THAYERIN MARTIN-AGAR: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

Agar Thayer Martin se on erittäin ravitsevia ja kiinteä aine selektiivisessä eristämiseksi Neisseria meningitidis ja Neisseria gonorrhoeae; molemmat tunnetaan patogeenisinä tai kliinisesti tärkeinä Neisserioina.

Yksi Thayer Martin Agarin tärkeimmistä erityisominaisuuksista on sen runsas lisäravinnepitoisuus. Tämä ominaisuus on välttämätön, koska Neisseriat ovat ravinnon kannalta erittäin vaativia mikro-organismeja, minkä vuoksi ne eivät kasva tavanomaisissa väliaineissa.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin -yritys. Lähdekuva 1: Tekijän kirjoittanut MSc. Marielsa Gil, kuva 2. Pixinio.com bakteerisolonisoitu, modifioitu, Thayer, Martin, agar.

Toisaalta, koska näitä mikro-organismeja esiintyy tavallisesti ei-steriileillä alueilla, inhibiittorien lisääminen on välttämätöntä seuraavan kasviston kasvun estämiseksi vaikuttamatta Neisseria-suvun kehitykseen.

Tämä agar koostuu GC-perus-agarista, hemoglobiinista, ylimääräisistä ravintolisistä ja estävien aineiden kompleksista (antibiootit ja sienilääkkeet). Kaupalliset talot myyvät jokaisen lisäyksen erikseen.

Tähän väliaineeseen kylvettävä näyte riippuu haettavasta mikro-organismista. Neisseria gonorrhoeae: lle ihanteelliset näytteet ovat emättimen ja virtsaputken erittymiä. Neisseria meningitidiksestä eniten käytettyjä näytteitä ovat CSF, nielun ja nenän ja nielun eritteet.

Perusta

Neisseriat ovat mikro-organismeja, jotka luokitellaan ärsyttäviksi, ja siksi niiden eristäminen on vaikeaa. Siksi Thayer Martín on monimutkainen väliaine ja jokainen sen komponentti suorittaa seuraavassa selitetyn toiminnan:

GC-pohja-agar

GC-agar sisältää proteaasipeptonia, maissitärkkelystä, natriumkloridia, dikaliumfosfaattia, monokaliumfosfaattia ja agar-agaria. Sen komponentit tarjoavat peruselintarvikkeet mikrobien kehitykselle, neutraloivat myrkylliset rasvahapot, auttavat ylläpitämään osmoottista tasapainoa, määrittelevät pH: n ja tarjoavat väliaineelle kiinteän konsistenssin.

Hemoglobiini

Hemoglobiini tarjoaa tekijät V ja X (nikotiinamidiadeniinidinukleotidi NAD ja vastaavasti hemiini). Tästä syystä Haemophilus-lajit kasvavat myös tässä väliaineessa. Hemoglobiini voidaan saada kaupallisesti dehydratoidussa muodossa tai tuoretta defibrinoitua naudan verta voidaan lisätä väliaineeseen.

Rikastuslisä

Toisaalta Thayer-Martin-elatusaineeseen on lisättävä myös rikastuttava lisä, koska perus-agarin sisältämät ravintoaineet eivät riitä Neisseria-suvun tarpeisiin.

Yleisimmin käytetty rikastuslisä on nimeltään isovitalex. Se sisältää glutamiinia, adeniinia, NAD: tä, kokarboksylaasia, guaniinia, rautanitraattia, p-aminobentsoehappoa, B12-vitamiinia, tiamiinia ja glukoosia. Kaikki nämä yhdisteet ovat välttämättömiä patogeenisten Neisserioiden oikealle kehitykselle.

estäjät

Koska se on erittäin ravitseva väliaine, on käytettävä estäjiä, jotka estävät mikro-organismien kasvua alueen tavanomaisesta kasvistoista ja edistävät siten Neisseria-suvun eristämistä.

Inhibiittorikompleksi koostuu vankomysiinistä, kolistiinista ja nystatiinista. Vankomysiini estää gram-positiivisten bakteerien kasvua, kolistiini estää gram-negatiivisten bakteerien, kuten Pseudomonas ja joidenkin saprofyyttisten Neisserioiden, kasvua, ja nystatiini vaikuttaa hiivoihin, kuten Candida albicans.

Thayer Martin Agaria muokattiin kuitenkin myöhemmin; muutokset koostuivat trimetoprimin lisäämisestä, agarin määrän lisäämisestä ja ylimääräisen glukoosin lisäämisestä. Nämä muutokset paransivat merkittävästi Neisseria gonorrhoeae -lajien palautumista.

On huomattava, että trimetoprimi estää Proteus-suvun kasvua ja sen seurauksena parven muodostumista. Tässä mielessä juuri antibiootit tarjoavat selektiivisen luonteen Thayer Martin -väliaineelle.

