KIRKKAANVIHREÄ AGAR: PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTTÖTAVAT - BIOLOGIA - 2025

Briljanttivihreä agar on kiinteän elatusaineen, jolla on suuri selektiivisyys. Sitä käytetään yksinomaan Salmonella-suvun kantojen eristämiseen, mutta on myös joitain poikkeuksia, kuten tyyfi- ja paratyfilajit, jotka eivät kasva tällä väliaineella.

Salmonella-sukua etsitään usein ulosteesta, vesi- tai ruuanäytteistä. Tässä mielessä tämä väline voi olla erittäin hyödyllinen. Tämän agarin loivat vuonna 1925 Kristensen, Lester ja Jurgens, myöhemmin Kauffmann muutti sitä.

Kirkkaanvihreä agar. Fermentoivat ja käymättömät pesäkkeet. Lähde: MJ Richardson / Invisible Worlds -näyttely - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons -lisenssi.

Se koostuu pluripeptoneista eläimen kudosten peptisestä sulatuksesta ja haiman kaseiinigeelistä, se sisältää myös hiivauutetta, natriumkloridia, laktoosia, sakkaroosia, fenolipunaista, kirkkaanvihreää ja agar-agaria.

Sille on ominaista, että se on melko turmeltumaton ympäristö useimmille bakteereille, suosimalla salmonellan kasvua. Jotkut kolibakteerit kykenevät kuitenkin pysymään siellä ja kehittyvät heikosti.

On tärkeätä huomata, että Shigella-suvut eivät kasva tällä väliaineella eikä Salmonella typhimurium tai Salmonella paratyphi. Siksi, jos haluat eristää nämä mikro-organismit, on käytettävä muita väliaineita, kuten XLD-agaria.

Perusta

Kirkkaanvihreä agar

Jokainen väliaineen muodostava komponentti suorittaa tietyn toiminnon, joka määrittää agarin ominaisuudet ja ominaisuudet.

Pluripeptonit ja hiivauute ovat ravinteiden lähde, josta mikro-organismit ottavat kehitykseen tarvittavat typen ja mineraalit. Laktoosi ja sakkaroosi ovat energialähteitä mikro-organismeille, jotka kykenevät fermentoimaan niitä.

Kirkkaanvihreä on estävä aine, joka estää gram-positiivisten bakteerien ja suuren määrän gram-negatiivisia mikro-organismeja.

Natriumkloridi tarjoaa väliaineelle osmoottisen stabiilisuuden. Vaikka fenolipunainen on pH-indikaattori, se muuttuu väriseksi havaittaessa hapon tuotantoa hiilihydraattifermentaatiosta.

Fermentoimattomat laktoosin ja sakkaroosin pesäkkeet kasvavat tällä väliaineella vaaleanpunaisella tai läpinäkyvällä valkoisella värillä punaisella taustalla. Esimerkiksi Salmonella-suvun bakteerit.

Vaikka laktoosia tai sakkaroosia fermentoivat bakteerit, jotka kykenevät kasvamaan tällä väliaineella, kehittävät kelta-vihreitä tai kelta-vihreitä pesäkkeitä vihertävän keltaisella taustalla. Esimerkiksi Escherichia coli ja Klebsiella pneumoniae.

Kirkkaanvihreä agar (BGA) variantit

On myös muita variantteja kirkkaanvihreästä agarista; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) - ja Novobiocin Brilliant Green Glyserolilaktoosi (NBGL) - agar.

Novobiocin kirkkaanvihreä glukoosiagar

Sisältää tryptikaasi-soija-agaria, ferri-ammoniumsitraattia, natriumtiosulfaatti-pentahydraattia, fenolipunaa, glukoosia, kirkkaanvihreää, novobiosiinia ja tislattua vettä.

Sitä käytetään salmonellapesäkkeiden eristämiseen ulosteesta.

Tässä tapauksessa kirkkaanvihreä ja novobiosiini ovat estäviä aineita, jotka estävät gram-positiivisten bakteerien ja joidenkin gram-negatiivisten mikro-organismien kasvua.

Natriumtiosulfaatti on sulfidilähde ja ferrisitraatti on raudelähde, jotka molemmat ovat välttämättömiä rikkivetytuotannon paljastamiseksi muodostamalla musta rautasulfidisaostuma.

Glukoosi on käymiskelpoinen hiilihydraatti ja fenolipunainen on pH-indikaattori.

