alaviljelyyn ravinneliemeksi sieltä otettavan ja koagulaasikokeen suorittamiseksi.
Ihmiselle kliinisesti merkittäviä stafülokokkilajeja, jotka fermentoivat mannitolia, ovat mm. S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum.
Toiset voivat antaa muuttuvan reaktion, ts. Joskus positiivisen ja joskus negatiivisen reaktion. Jotkut niistä ovat muun muassa S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius.
- Ei ole suositeltavaa ottaa pesäkkeitä suoraan mannitoliagarista koagulaasikokeen suorittamiseksi, koska väliaineen korkea suolakonsentraatio voi häiritä tulosta.
- Viimeisenä suositellaan inkuboimaan suolaisella mannitolilla kylvettyjä levyjä 48 tunnin ajan, koska jotkut S. aureus -kannat voivat hitaasti fermentoida mannitolia, vaikka tämä ei ole kovin yleistä.
Viitteet
- Britannia Laboratories. Suolainen mannitoliagar. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
- "Suolainen mannitoliagar". Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 31. lokakuuta 2018, kello 19:08 UTC. 17. tammikuuta 2019, 20:55, saatavana osoitteessa es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, Toimitus Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA
- BD Laboratories. BD-mannitolin suola-agar. 2013.Saatavilla osoitteessa: bd.com.