XLD-AGAR: PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2026

XLD-agar tai ksyloosi lysiini desoksikolaattia agaralustalla, on selektiivinen ja ero kiinteän kulttuuri eristämiseksi suolistopatogeenien. Taylor suunnitteli XL-agar (ksyloosi, lysiini) -kaavan Shigella-suvun eristyksen parantamiseksi.

Hän havaitsi, että tätä sukua estettiin useimmissa elatusaineissa, jotka oli tarkoitettu enteropatogeenien eristämiseen. Seuraavaksi lisättiin natriumdeoksikolaattia, natriumtiosulfaattia ja ferri- ammoniumsitraattia sen selektiivisyyden lisäämiseksi. Tämä kaava on osoittautunut hyödylliseksi sekä Shigellan että Salmonellan eristämisessä.

Shigella-, salmonella- ja koliformipesäkkeiden erot XLD-agarilla. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Lähteet: A. Kirjoittaja: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, tohtori; Audra Marsh, kohteliaisuus: Kansanterveyskuvakirjasto B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Lähettäjä: CDC / Dr. JJ-viljelijä, kohteliaisuus: Kansanterveyskuvakirjasto

XLD-agar koostuu hiivauutteesta, natriumdeoksikolaatista, ksyloosista, lysiinistä, laktoosista, sakkaroosista, natriumtiosulfaatista, ferri-ammoniumsitraatista, natriumkloridista, fenolipunaisesta ja agarista. Useimmissa bakteriologialaboratorioissa duo XLD-agaria ja SS-agaria käytetään Shigella- ja Salmonella-fekaalisten näytteiden tutkimiseen.

Muut laboratoriot mieluummin CHROMagar Salmonellan ja XLD-agarin yhdistelmää muiden käytettävissä olevien vaihtoehtojen joukossa. Nämä duot voidaan valmistaa kaksinkertaisissa Petri-maljoissa. Yhdelle puolelle ne sijoittavat XLD-agar ja toiselle puolelle toisen valitun väliaineen.

Perusta

-Rakkaava voima

XLD-agarissa on hiivauute, joka toimii ravintoaineiden lähteenä tässä agarissa kasvaville mikro-organismeille. Lisäksi hiilihydraattien (ksyloosi, sakkaroosi ja laktoosi) läsnäolo tarjoaa energiaa bakteereille, jotka voivat käydä niitä.

- Väliaineen selektiivisyys

Inhiboivana aineena se esittää natriumdeoksikolaattia; Tämä estää gram-positiivisten bakteerien kasvua, mikä antaa elatusaineelle selektiivisen luonteen.

-Differenssivoima

Tyypillisiä Shigella-pesäkkeitä

Kuten jo mainittiin, XLD-agar sisältää ksyloosia; Tätä hiilihydraattia käyvät kaikki bakteerit, jotka kasvavat tässä väliaineessa, Shigella-sukua lukuun ottamatta.

Tämä on yksi ominaisuuksista, jotka antavat sille erilaisuuden, koska Shigella-pesäkkeet erotetaan muista kehittämällä punaisia ​​pesäkkeitä, kun taas muut bakteerit tuottavat keltaisia ​​pesäkkeitä.

Tyypilliset salmonellan pesäkkeet

Salmonella-suvut myös fermentoivat ksyloosia muodostaen aluksi keltaisia ​​pesäkkeitä. Hiilihydraattiksyloosin ehtymisen jälkeen se kuitenkin hyökkää lysiiniä entsyyminsä lysiinidekarboksylaasin suhteen. Lysiinin dekarboksylointi tuottaa emäksiä, jotka muuttavat pesäkkeen ja ympäröivän väliaineen värin alkuperäiseen punaiseen.

Tätä käyttäytymistä suorittaa vain Salmonella, koska koliformit, jotka dekarboksyloivat lysiiniä, eivät pysty emästämään elatusainetta. Tämä johtuu siitä, että kolibakteerit käyvät myös läsnä olevaa laktoosia ja sakkaroosia; siksi happojen tuotanto on erittäin korkeaa, jolloin näihin bakteereihin jää keltainen pesäke.

On huomattava, että Salmonella-suku ei käy fermentoida sakkaroosia tai laktoosia.

H: n tuotanto

XLD-agar mahdollistaa myös havaita H ₂ S- tuottavat Salmonella-lajit; Tätä varten se riippuu rikkilähteestä, jota edustaa natriumtiosulfaatti, ja reaktionkehittäjä, joka on ferri-ammoniumsitraatti.

Jälkimmäinen reagoi H ₂ S (väritön kaasu) ja muodostaa näkyvän liukenematon musta sakka rautasulfaattia. Tässä mielessä salmonellapesäkkeiden ominaisuudet ovat punaisia ​​mustan keskellä.

On huomattava, että H ₂ S muodostumisen reaktion tapahtua, alkalisessa pH: ssa tarvitaan. Siksi muita Enterobacteriaceae, jotka muodostavat H ₂ S ei voi tai tehdä niin huonosti tässä ympäristössä, koska korkea happamuus on tuotettu fermentoimalla hiilihydraatteja esillä inhiboi tai estää reaktio.

-Natriumkloridi, agar ja fenolipunainen

Lopuksi natriumkloridi ylläpitää osmoottista tasapainoa; agar on kiinteyttävä aine ja fenolipunainen havaitsee pH: n muutokset kääntämällä pesäkkeiden ja väliaineen väriä.