Tällä väliaineella Salmonella-pesäkkeet kehittyvät suuriksi, ja mustan keskuksen ympäröi punertava halo ja sitä seuraa selkeä näkyvä alue. Jotkut Citrobacter freundii -kannat tuottavat pesäkkeitä, jotka ovat identtisiä Salmonellan kanssa.

Novobiocin Brilliant Green Glyseroli-Laktoosiagar (NBGL)

Tämä väliaine sisältää tryptikaasi-soija-agaria, ferri-ammoniumsitraattia, natriumtiosulfaattia, laktoosia, glyserolia, kirkkaanvihreää, novobiosiinia ja tislattua vettä.

Ero tämän väliaineen ja edellisen välillä on siinä, että glukoosi on korvattu laktoosilla ja glyserolilla ja fenolipunaista ei käytetä.

Elatusainetta käytetään myös Salmonella-lajien eristämiseen, pesäkkeet kehittyvät mustiksi rikkivetytuotannon seurauksena.

Vain pesäkkeet, jotka eivät tuota happoa glyserolista tai laktoosia saavuttaa riittävä H ₂ S tuotanto, koska alhaisessa pH: ssa häiritsee H ₂ S muodostumista. Tämä johtaa väritön pesäkkeiden useimpien lajien Proteus ja Citrobacter.

Valmistautuminen

-Punnitaan 58 grammaa kaupallisesti saatua dehydratoitua alustaa. Lisää se litraan uudelleen tislattua vettä. Sekoita, anna seistä muutama minuutti ja aseta seos lämmönlähteelle, kunnes se on täysin liuennut.

-Autoklaavi 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan, älä ylitä sterilointiaikaa.

-Anna sen levätä ja tarjoilla kuumana steriileissä Petri-astioissa. Lopullisen pH: n tulisi olla 6,9 ± 0,2.

- Anna jähmettyä ja säilytä jääkaapissa käyttöönottoon asti. Ennen kuin kylvät levyt, niiden tulee olla huoneenlämpöisiä.

- Jauheväliaine on vihreää ja valmistettu väriltään oranssinruskealla tai punertavanvihreällä pH: sta ja kaupallisesta yrityksestä riippuen. Hyvin ruskea väri osoittaa, että agar oli ylikuumentunut.

- Kun agar on jähmettynyt, sitä ei suositella uudelleenlaadimiseksi, koska väliaine huononee.

Käyttö / sovellukset

Tätä väliainetta käytetään etsimään Salmonella-sukuisia kantoja muun muassa ulosteesta ja maitotuotteista.

Koska kyseessä on melko turmeltumaton ympäristö, on suositeltavaa kylvää runsas ymppäys, jos suoraa näytettä käytetään. Muussa tapauksessa näytteiden esirikastaminen ja rikastaminen olisi tehtävä ennen kylvöä tähän väliaineeseen.

Koska jotkut Salmonella-kannat estävät tai kasvavat vaikeasti, on suositeltavaa, että tätä väliainetta lisätään muihin Salmonellan selektiivisiin agareihin.

Jokaiselle pesäkkeelle, jolla on tyypillinen salmonellaominaisuus, on tehtävä biokemialliset testit lopullista tunnistamista varten.

QA

Kirkkaanvihreän agarväliaineen hyvien suoritusten testaamiseksi ATCC-kantoja voidaan käyttää tarkkailemaan niiden kehitystä siinä.

Laadunvalvontaan yleisimmin käytettyjä kantoja ovat: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12038, Staphylococcus.

Ensimmäisten 3 tulisi antaa vaaleanpunaisia ​​tai läpinäkyviä valkoisia pesäkkeitä punaisella taustalla. Salmonella, jolla on hyvä kehitys, ja Proteus, jolla on vähäinen tai säännöllinen kasvu.

Klebsiellassa ja Escherichiassa odotetaan kelta-vihreitä pesäkkeitä keltaisella taustalla, ja Shigella- ja Staphylococcus -bakteerien tapauksessa ne tulisi estää.

Kuivattu väliaine on säilytettävä huoneenlämpötilassa, kuivassa paikassa, koska väliaine on erittäin hygroskooppinen.

Viitteet

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Brilliant Green Agar. 2009
2. Britannia Laboratory. Kirkkaanvihreä agari. 2015.
3. BD-laboratorio. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, Toimitus Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA