TCBS agar on keino erittäin selektiivinen ja ero kiinteän kulttuuri, jota käytetään eristämiseen ja viljely-suvun bakteerien Vibrio, erityisesti Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus ja V. vulnificus -tartuntaa kuin suuria patogeenejä tällaista.
Lyhenne TCBS tarkoittaa tiosulfaattisitraattisappisakkaroosia. Tämä agar tunnetaan myös selektiivisenä elatusaineena vibroille. Alkuperäisen kaavan loi Nakanishi ja myöhemmin muutti Kobayashi.
Kaupallinen TCBS-elatusaine ja TCBS-agarmalja, kylvetty Vibrio-kolereilla. Lähde: kuva 1: kirjoittanut kirjoittanut MSc. Marielsa Gil / Kuva 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, Intia
Se koostuu hiivauutteesta, lihapeptonista, tripteiinistä, natriumsitraatista, natriumtiosulfaatista, sappihaposta, sakkaroosista, natriumkloridista, ferrisitraatista, bromitymolisinisestä, timolisinisestä ja agarista.
Tämä koostumus mahdollistaa Vibrio-lajien riittävän kehityksen vesi-, ruoka- ja ulostenäytteistä; lukuun ottamatta Vibrio hollisae -lajia, joka ei kasva tällä väliaineella. Lisäksi TCBS-elatusaine kykenee inhiboimaan muiden mukana olevien bakteerien, etenkin kolibakteerien, kasvua.
Joidenkin Vibrio-suvun lajien aiheuttamien vakavien maha-suolikanavan ja suoliston ulkopuolisten ongelmien vuoksi sen diagnoosi on erittäin tärkeä. Ihmiset tarttuvat pääasiassa syömällä merestä tai pilaantuneilta vesiltä peräisin olevia raa'ita tai alikeitetyt ruokia, mutta myös haavainfektiota.
Tämän vuoksi kliinisten laboratorioiden on sisällytettävä TCBS-agar nestemäisten ulosteiden näytteiden ulosteviljelmätutkimukseen, erityisesti riisiveden ollessa kyseessä. Varsinkin jos potilas ilmoittaa olleensa kosketuksissa meriveteen tai kuluttaneen äyriäisiä tai kaloja.
Perusta
Hiivauute, lihapeptonit ja triptein ovat tämän väliaineen ravintolähde. TCBS-agar on kuitenkin kielteinen väliaine useimmille bakteereille.
Sen korkea selektiivisyys saadaan lisäämällä natriumsitraattia ja oksisappia; molemmat ovat estäviä aineita, jotka tarjoavat elatusaineelle myös alkalisen pH: n, rajoittaen mukana olevan kasviston kasvua ja suosimalla V. choleraen kasvua muiden lajien joukossa. On huomattava, että Vibrio cholerae on erittäin herkkä happamuudelle.
Natriumkloridi puolestaan tasapainottaa väliainetta. Lisäksi, koska sen pitoisuus on korkea, se toimii myös estävänä aineena edistäen halogeenisten bakteerien kasvua.
Sakkaroosi on käymissokeri, joka yhdessä bromitymolisinisen ja tymolisinisen pH-indikaattorin kanssa antaa väliaineelle sen erotusluonteen. Tästä syystä tällä väliaineella on mahdollista erottaa sakkaroosia käyviä kantoja ei-käymisistä.
Sakkaroosia fermentoivien kantojen pesäkkeet kehittyvät keltaiseksi ja muuttuvat väliaineesta vihreästä keltaiseksi hapontuotannon vuoksi. Ei-fermentoijat kasvavat läpikuultavina ja väliaine pysyy alkuperäisenä värinä (vihreä).
Samoin tämä väliaine sisältää natriumtiosulfaattia rikin lähteenä ja ferrisitraattia kehittävänä aineena. Molemmissa on bakteereja, jotka kykenevät tuottamaan rikkivetyä (väritöntä kaasua). H 2 S on muodostettu tiosulfaatti ja sen jälkeen kun reagoi ferrisitraattia näkyvän musta sakka.
Lopuksi agar on se, joka tarjoaa kiinteän konsistenssin väliaineelle.
Valmistautuminen
Punnitaan 89 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Auta liukenemista kuumentamalla ja usein sekoittamalla. Seosta voidaan keittää korkeintaan 2 minuuttia.
Tätä alustaa ei autoklaavoida. Liuottamisen jälkeen se tarjoillaan suoraan steriileille levyille. Jähmettyessään ne järjestetään käänteisesti verihiutaleille ja säilytetään jääkaapissa (2–8 ° C) käyttöönottoon saakka.