Valmistautuminen

Punnitaan 55 g dehydratoitua XLD-alustaa ja liuotetaan 1 litraan vettä. Kuumenna ja sekoita seosta, kunnes se saavuttaa kiehumispisteen. Älä ylikuumenna, koska lämpö vaurioittaa väliainetta ja muodostaa sakan, joka muuttaa tyypillisten pesäkkeiden morfologiaa.

Tätä alustaa ei saa autoklaavoida. Liukentuessaan se on johdettava vesihauteeseen 50 ° C: seen. Jäähdytettäessä se tulisi tarjoilla suoraan steriileille Petri-maljoille. Ne voidaan kaataa yksittäisiin tai kaksoislevyihin. Ne jätetään kiinteytymään ja säilytetään jääkaapissa käyttöönottoon saakka.

Temper ennen käyttöä. Koska se on ei-steriili väliaine, on suositeltavaa valmistaa se lähellä käyttöpäivää.

Elatusaineen lopullisen pH: n tulisi olla 7,4 ± 0,2. Valmistetun väliaineen väri on oranssi-punainen, läpikuultava, ilman sakkaa.

Jos sinulla on ksyloosilysiini (XL) -amiagaria, voit lisätä natriumdeoksikolaattia, natriumtiosulfaattia ja rautaammoniumsitraattia. Tällä tavalla saadaan XLD-agar-kaava.

Sovellukset

XLD-agaria käytetään enteropatogeenien, pääasiassa Shigella-suvun ja toissijaisesti suvun Salmonella, talteenottamiseen. Se on hyödyllinen uloste-, vesi- ja ruokanäytteiden arvioinnissa.

Näytetyypit

Ulosteet

Ulosteenäytteet voidaan kylvää suoraan XLD-agariin, jolloin materiaali jakautuu hyvin eristettyjen pesäkkeiden saamiseksi.

Salmonellan talteenoton parantamiseksi XLD-agar voidaan raida Salmonellan rikastusalustat.

ruoka

Ruoassa voidaan käyttää Salmonellan ja Shigellan rikastusliemiä. Salmonellassa voit käyttää muun muassa seleniitti kystiiniliemettä, kirkkaanvihreä tetrationaattilientä.

Shigella-tapauksessa se voidaan rikastaa Shigella-liemellä 0,5 ui / ml novobiosiinilla, inkuboituna 42 ° ± 1 ° C: ssa 16 - 20 tuntia.

vesi

Vesianalyysissä suositellaan mm. Kalvosuodatuksen tekniikkaa ja XLD-agarin käyttöä.

Istutus - ja tunnistamisolosuhteet

Siementettyä väliainetta inkuboidaan aerobisesti 35 ° C: ssa 24 - 48 tuntia.

Kunkin suvun tyypilliset pesäkkeet havaitaan, epäilyttäville pesäkkeille tulisi suorittaa biokemialliset testit niiden tunnistamiseksi.

QA

Elatusaineen laadunvalvonnan arvioimiseksi voidaan käyttää seuraavia bakteerikantoja: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 4 930, Proteus miCi30302, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Salmonella-suvulle on tunnusomaista, että tässä väliaineessa on punaisia ​​pesäkkeitä, joissa on musta keskusta, tai täysin mustia pesäkkeitä. Shigella-suvussa pesäkkeiden on oltava punaisia, eli väliaineen väriä.

Escherichia colin tapauksessa sen odotetaan estävän kokonaan tai osittain; jos se kasvaa, pesäkkeet ovat keltaisia. Proteus mirabilikselle odotetaan heikkoa kasvua vaaleanpunaisilla pesäkkeillä, joissa on musta keskusta tai ilman. Lopulta Klebsiella-suvut kasvavat keltaisina pesäkkeinä.

Lopulliset ajatukset

XLD-agaria käytetään laajasti bakteriologialaboratorioissa sen korkean tehokkuuden saavuttamiseksi Shigella-talteenottoon, ja sillä on myös hyvä Salmonella-suvun palautuminen.

Rall ym. (2005) työssään "Kolmen rikastusliemin ja viiden kiinteän väliaineen arviointi siipikarjan salmonellan havaitsemiseksi" osoittivat, että kolmesta testatusta klassisesta kasvualustasta (kirkkaanvihreä agar, SS-agar ja XLD-agar), XLD-agarilla oli paras toipumisaste.

Saantoprosentit olivat seuraavat: 13,8% kirkkaanvihreällä agarilla, 27,6% SS: llä ja 34,5% XLD: llä. Vain kromogeeniset väliaineet ylittivät Rambach-agarin, jonka saanto oli 48% ja CHROMagarin (79,3%).

Viitteet

1. Ruoan kautta leviävät sairaudet. Shigellosis. Saatavana osoitteessa: anmat.gov.ar
2. "XLD-agar." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 9. helmikuuta 2019, 11:46 UTC. 10. huhtikuuta 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL-laboratoriot. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplaatti). 2013. Saatavana: bd.com
4. Lab. Neogen. XLD-agar. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen
5. Francisco Soria Melguizon laboratorio. XLD-agar. Saatavana osoitteessa:
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Kolmen rikastusliemin ja viiden pinnoiteväliaineen arviointi siipikarjan salmonellan havaitsemiseksi. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147 - 150. Saatavana osoitteesta: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.