Valmistautuminen

Alkuperäinen Thayer Martin agar

-GC-agar

Punnitaan 8,2 g kuivattua GC-alustaa ja suspendoidaan 100 ml: aan. Sekoita ja keitä 1 minuutin ajan sekoittaen usein, jotta liukenee kokonaan. Steriloi seos autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

- 2% hemoglobiinia

Suspendoidaan 2 g dehydratoitua hemoglobiinia 2 tai 3 ml: aan kuumaa tislattua vettä, kunnes muodostuu tasainen seos. Lisää vähitellen enemmän vettä 100 ml: n tilavuuden lisäämiseksi. Suspension on oltava homogeenista ennen sterilointia.

Steriloi autoklaavissa 15 minuutin ajan.

-Rakastuslisä

Valmista kaupallinen injektiopullo laimennusaineella, jonka on toimittanut sama kaupallinen yritys. Sekoita hyvin. Käytettävän laimentimen määrä määritetään pakkauksen ohjeissa.

-VCN-estämislisä (vankomysiini, kolistiini, nystatiini)

Valmista injektiopullo kaupallisen yrityksen laimennusaineella. Sekoita hyvin. Käytettävän laimentimen määrä määritetään pakkauksen ohjeissa.

-Valmis

Jatka seuraavaa 100 ml: aa GC-agaria:

Kun GC-agar poistuu autoklaavista, anna sen jäähtyä noin 50 ° C: n lämpötilaan ja lisää 2 ml valmistettua hemoglobiiniliuosta, 2 ml rikastuslisäainetta (isobitalex tai britalex) ja 2 ml inhibitiolisää. Sekoita ja tarjoa steriileissä Petri-maljoissa.

Anna jähmettyä ja säilytä jääkaapissa, kunnes käytät.

Valmistetun väliaineen väri on kirsikanpunainen. Elatusaineen lopullinen pH on 7,2 ± 0,2

Modifioitu Thayer Martin agar

Punnitaan 8,2 g kuivattua GC-alustaa ja suspendoidaan 100 ml: aan. Lisää 1 g agar-agaria ja lisää 0,3 g glukoosia. Sekoita ja keitä 1 minuutin ajan sekoittaen usein, jotta liukenee kokonaan. Steriloi seos autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Valmista hemoglobiini- ja rikastamislisä aiemmin kuvatulla tavalla.

Käytetty vaimennuslisäaine on VCNT (vankomysiini, kolistiini, nystatiini, trimetoprimi).

-Valmis

Jatka alkuperäisen Thayer Martin-agarin ohjeiden mukaisesti.

Käyttää

Thayer Martin Agarin tulisi antaa lämmetä ennen näytteiden raitoja. Yleisesti käytettyjä näytteitä ovat nielunäytteet, nenätyynyt, emättimen, virtsaputken ja / tai peräsuolen vuoto ja CSF.

Käytä tuoreita näytteitä ja tee vahvat siirrot agarille. Näytteet siemennetään suoraan materiaalin purkauksella, ja sitten uurteet viivat pintaan.

Levyjä inkuboidaan 35-37 ° C: ssa 24-48 tuntia mikroaerofiilisessä purkki (5% CO ₂). Inkubointiajan lopussa maljat tutkitaan pienten, harmaan ja joskus mukoidin näköisten pesäkkeiden suhteen.

Suorita gramma- ja vahvistus biokemialliset testit epäilyttäville pesäkkeille.

QA

Seuraavia mikrobikantoja voidaan käyttää Thayer Martin Agarin laadunvalvontaan.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 ja Neisseria meningitidis ATCC 13090; molemmissa kannoissa odotetaan tyydyttävää kehitystä.

Seuraavat kannat tulisi myös sisällyttää: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 ja Candida albicans ATCC 10231. Kaikissa näissä tässä väliaineessa odotetaan kokonaista tai osittaista estämistä.

rajoitukset

-Meidän on pidettävä mielessä, että bakteerit, jotka ovat resistenttejä käytetyille estäjille, voivat kasvaa elatusaineessa.

- Neisseria gonorrhoeae-kantoja, jotka voivat olla herkkiä käytetyn vankomysiinin pitoisuudelle. Tästä syystä on suositeltavaa käyttää suklaagaria, jota on täydennetty isovitalexilla, mutta ilman estäjiä.

-On nystatiiniresistenttejä hiivakantoja, jotka voivat kasvaa tässä väliaineessa ja häiritä patogeenisten Neisserioiden, etenkin gonokokkien, eristämistä.

Viitteet

1. Valtek Diagnostic Laboratories. Thayer-Martin Agar, 2016. Saatavana osoitteessa: com
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Medium muokattu. 2010.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
3. Wikipedian avustajat. Thayer-Martin agar. Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 26. lokakuuta 2017, kello 16:33 UTC. Saatavana osoitteessa: wikipedia.org 4. Pääsy 28. helmikuuta 2019.
4. Britannia Laboratories. GC-agar. 2010.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com.
5. Laboratories BBL ™ -väliaineen rikastaminen nirsoille mikro-organismeille. 1999. Saatavana: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.