TRYPTASEIINI-SOIJA-AGAR: PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2025

-Soija-agaria tryptonia tai tryptikaasisoija-agar on kiinteän elatusaineen, ja ravitsemukselliset epäselektiivisen. Sitä nimitetään kirjaimilla TSA sen lyhenteellä englanniksi Trypticase Soy Agar. Se koostuu tripteinistä, soijapeptonista, natriumkloridista ja agar-agarista.

Korkean ravintovoimansa vuoksi se on ihanteellinen kohtalaisen vaativien ja ei-vaativien mikro-organismien viljelyyn. Elatusainetta, jossa ei ole lisälisäaineita, ei suositella primaariviljelmille, mutta se on erittäin hyödyllinen puhdasten kantojen aliviljelylle ja pitämiseksi niiden elinkelpoisina muun muassa.

Trypticasein soija-agar-kiilat putkissa, joissa on bakeliittikorkit. Lähde: Valokuva on kirjoittanut kirjoittanut MSc. Marielsa Gil.

Tämä agar toimii myös pohjana rikastettujen väliaineiden, kuten veriagar, valmistukselle, etenkin kun sitä vaaditaan tarkkailemaan hemolyysikuvioita ja kiinnittämään optokiini- ja bacitrasiinitaksonit, joita tarvitaan Streptococcus pneumoniae- ja Streptococcus pyogenes-diagnoosissa.

Toisaalta, kun se yhdistetään antibioottien kanssa, on hyödyllistä eristää kliinisesti tärkeät fakultatiiviset ja tiukat anaerobiset mikro-organismit näytteistä, joissa on sekoitettu kasvisto.

Lopuksi, tryptasetiini-soija-agarin koostumus ja sen suorituskyky täyttävät eri farmakopeoiden (Euroopan, Japanin ja Pohjois-Amerikan) asettamat vaatimukset.

Perusta

Bakteerien asianmukaiseen kehitykseen tarvitaan energianlähteitä, kuten aminohappoja, vitamiineja, purisia ja pyrimidisiä emäksiä.

Tässä mielessä triptein ja soijapeptoni tarjoavat nämä ravintoaineet mikro-organismeille, mahdollistaen siten niiden täydellisen kehityksen. Miellyttäville bakteereille on kuitenkin välttämätöntä täydentää tätä agaria defibrinoidulla vedellä tai lämmitettyllä verellä sen rikastumisen lisäämiseksi.

Toisaalta, jos elatusaineeseen lisätään antibiootteja, siitä tulee selektiivistä elatusainetta. 0,6% hiivauutetta voidaan lisätä myös Listeria-suvun lajien eristämisen edistämiseksi, kun taas kystiini-telluriitti ja lampaan veri on ihanteellista Corynebacterium diphteriae -bakteerille.

Lopuksi natriumkloridi aikaansaa osmoottisen tasapainon väliaineelle ja agar tarjoaa kiinteän konsistenssin.

Valmistautuminen

Trypticasein-soijagarlevyt

Tryptaseiini-soija-agarin valmistamiseksi 40 g dehydratoitua kaupallista väliainetta pitäisi punnita digitaalisessa mittakaavassa. Se liuotetaan pullon tislattuun veteen litraan.

Seoksen annetaan levätä 5 minuutin ajan ja sitten se viedään lämmönlähteeseen väliaineen liukenemisen helpottamiseksi. Sitä tulisi sekoittaa usein ja keittää 1-2 minuutin ajan. Seuraavaksi väliaine steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Annetaan jäähtyä 50 ° C: seen ja levitetään steriileihin Petri-maljoihin. Annetaan jähmettyä, käännä, tilata plaqueros ja säilyttää jääkaapissa.

Elatusaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,3 ± 0,2.

On huomattava, että dehydratoidun kasvatusväliaineen väri on vaaleanbeige ja sitä tulisi säilyttää lämpötilassa 10 - 35 ° C kuivassa paikassa.

Valmistettu agar puolestaan ​​on väriltään vaalean keltaista. Valmistettuja levyjä tulee säilyttää jääkaapissa (2–8 ° C) käytöstä asti.

Levyjen on oltava huoneenlämpöisiä ennen käyttöä.

Trypticasein soija-agar-levyt täydennettynä veressä

Veri-agar valmistetaan lisäämällä 5-prosenttisesti defibrinoitua verta verrattuna tryptaseiini-soija-agarin jäähdyttämiseen 50 ° C: seen. Seos homogenisoidaan kiertämällä kevyesti liikkein.

Tarjoa steriileissä Petri-maljoissa. Keskimmäisen värin tulisi olla kirsikanpunainen.

