Agar Salmonella Shigella tunnetaan myös SS-agar on selektiivinen ja ero väliaineen kohtalaisen, erityisesti suunniteltu eristäminen enteropatogeenisen bakteerien Salmonella- ja Shigella, sekä ympäristön näytteet kuten kliiniset.
SS-agarilla on monimutkainen koostumus; Se koostuu lihauutteesta, peptonista, laktoosista, sappisuoloista, natriumsitraatista, natriumtiosulfaatista, ferrisitraatista, agarista, neutraalista punaisesta, kirkkaanvihreästä ja tislatusta vedestä. Suuren selektiivisyyden vuoksi voidaan kylvää näytteitä, joissa on runsaasti sekoitettuja kasvistoja.
SS-agar Salmonella sp. Lähde: Manurx27, Wikimedia Commonsista
Mikrobiologisissa laboratorioissa Salmonella-Shigella-elatusainetta käytetään laajalti Salmonellan ja Shigellan esiintymisen tutkimiseen ripulin ulosteenäytteissä, jätevesissä, juomavedessä ja ruoassa.
Joskus on tarpeen käyttää esirikastusliemi (laktoosiliemi) ja rikastusliemi (seleniitti kystiiniliemi) salmonellan kantojen talteenottamiseksi.
Nämä vaiheet vaaditaan, kun epäillään salmonellan olemassaoloa erittäin pieninä määrinä tai jos kantaa voidaan väärinkäyttää teollisuustuotannolle tyypillisillä prosesseilla, pääasiassa jalostetuilla elintarvikkeilla. On myös suositeltavaa rikastuttaa ulosteenäytteitä potilailta, joita on hoidettu antibiooteilla.
Seuraavaksi rikastettu lieme voidaan kylvää Salmonella-Shigella-agarille ja muille vastaaville väliaineille, kuten ksyloosi-agar, lysiinideoksikolaatti (XLD) ja enteerinen Hektoen-agar (HE).
Perusta
Jokaisella Salmonella-Shigella-elatusaineen komponentilla on erityinen tehtävä, ja seos kokonaisuutena antaa sille sille ominaiset ominaisuudet.
Ravitseva voima
Lihauute ja peptoni (hajotettu kaseiinilla ja eläinkudoksella) tarjoavat tarvittavat ravintoaineet (typen, hiilen ja vitamiinit) sellaisten mikro-organismien kehittämiseksi, jotka kykenevät sietämään muita komponentteja.
johdonmukaisuus
Agar-agar vastaa kiinteän konsistenssin aikaansaamisesta väliaineeseen.
Valikoiva
Tämä väliaine on erittäin selektiivinen, koska se sisältää sappisuoloja, natriumsitraattia ja kirkkaan vihreää. Siksi se estää kaikkien gram-positiivisten bakteerien ja useimpien gram-negatiivisten bakteerien, mukaan lukien jotkut kolibakteerit, kasvua.
Vaikka Salmonella-suvun bakteerit ja jotkut Shigella-kannat kannattavat näitä yhdisteitä.
Pääosin Salmonella-suvut ovat hyvin sappisuoloja kestäviä, niin paljon, että ne kykenevät elää joidenkin kantajapotilaiden sappirakossa, jotka levittävät bakteereja jatkuvasti ulosteeseensa.
Ero
Laktoosi on käymiskelpoinen hiilihydraatti, joka auttaa erottamaan laktoosia käyviä kantoja ei-käymisistä. Tämä ominaisuus käy ilmi pH-indikaattorin läsnäolosta, joka tässä väliaineessa on fenolipunaista.
Laktoosia fermentoivat kannat tuottavat punaisia pesäkkeitä, kun taas käymättömät kannat ovat värittömiä. Tämä ominaisuus on tärkeä, koska Salmonella ja Shigella eivät käy laktoosia.
Toisaalta tämä väliaine sisältää natriumtiosulfaattia sulfidilähteenä ja ferrisitraattia raudan lähteenä. Molemmat yhdisteet pystyvät erottelemaan bakteerit, jotka pystyvät tuottamaan rikkivetyä. Nämä reagoivat muodostaen näkyvän, liukenemattoman mustan rautasulfidisaostuman.
