- Perusta
- GC-pohja-agar
- Hemoglobiini
- Rikastuslisä
- estäjät
- Valmistautuminen
- Alkuperäinen Thayer Martin agar
- -GC-agar
- - 2% hemoglobiinia
- -Rakastuslisä
- -VCN-estämislisä (vankomysiini, kolistiini, nystatiini)
- -Valmis
- Modifioitu Thayer Martin agar
- -Valmis
- Käyttää
- QA
- rajoitukset
- Viitteet
Agar Thayer Martin se on erittäin ravitsevia ja kiinteä aine selektiivisessä eristämiseksi Neisseria meningitidis ja Neisseria gonorrhoeae; molemmat tunnetaan patogeenisinä tai kliinisesti tärkeinä Neisserioina.
Yksi Thayer Martin Agarin tärkeimmistä erityisominaisuuksista on sen runsas lisäravinnepitoisuus. Tämä ominaisuus on välttämätön, koska Neisseriat ovat ravinnon kannalta erittäin vaativia mikro-organismeja, minkä vuoksi ne eivät kasva tavanomaisissa väliaineissa.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin -yritys. Lähdekuva 1: Tekijän kirjoittanut MSc. Marielsa Gil, kuva 2. Pixinio.com bakteerisolonisoitu, modifioitu, Thayer, Martin, agar.
Toisaalta, koska näitä mikro-organismeja esiintyy tavallisesti ei-steriileillä alueilla, inhibiittorien lisääminen on välttämätöntä seuraavan kasviston kasvun estämiseksi vaikuttamatta Neisseria-suvun kehitykseen.
Tämä agar koostuu GC-perus-agarista, hemoglobiinista, ylimääräisistä ravintolisistä ja estävien aineiden kompleksista (antibiootit ja sienilääkkeet). Kaupalliset talot myyvät jokaisen lisäyksen erikseen.
Tähän väliaineeseen kylvettävä näyte riippuu haettavasta mikro-organismista. Neisseria gonorrhoeae: lle ihanteelliset näytteet ovat emättimen ja virtsaputken erittymiä. Neisseria meningitidiksestä eniten käytettyjä näytteitä ovat CSF, nielun ja nenän ja nielun eritteet.
Perusta
Neisseriat ovat mikro-organismeja, jotka luokitellaan ärsyttäviksi, ja siksi niiden eristäminen on vaikeaa. Siksi Thayer Martín on monimutkainen väliaine ja jokainen sen komponentti suorittaa seuraavassa selitetyn toiminnan:
GC-pohja-agar
GC-agar sisältää proteaasipeptonia, maissitärkkelystä, natriumkloridia, dikaliumfosfaattia, monokaliumfosfaattia ja agar-agaria. Sen komponentit tarjoavat peruselintarvikkeet mikrobien kehitykselle, neutraloivat myrkylliset rasvahapot, auttavat ylläpitämään osmoottista tasapainoa, määrittelevät pH: n ja tarjoavat väliaineelle kiinteän konsistenssin.
Hemoglobiini
Hemoglobiini tarjoaa tekijät V ja X (nikotiinamidiadeniinidinukleotidi NAD ja vastaavasti hemiini). Tästä syystä Haemophilus-lajit kasvavat myös tässä väliaineessa. Hemoglobiini voidaan saada kaupallisesti dehydratoidussa muodossa tai tuoretta defibrinoitua naudan verta voidaan lisätä väliaineeseen.
Rikastuslisä
Toisaalta Thayer-Martin-elatusaineeseen on lisättävä myös rikastuttava lisä, koska perus-agarin sisältämät ravintoaineet eivät riitä Neisseria-suvun tarpeisiin.
Yleisimmin käytetty rikastuslisä on nimeltään isovitalex. Se sisältää glutamiinia, adeniinia, NAD: tä, kokarboksylaasia, guaniinia, rautanitraattia, p-aminobentsoehappoa, B12-vitamiinia, tiamiinia ja glukoosia. Kaikki nämä yhdisteet ovat välttämättömiä patogeenisten Neisserioiden oikealle kehitykselle.
estäjät
Koska se on erittäin ravitseva väliaine, on käytettävä estäjiä, jotka estävät mikro-organismien kasvua alueen tavanomaisesta kasvistoista ja edistävät siten Neisseria-suvun eristämistä.
Inhibiittorikompleksi koostuu vankomysiinistä, kolistiinista ja nystatiinista. Vankomysiini estää gram-positiivisten bakteerien kasvua, kolistiini estää gram-negatiivisten bakteerien, kuten Pseudomonas ja joidenkin saprofyyttisten Neisserioiden, kasvua, ja nystatiini vaikuttaa hiivoihin, kuten Candida albicans.
Thayer Martin Agaria muokattiin kuitenkin myöhemmin; muutokset koostuivat trimetoprimin lisäämisestä, agarin määrän lisäämisestä ja ylimääräisen glukoosin lisäämisestä. Nämä muutokset paransivat merkittävästi Neisseria gonorrhoeae -lajien palautumista.
On huomattava, että trimetoprimi estää Proteus-suvun kasvua ja sen seurauksena parven muodostumista. Tässä mielessä juuri antibiootit tarjoavat selektiivisen luonteen Thayer Martin -väliaineelle.
Valmistautuminen
Alkuperäinen Thayer Martin agar
-GC-agar
Punnitaan 8,2 g kuivattua GC-alustaa ja suspendoidaan 100 ml: aan. Sekoita ja keitä 1 minuutin ajan sekoittaen usein, jotta liukenee kokonaan. Steriloi seos autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.
- 2% hemoglobiinia
Suspendoidaan 2 g dehydratoitua hemoglobiinia 2 tai 3 ml: aan kuumaa tislattua vettä, kunnes muodostuu tasainen seos. Lisää vähitellen enemmän vettä 100 ml: n tilavuuden lisäämiseksi. Suspension on oltava homogeenista ennen sterilointia.
Steriloi autoklaavissa 15 minuutin ajan.
-Rakastuslisä
Valmista kaupallinen injektiopullo laimennusaineella, jonka on toimittanut sama kaupallinen yritys. Sekoita hyvin. Käytettävän laimentimen määrä määritetään pakkauksen ohjeissa.
-VCN-estämislisä (vankomysiini, kolistiini, nystatiini)
Valmista injektiopullo kaupallisen yrityksen laimennusaineella. Sekoita hyvin. Käytettävän laimentimen määrä määritetään pakkauksen ohjeissa.
-Valmis
Jatka seuraavaa 100 ml: aa GC-agaria:
Kun GC-agar poistuu autoklaavista, anna sen jäähtyä noin 50 ° C: n lämpötilaan ja lisää 2 ml valmistettua hemoglobiiniliuosta, 2 ml rikastuslisäainetta (isobitalex tai britalex) ja 2 ml inhibitiolisää. Sekoita ja tarjoa steriileissä Petri-maljoissa.
Anna jähmettyä ja säilytä jääkaapissa, kunnes käytät.
Valmistetun väliaineen väri on kirsikanpunainen. Elatusaineen lopullinen pH on 7,2 ± 0,2
Modifioitu Thayer Martin agar
Punnitaan 8,2 g kuivattua GC-alustaa ja suspendoidaan 100 ml: aan. Lisää 1 g agar-agaria ja lisää 0,3 g glukoosia. Sekoita ja keitä 1 minuutin ajan sekoittaen usein, jotta liukenee kokonaan. Steriloi seos autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.
Valmista hemoglobiini- ja rikastamislisä aiemmin kuvatulla tavalla.
Käytetty vaimennuslisäaine on VCNT (vankomysiini, kolistiini, nystatiini, trimetoprimi).
-Valmis
Jatka alkuperäisen Thayer Martin-agarin ohjeiden mukaisesti.
Käyttää
Thayer Martin Agarin tulisi antaa lämmetä ennen näytteiden raitoja. Yleisesti käytettyjä näytteitä ovat nielunäytteet, nenätyynyt, emättimen, virtsaputken ja / tai peräsuolen vuoto ja CSF.
Käytä tuoreita näytteitä ja tee vahvat siirrot agarille. Näytteet siemennetään suoraan materiaalin purkauksella, ja sitten uurteet viivat pintaan.
Levyjä inkuboidaan 35-37 ° C: ssa 24-48 tuntia mikroaerofiilisessä purkki (5% CO 2). Inkubointiajan lopussa maljat tutkitaan pienten, harmaan ja joskus mukoidin näköisten pesäkkeiden suhteen.
Suorita gramma- ja vahvistus biokemialliset testit epäilyttäville pesäkkeille.
QA
Seuraavia mikrobikantoja voidaan käyttää Thayer Martin Agarin laadunvalvontaan.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 ja Neisseria meningitidis ATCC 13090; molemmissa kannoissa odotetaan tyydyttävää kehitystä.
Seuraavat kannat tulisi myös sisällyttää: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 ja Candida albicans ATCC 10231. Kaikissa näissä tässä väliaineessa odotetaan kokonaista tai osittaista estämistä.
rajoitukset
-Meidän on pidettävä mielessä, että bakteerit, jotka ovat resistenttejä käytetyille estäjille, voivat kasvaa elatusaineessa.
- Neisseria gonorrhoeae-kantoja, jotka voivat olla herkkiä käytetyn vankomysiinin pitoisuudelle. Tästä syystä on suositeltavaa käyttää suklaagaria, jota on täydennetty isovitalexilla, mutta ilman estäjiä.
-On nystatiiniresistenttejä hiivakantoja, jotka voivat kasvaa tässä väliaineessa ja häiritä patogeenisten Neisserioiden, etenkin gonokokkien, eristämistä.
Viitteet
- Valtek Diagnostic Laboratories. Thayer-Martin Agar, 2016. Saatavana osoitteessa: com
- Britannia Laboratories. Thayer Martin Medium muokattu. 2010.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
- Wikipedian avustajat. Thayer-Martin agar. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 26. lokakuuta 2017, kello 16:33 UTC. Saatavana osoitteessa: wikipedia.org 4. Pääsy 28. helmikuuta 2019.
- Britannia Laboratories. GC-agar. 2010.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com.
- Laboratories BBL ™ -väliaineen rikastaminen nirsoille mikro-organismeille. 1999. Saatavana: bd.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