Trypticasein soija-agar-levyt täydennettynä lämmitettyä verta

TSA-pohjaisen veriagarin valmistamiseksi jatka samalla tavalla kuin jo kuvatut menettelyt, mutta autoklaavista poistumisen jälkeen sen annetaan levätä, kunnes väliaineen lämpötila on noin 56-70 ° C. Siihen aikaan veri laitetaan ja sekoitetaan, kunnes väliaine muuttuu ruskeaksi.

Tarjoa steriileissä Petri-maljoissa. Väliaineen väri on suklaanruskea.

Trypticasein-soijagar-kiilat

Agarin valmistusmenetelmä on sama kuin maljoille kuvattu, sillä erolla, että väliaineen tarjoamisen sijaan Petri-maljoille, se jaetaan 10 - 12 ml: n putkiin Bakelite-kansiin ennen sterilointia.

Seuraavaksi putket autoklavoidaan 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Poistuessaan he kallistuvat tuen avulla ja annetaan jähmettyä.

Valmistetut kiilat kylvetään pinta-alan mukaan ja ne pitävät tietyt vaatimattomat mikro-organismit elävinä tietyn ajan.

Sovellukset

Trypticasein Soy Agaria käytetään seuraavissa tapauksissa:

- Pohjana valmistetaan klassinen veriagar, jota käytetään rutiininomaisesti useimmissa laboratorioissa.

- Vaativien bakteerien eristäminen.

-Hemolyysikuvion tarkkailu.

- Diagnostisten testien suorittaminen.

- Pohjana valmistetaan erityistä veriagaria Corynebacterium diphteriae -bakteerille, jossa on kystiini-telluriitti ja lampaanveri.

- Perustana lampaan veriagarin ja kanamysiini-vankomysiinin valmistamiseksi anaerobien, erityisesti Bacteroides sp.

- Ei-vaativien kantojen ylläpitämiseen (Bacterioteca).

- Aerobisten mikrobien määrä tutkittaessa vesi-, ympäristö-, ruoka- ja kosmeettisten näytteiden mikrobirajoja.

kylvetty

Näytteet voidaan kylvää suoraan Trypticasein Soy Agar -pinnalle, johon on lisätty verta tai muita lisäaineita. Se kylvään uupumuksella.

Mikrobikantojen (bakteerit tai hiiva) alaviljelyyn yleensä käytetään trypticasein-soija-agarmaljoja ilman lisäaineita.

QA

Steriiliyden hallinta

Tryptaseiini-soijapohja-agarilla valmistettujen eri elatusaineiden steriiliyden tarkistamiseksi suositellaan seuraavaa: Jokaisesta valmistetusta erästä 1 tai 2 inokuloimatonta levyä tai putkea tulisi inkuboida 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan niiden steriiliyden osoittamiseksi. Kaikissa tapauksissa sen on pysyttävä ilman kasvua.

Jos kontaminaatiota löytyy, koko erä on hävitettävä.

Kasvun hallinta

Seuraavia bakteerikantoja voidaan käyttää tryptaseiini-soija-agarin asianmukaisen toiminnan tutkimiseen: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 ja Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Kannat ympätään ja inkuboidaan aerobisesti 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan.

Kaikissa tapauksissa kasvun on oltava tyydyttävää.

Voidaan käyttää myös sieniä, kuten Candida albicans Complex ATCC 10231 ja Aspergillus niger ATCC 16404. Kummankin kannan odotetaan olevan hyvä kasvu.

Verillä täydennetyn trypticasein-soija-agarin kasvunhallinta ja hemolyysikuvio

Tällä emäksellä valmistetun veriagarin moitteettoman toiminnan varmistamiseksi voidaan käyttää seuraavia kantoja: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ja Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Ne ympätään ja inkuboidaan 37 ° C: ssa mikroaerofiilisyydessä 24 tuntia.

Kaikissa tapauksissa kasvun tulisi olla tyydyttävää ottaen huomioon, että beeta-hemolyysiä (kevyttä halogeenia pesäkkeen ympärillä) on tarkkailtava S. pyogenes -bakteerissa ja alfa-hemolyysiä (vihertävää halogeenia siirtokunnan ympärillä) on tarkkailtava kummassakin S. pneumoniae -kannassa. pesäkkeitä).

Viitteet

1. Wikipedian avustajat. Trypticase Olen agar. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 17. joulukuuta 2018, kello 15:47 UTC. Saatavilla:
2. Britannia Laboratories. Tripteinin soija-agar. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Tryptinen soija-agar. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA
5. BD Laboratories. Trypticase Olen agar. 2014.Saatavilla osoitteessa:.bd.com