Tätä ominaisuutta esiintyy joissakin Salmonella-suvun kannoissa. Normaalisti niiden pesäkkeet ovat tasaisia värittömiä ja mustalla pisteellä keskellä. Loput salmonellojen eivät tuota H 2 S- ja kehittää värittöminä pesäkkeinä.
Toisaalta Shigella-suvun pesäkkeet ovat tasaisia värittömiä ilman tummenemista.
Valmistautuminen
Tämä väliaine on erittäin helppo valmistaa.
Punnitaan 63 g kuivattua kaupallista väliainetta ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Lämmitä liuos ja sekoita. Seos voi kiehua jopa minuutteja.
Tätä alustaa ei saa autoklaavoida. Liukenemisen jälkeen se tarjoillaan suoraan steriileille tai kaksoislevyille.
Jähmettyessään ne järjestetään käänteisesti verihiutaleille ja säilytetään jääkaapissa (2–8 ° C) käyttöönottoon saakka.
Valmistusvaiheen väliaineen tulisi pysyä pH: ssa 7,2 ± 0,2 ja väriltään oranssinpunaisella.
On tärkeää antaa levyjen lämmetä ennen näytteiden siementtämistä. Alkuperäinen näyte voidaan kylvää suoraan, purkamalla materiaalia osaan agaria ja raivaamalla sitten sieltä.
Jos käytät rikastettuja liemeitä, siirrä osa seleniittiliemestä ja kylvää drigalski-lastalla.
Inkuboi 37 ° C: ssa 24 tuntia aerobioosissa.
Pidä mielessä, että punnittavien grammien lukumäärä ja väliaineen lopullinen pH voivat vaihdella kauppakeskuksesta toiseen. Keskimmäinen pohja tuo aina merkinnät sen valmisteluun.
Käyttää
Sitä käytetään usein ulosteviljelmäanalyysissä sekä jätevesien, juomaveden ja elintarvikkeiden näytteiden mikrobiologisissa tutkimuksissa.
Usein valmistetaan kaksinkertaiset levyt, toiselle puolelle pannaan Salmonella-Shigella-agar ja toiselle XLD-agar.
rajoitukset
-Jotkut Shigella-kannat eivät kasva tässä väliaineessa. Siksi tämän suvun ensisijaista eristämistä ei suositella.
- Mikään läpinäkyvä pesäke, jossa on musta keskusta, ei osoita Salmonellaa; Biokemialliset testit on suoritettava oikean identifioinnin tekemiseksi, koska joidenkin Proteus-kantojen pesäkkeet eivät ole erotettavissa Salmonellan bakteereista.
- Kuivatun väliaineen on pidettävä huolta altistumisesta ympäristölle, koska se on erittäin hygroskooppinen. Siksi sitä on pidettävä kuivassa ja hyvin suljetussa ympäristössä. Auki hyvin lyhyitä aikoja.
- Aina väliaineessa olevat sappisuolat voivat saostua, muodostaen agarin sisällä maton tapaisen kuvan, mutta tämä ei vaikuta tuloksiin.
-Jotkut Shigella-kannat voivat hitaasti käydä laktoosia.
QA
Elatusaineen oikean toiminnan testaamiseksi on suositeltavaa istuttaa tunnetut tai varmennetut vertailukannat ja tarkkailla, täyttääkö kasvu odotettuja ominaisuuksia.
Tätä varten voidaan käyttää E. colin, Enterobacter sp: n, Klebsiella pneumoniaen, Shigella flexnerin, Salmonella typhimuriumin tai Enterococcus faecalis -kantoja.
Odotetut tulokset ovat:
Enterobakterit ja Klebsiella ------ suuret pesäkkeet ja punaiset tai vaaleanpunaiset mukoidit.
Shigella flexneri ---------- läpinäkyvät tai värittömät tasaiset pesäkkeet.
Salmonella typhimurium ------ värittömät pesäkkeet, joissa on mustia keskuksia.
Enterococcus faecalis -------- täydellinen esto.
Viitteet
- Difco Francisco Soria Melguizo -laboratoriot. Salmonella-Shigella-agar. 2009.Saatavilla osoitteessa: f-soria.es
- BD-laboratorio. BD Salmonella-Shigella agar. 2013.Saatavilla osoitteessa: bd.com
- Britannia Laboratories. Salmonella-Shigella agar. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
- Valtek-diagnostiikka. Salmonella-Shigella-agar (SS-agar), 2010. Saatavana osoitteessa andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.