VOGEL-JOHNSON-AGAR: PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2025

Agar Vogel-Johnson on kiinteä alusta selektiivinen ja ero kulttuuri, on erityisesti suunniteltu eristämiseksi Staphylococcus aureus. Tämän väliaineen ovat luoneet Vogel ja Johnson vuonna 1960 modifioidusta telluettiglysiiniagarista, jonka Zebovitz, Evans ja Niven muotoilivat vuonna 1955.

Modifikaatio sisälsi kasvualustassa olevan mannitolin pitoisuuden lisäämistä ja pH-indikaattorin sisällyttämistä. Nykyinen kaava koostuu tripteiinistä, hiivauutteesta, mannitolista, kaliumfosfaatista, litiumkloridista, glysiinistä, fenolipunaisesta, agarista, 1-prosenttisesta kaliumtelliittiliuosta ja vedestä.

Lähde: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

On huomattava, että on olemassa muita väliaineita, kuten Vogel-Johnson-agar, jotka ovat selektiivisiä S. aureuksen eristämiseen, kuten suolainen mannitoliagar ja Baird Parker-agar. Tässä mielessä voitaisiin sanoa, että Vogel-Johnson-agarin perusta on seos suolaisen mannitoliagarin ja Baird Parker-agarin välillä.

Ensimmäisessä S. aureus -pesäkkeet erotetaan fermentoimalla mannitoli ja muuttamalla pH-indikaattori keltaiseksi. Toisaalta, toisella puolella S. aureukselle on ominaista vähentää telluriitti telluuriksi ja muodostaa harmaat mustiksi pesäkkeiksi. Molemmat ominaisuudet havaitaan Vogel-Johnson-agarissa.

Tämä väliaine, kuten vastaavat kollegansa, on käyttökelpoinen Staphylococcus aureus -bakteerin havaitsemiseksi ruoanäytteissä, teollisuustuotteiden terveysvalvonnassa ja kliinisissä näytteissä.

Perusta

Ravinteiden saanti

Vogel-Johnson-elatusaine sisältää tripteiniä ja hiivauutetta; Molemmat aineet tarjoavat pitkäketjuisia aminohappoja, jotka toimivat hiilen ja typen lähteinä, jotka ovat välttämättömiä bakteerien kasvulle. Tässä väliaineessa kasvaa kykenevät bakteerit ottavat ravintoaineita näistä aineista.

Valikoiva voima

Vogel-Johnson-agar kykenee estämään gramnegatiivisten bakteerien ja jopa joidenkin grampositiivisten bakteerien kasvua edistäen koagulaasipositiivisten stafylokokkien kehitystä. Inhiboivat aineet ovat kaliumtelliitti, litiumkloridi ja glysiini.

Erotusvoima

Aineet, jotka tekevät tämän differentiaalisen väliaineen, ovat mannitoli ja kaliumtelliitti. Mannitoli on hiilihydraatti, ja kun se fermentoidaan, muodostuu happoja, jotka tekevät väliaineesta muuttuvan punaisesta keltaiseksi, mikä tapahtuu punaisen fenolin pH-indikaattorin läsnäolon ansiosta.

Taas väritön telluriitti, kun se pelkistetään vapaaksi metalliseksi telluuriumiksi, saa tummanharmaaksi mustan.

Staphylococcus aureus fermentoi mannitolia ja pelkistää telluriitin telluriumiksi. Tästä syystä tyypilliset S. aureuksen pesäkkeet tässä väliaineessa ovat harmaita tai mustia, joita ympäröi keltainen väliaine.

Bakteerit, jotka kasvavat tässä väliaineessa eivätkä vähentä telluuria tai fermentoivaa mannitolia, muodostavat läpinäkyviä pesäkkeitä, joita ympäröi punainen väliaine, jopa intensiivisempiä kuin alkuperäinen väri, johtuen väliaineen alkalisoitumisesta peptoneilla.

Toisaalta bakteerit, jotka vähentävät telluriittia, mutta eivät fermentoi mannitolia, kasvavat harmaina tai mustina pesäkkeinä, joita ympäröi syvä punainen väliaine.

Jos väliaine valmistettaisiin lisäämättä kaliumtellurtaattia, S. aureus -pesäkkeet kehittyisivät keltaisina pesäkkeinä, joita ympäröi keltainen väliaine, kuten suolaisessa mannitoliagarissa.