Valmistusvaiheen väliaineen on pysyttävä pH: ssa 8,6 ± 0,2.
Kuivatun väliaineen väri on vaaleanbeige tai vihertävänbeige ja väliaineen väri on metsänvihreä tai sinertävänvihreä.
On tärkeää antaa levyjen lämmetä ennen näytteiden siementtämistä.
Käyttää
Yleisin näyte Vibrios-eristykselle on ripulia jakkara.
Ulosteenäytteet, jos niitä ei voida välittömästi kylvää selektiiviselle väliaineelle, on kuljetettava Cary Blair -väliaineella.
Viljelmän herkkyyden lisäämiseksi ulosteet voidaan viedä peptoniveden läpi, jonka pH on 8,4, rikastusväliaineena enintään 8 tunnin ajan, siitä lähtien se viljelään edelleen TCBS-väliaineeseen.
On myös otettava huomioon, että jotkut Vibrios-kannat voivat aiheuttaa septikemian immunosuppressoiduilla potilailla, joten ne voidaan eristää veriviljelmistä. Samoin merestä tulevia vesi- ja ruokanäytteitä voidaan analysoida, kun kolerataudin epidemioita esiintyy.
kylvetty
Tutkimuksenäytteen ymppäyksen on oltava näkyvä, kylvö suoritetaan striaatiomenetelmällä uupumuksella. Levyjä inkuboidaan 37 ° C: ssa 24 tuntia aerobioosissa.
Vibrio choleraen oletetut pesäkkeet ovat keskikokoisia, sileitä, läpinäkymättömiä, ohuilla reunoilla ja väriltään keltaisia sakkaroosin käymisen vuoksi.
V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii ja jotkut V. vulnificus lajit kasvavat samalla tavalla. Muut kliinisesti tärkeät Vibrios-lajit, kuten V. parahaemolyticus, eivät käy fermentoimalla sakkaroosia, joka kehittyy oliivinvihreinä pesäkkeinä.
TCBS-agarmalja kylvettiin Vibrio parahaemolyticuksella. Lähde: isis325 Flickr
Toisaalta on pidettävä mielessä, että jotkut Aeromonas- ja Plesiomonas-kannat, jotka ovat oksidaasia (+), voivat kasvaa tässä väliaineessa kehittäen keltaisia pesäkkeitä, jotka voivat sekoittaa kliinikon. Vaikka jotkut Pseudomonas-kannat myös oksidaasi (+) kasvaa vihreinä pesäkkeinä, kuten V. parahaemolyticus.
rajoitus
Vibrio-suvulle positiivista oksidaasitestiä ei tulisi koskaan suorittaa TCBS-agarista saaduista pesäkkeistä, koska saatu tulos on väärin negatiivinen. Keskimmäiset yhdisteet häiritsevät voimakkaasti tätä testiä. Siksi se on tehtävä ala-kulttuureista veriagarilla.
QA
Elatusaineen hyvässä kunnossa osoittamiseksi on suositeltavaa kylvää tunnetut tai sertifioidut vertailukannat ja tarkkailla, täyttääkö kasvu odotettuja ominaisuuksia.
Tätä varten voit käyttää seuraavien kantoja:
-Vibrio cholerae - tyydyttävä kasvu (keltaiset pesäkkeet, läpikuultava raja).
-Vibrio parahaemolyticus - tyydyttävä kasvu (pesäke, jossa on vihreä keskusta ja läpikuultava reuna).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tyydyttävä kasvu (keltaiset pesäkkeet, joiden kolonien ympärillä on samanvärisiä haloja).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - täydellinen tai osittainen esto (pienet keltaiset tai läpikuultavat pesäkkeet).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- - osittainen tai täydellinen esto (siniset pesäkkeet).
-Escherichia coli ATCC 25922 - kokonaan estetty.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Täydellinen tai osittainen esto. (Pienet pesäkkeet, vihreä keskusta, läpikuultava raja).
Inokuloimattoman väliaineen inkuboinnin tulisi olla muuttumatonta.
Viitteet
- Difco Francisco Soria Melguizo -laboratoriot. TCBS-agar. 2009.Saatavilla osoitteessa: f-soria.es
- BD-laboratorio. BD. TCBS Agar 2003. Saatavilla osoitteessa: bd.com
- Britannia Laboratories. TCBS Medium. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
- Acumedia Laboratories. TCBS-agar. 2016.Saatavilla osoitteessa: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.