Vismutti sulfiitti-agar on kiinteässä elatusaineessa, selektiivinen ja ero kulttuuri, jotka on erityisesti suunniteltu eristämiseksi Salmonella enterican alalaji enterica serotyypin Typhi muun Salmonella-lajit. Elatusaine tunnetaan nimellä BSA agar lyhenteestä englanniksi vismuttisulfiittiagar.
Alkuperäinen vismuttisulfiittiagar-kaava luotiin vuonna 1927 Wilson ja Blair (glukoosibismuttisulfiittiteräsväliaine); se sisälsi natriumsulfiittia, glukoosia, vismuttiliuosta, ammoniumsitraattia, rautasulfaattia ja agar-agaria.
Kasvu 48 tunnin inkuboinnissa Salmonella sp: lla vismutisulfiittiagarilla. Lähde: Pixnio.com Kirjoittaja: Dr. WR Erving, USCDCP
Nykyään on olemassa muutos alkuperäiseen väliaineeseen, joka koostuu lihauutteesta, liha- ja kaseiinipeptoneista, vismuttisulfiittimittarista, glukoosista, dinatriumfosfaatista, rautasulfaatista, kirkkaanvihreästä ja agar-agarista.
Salmonellalajien eristämiseksi on monia keinoja, mutta kun kyse on Typhi-serotyypin palauttamisesta, vismutisulfiittiagarilla on huomattava etu heihin nähden, koska useimmiten tämän mikro-organismin talteenotto on hyvin vähäistä tai ei ollenkaan..
Enteropatogeenien eristämisessä on kuitenkin käytettävä useampaa kuin yhtä väliainetta, koska vismutisulfiittiagar on vähemmän tehokas muille Salmonella-lajeille ja Shigella-suvulle, jotka ovat inhiboituneita tai kehittyvät erittäin huonosti. tässä agarissa.
On huomattava, että kaikista Salmonella-lajeista Typhi-serotyyppi on yksi tärkeimmistä ihmisten enteropatogeeneistä, mikä on sen ainoa säiliö. Tämä serovariini aiheuttaa lavantauti, kuume-suolitulehduksen, baktereemian ja septikemian.
Tästä syystä on tärkeää sisällyttää tämä agar analysoitaessa vesi-, uloste- tai ruoanäytteitä, jos sen esiintymistä epäillään.
Perusta
Kuten useimmat viljelyväliaineet, vismuttisulfiittiagar sisältää ravintoaineita, kuten peptoneja ja lihauutteita bakteerien kasvun edistämiseksi. Samoin glukoosi toimii energian ja hiilen lähteenä.
Kaikki bakteerit eivät kuitenkaan kasva tällä väliaineella, koska vismutisulfiittiagar on selektiivinen väliaine. Se sisältää yhdisteitä, jotka estävät gram-positiivisten mikro-organismien ja tiettyjen gram-negatiivisten bakteerien kasvua. Nämä yhdisteet ovat: indikaattori vismuttisulfiitti ja kirkkaanvihreä.
Dinatriumfosfaatti puolestaan ylläpitää väliaineen osmolaarisuutta ja pH: ta.
Lisäksi, vismutti sulfiitti agar on ero väliaine läsnäolon ansiosta ferrosulfaatin, joka esittää muodostumisen H 2 S. H 2 S on muodostettu bakteerit reagoi ferrosulfaatti ja muodostaa selvästi näkyvän liukenematon musta sakka.
Lopuksi agar-agar antaa kiinteän konsistenssin väliaineelle.
Valmistautuminen
Punnitaan 52,3 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan litraan vettä. Kuumenna seosta kiehumaan yhden minuutin ajan sekoittaen usein, kunnes se on täysin liuennut. Älä ylikuumenna liikaa. Tätä alustaa ei voida autoklavoida, koska voimakas lämpö vahingoittaa elatusainetta.
Annetaan jäähtyä 45 ° C: seen ja ravistetaan ennen tarjoilua steriileissä Petri-maljoissa. On suositeltavaa valmistaa levyjä, joiden paksuus on hyvä. Tätä varten jokaiselle levylle on kaadettava 25 ml. Anna kiinteytyä. Koska kyse on väliaineesta, jota ei steriloida, on normaalia, että sen välitöntä käyttöä ehdotetaan.
D'aoustin vuonna 1977 suorittama tutkimus osoitti kuitenkin, että Salmonella typhimurium ja Salmonella enteritidis ovat paremmin toipuneet vismuttisulfiittiagar-keski-ikäisenä, mikä ei vaikuta serovarsien Typhi ja Paratyphi B suorituskykyyn.
D'aoust suosittelee levyjen käyttöä jäähdytyspäivänä 4, vaikka varoittaa, että keskipitkän ikääntyessä selektiivisyys vähenee ja Proteus vulgaris -kannat kehittyvät helpommin.
Tästä syystä erittäin saastuneille näytteille, kuten ulosteille, on edullista käyttää vasta valmistettua väliainetta. Muussa tapauksessa käytä valmisteen valmistamispäivänä 4. Muut kirjoittajat suosittelevat levyjen käyttöä jääkaapissa säilytettyinä niiden valmistusta seuraavana päivänä.
Jäähdytetyt levyt on karkaistava ennen käyttöä. Elatusaineen pH: n tulisi olla 7,5 ± 0,2. Raaka elatusaine on beige ja valmistettu elatusaine on vihertävän harmaa opaalinhohtoinen.
Sovellukset
Tähän väliaineeseen istutettavien näytteiden joukossa ovat näytteet ulosteesta, juoma- tai jätevesistä ja ruuasta.
Isolaattien parantamiseksi suositellaan suorittamaan esirikastuskäsittely laktoosiliemillä ja sen jälkeen kun on rikastunut tetrationaattiliemellä tai kystiini-seleniittiliemellä, ennen kylvää vismuttisulfiittiagaria.
Levyjä inkuboidaan lämpötilassa 35 ° C ± 0,2 24 - 48 tuntia aerobioosissa.
Bismuttisulfiittiagar-pesäkkeiden ominaisuudet
Salmonella Typhi -pesäkkeet nähdään tyypillisesti tässä agarissa 24 tunnin sisällä mustalla keskuksella, ja niitä ympäröi kirkkaanvihreä halo. 48 tunnin sisällä ne muuttuvat täysin mustiksi rikkivedyn muodostumisen vuoksi.
-Tämä väliaine estää suurimman osan Shigella-suvun lajeista.
- S. Typhi ja S. arizonae voivat antaa hyvin samanlaisia pesäkkeitä.
-The koliformien jotka tuottavat H 2 S, kuten Proteus ja Citrobacter tuottaa pesäkkeitä samanlaisia kuin Salmonella, joten se on tarpeen suorittaa biokemiallisia tunnistustestit.
- Eristettyjen pesäkkeiden saamiseksi on suoritettava hyvä narrotus; Se on ainoa tapa tarkkailla Salmonella-sukuisten pesäkkeiden tyypillisiä ominaisuuksia.
QA
Steriiliyden kontrolloimiseksi inokuloimatonta levyä inkuboidaan 37 ° C: ssa, ei odoteta tapahtuvan kasvua tai värinmuutosta.
Laadunvalvontaa varten tunnetut kannat, kuten:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia colin ja Shigella flexnerin odotetaan estävän osittain kehittämällä vihertävänruskeita ja ruskeita pesäkkeitä. Molemmilla lohilla on oltava erinomainen kehitys metallisella kiiltoisella mustalla pesäkkeellä, ja lopuksi Enterococcus faecalis on estettävä kokonaan.
Viitteet
- Wilson, W., ja EM McV. Blair. Glukoosibismuttisulfiittisen rautaelatusaineen käyttö B. typhosuksen ja B. proteuksen eristämiseen. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Haettu osoitteesta.jstor.org
- D'aoust JY. Vismutisulfiittiagarin suorituskyvyn varastointiolosuhteiden vaikutus. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Saatavana: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD -laboratoriot. Vismuttisulfiittiagar WILSON-BLAIR: n mukaan. 2009.Saatavilla osoitteessa: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2).pdf
- Himedia Laboratories. Vismuttisulfiittiagar. 2017.Saatavilla osoitteessa: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G ja Ybarra M. Miravallesissa, Pueblassa tuotetun vuohiraaka-aineen bakteriologinen laatu. Mv. De Qu Quim 2012; 11 (1): 45 - 54