Osmoottinen tasapaino ja kiinteyttävä aine

Dikaliumfosfaatti ylläpitää väliaineen osmoottista tasapainoa ja säätää pH: n neutraaliksi. 7.2. Vaikka agar antaa kiinteän konsistenssin elatusaineelle.

Valmistautuminen

1% (paino / tilavuus) kaliumtellieriittiliuos

Tätä liuosta ei sisällytetä dehydratoituun väliaineeseen, koska sitä ei voida steriloida autoklaavissa. Tästä syystä se valmistetaan erikseen ja lisätään jo steriloituun väliaineeseen.

Jotkut kaupalliset talot myyvät käyttövalmiina 1-prosenttista kaliumtelliittiratkaisua. Jos haluat valmistautua laboratoriossa, toimi seuraavasti:

Punnitaan 1,0 g kaliumtelliittiä ja mitataan 100 ml tislattua vettä. Liuota kaliumtelliitti osaan vettä ja lisää sitten vesimäärä 100 ml: ksi. Steriloi liuos suodatusmenetelmällä.

Vogel-Johnson Agar Base Medium

Punnitaan 60 g dehydratoitua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Seos kuumennetaan kiehuvaksi täydellisen liukenemisen edistämiseksi. Liuotusprosessin aikana väliainetta sekoitetaan usein.

Steriloidaan autoklaavissa 15 naulan paineessa ja 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Poista autoklaavista ja anna sen levätä, kunnes väliaine saavuttaa lämpötilan, joka on noin 45-50 ° C. Lisää 20 ml aiemmin valmistettua 1-prosenttista kaliumtelliittiliuosta.

Sekoita ja kaada steriileihin Petri-maljoihin. Annetaan jähmettyä ja tilata käännettynä levynpidikkeisiin myöhempää säilyttämistä varten jääkaapissa käyttöönottoon asti.

Valmistetun väliaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,2 ± 0,2.

Ennen kuin kylvät näytettä, odota, että levy saavuttaa huoneenlämpötilan.

Valmistetun väliaineen väri on punainen.

Käyttää

Vaikka sitä voidaan käyttää S. aureuksen eristämiseen minkä tahansa tyyppisissä näytteissä, sitä käytetään pääasiassa farmaseuttisten tuotteiden, kosmetiikan ja elintarvikkeiden mikrobiologisiin analyyseihin.

Inokulaatin on suositeltavaa olla tiheää. Kylvö voidaan suorittaa pistämällä platinakahvalla tai pinnalla Drigalski-lastalla.

Levyjä inkuboidaan 35 - 37 ° C: ssa 24 - 48 tunnin aerobioosina.

QA

Seuraavia kontrollikantoja voidaan käyttää laadunvalvonnan suorittamiseen Vogel-Johnson-elatusaineella:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 tai Proteus mirabilis ATCC 43071.

Odotettu tulos on seuraava: S. aureus -kantojen kasvu tyydyttävä mustalla pesäkkeellä, jota ympäröi keltainen väliaine. S. epidermidikselle säännöllinen kasvu, jossa on läpikuultavia tai mustia pesäkkeitä, joita ympäröi punainen alusta.

Samoin odotetaan kokonaisinhibitiota E. colille ja Proteus mirabilis: n osittaista tai täydellistä inhibointia; jos se kasvaa, se tekee niin säästeliäästi ja pesäkkeet ovat mustia, joita ympäröi punainen väri.

Viitteet

1. BD Laboratories. VJ (Vogel ja Johnson Agar). 2006.Saatavilla osoitteessa: bd.com
2. Britannia Laboratories. Vogel- Johnson Agar. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Kaliumtelliitti. 2015.Saatavilla osoitteessa: britania.com
4. Himedialaboratorio. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Saatavissa osoitteessa: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel- Johnson Agar -pohja. Merckin mikrobiologian käsikirja. 12. painos, s. 502-503. Saatavana osoitteessa: Käyttäjät / Joukkue / Lataukset
6. Wikipédian avustajat, "Ágar Vogel Johnson", Wikipedia ilmainen tietosanakirja, saatavana osoitteessa: wikipedia.org.
7. Venezuelan standardi Covenin 1292-89. (1989). Elintarvikkeita. Staphylococcus aureuksen eristäminen ja laskeminen. Saatavana osoitteessa: sencamer.gob.ve