PEPTONIVESI: PERUSTEET, VALMISTELU JA KÄYTÖT - BIOLOGIA - 2026

Peptoni vesi on nestemäistä rikastuksen väliaine, ei-selektiivisiä, jota käytetään pääasiassa laimennusaineena elintarvikkeiden näytteitä tai muita materiaaleja. Tämä väliaine on kemiallisesti hyvin yksinkertainen, se sisältää lihapeptonia, natriumkloridia ja vettä.

Sillä on tietty ravintoarvo, joka mahdollistaa näytteen rikastamisen. Jos on väärinkäytettyjä bakteereja, tällä väliaineella on valta korjata elinkelpoisuus. Se on erityisen hyödyllinen Enterobacteriaceae-perheeseen kuuluvien bakteerien hyödyntämisessä.

Peptonivesi pullossa. Lähde: MSc. Marielsa gil

Salmonellien talteenoton yhteydessä suositellaan puskuroidun peptoniveden variantin käyttöä; Tämä toimii näytteen esirikastusväliaineena, tässä tapauksessa se sisältää muita alkuaineita, kuten dinatriumfosfaattia ja dikaliumfosfaattia.

Normaalisti peptonivettä valmistetaan neutraalissa pH: ssa, mutta on myös muita variantteja, joissa on välttämätöntä, että pH on 8,5 ± 0,2 (emäksinen), koska eristettävät bakteerit ovat alkalifilisiä, kuten Vibrio kolera.

Lisäksi tätä väliainetta voidaan käyttää perus- väliaineena hiilihydraattifermentaatiokokeissa.

Perusta

Peptonit tarjoavat bakteerien kasvuun tarvittavia ravintoaineita, erityisesti typpeä ja lyhytketjuisia aminohappoja, kun taas natriumkloridi ylläpitää osmoottista tasapainoa.

Lisäksi väliaine mahdollistaa teollisuusprosessien vaurioittamien bakteerisolujen hajottamisen, homogenisoinnin ja korjaamisen.

Laimennusaineena se on ihanteellinen, korvaa tehokkaasti fysiologisen liuoksen (SSF) tai fosfaattipuskuriliuoksen (PBS).

Bakteerien kasvu ilmenee tarkkailemalla sen sameutta.

Valmistautuminen

Kotitekoinen valmistus (ei kaupallinen)

Punnitaan 1 g peptonia ja 8,5 g natriumkloridia, liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. PH tulisi säätää arvoon 7,0. Tätä varten voidaan käyttää 1 N natriumkloridia.

Valmistus kaupallisella väliaineella

Punnitaan 15 g dehydratoitua väliainetta ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Homogenoi seos. Seosta keitetään tarvittaessa 1 minuutin ajan täydellisen liukenemisen helpottamiseksi. Tarjoa tarvittaessa 100 ml: n pulloissa tai 10 ml: n putkissa. Autoklaavi 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

Jäähdytä ja käytä tai säilytä jääkaapissa. Elatusaineen lopullinen pH on 7,2 ± 0,2.

Kuivatun väliaineen väri on vaaleanbeige ja valmistettu väliaine on vaalean keltaista.

Valmistelut käymiskokeisiin

Edelliseen valmisteeseen - ennen sterilointia - hiilihydraatti on lisättävä loppukonsentraatioon 1% plus Andrade-indikaattori (hapan fuksiini) tai fenolipunainen (0,018 g / l). Putket olisi varustettava Durham-kellolla kaasun muodostumisen tarkkailemiseksi.

Muut peptoniveden variantit

Puskuroitu tai puskuroitu peptonivesi

Se sisältää kaseiinin, natriumkloridin, dihydrogeeni-kaliumfosfaatin ja natriumvetyfosfaattidodekahydraatin entsymaattista hydrolysaattia. Lopullinen pH on 7,0 ± 0,2.

Valmistamista varten punnitaan 20 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan tislattua vettä. Anna sen levätä noin 5 minuuttia. Kuumenna 1 minuutin ajan, kunnes se on täysin liuennut.

Kaada sopiviin purkkeihin tarpeen mukaan. Steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan.

-Alkaliinipeptonivettä

Punnitaan 25 g kuivattua väliainetta ja liuotetaan 1 litraan vettä. Suorita yllä kuvatulla tavalla. PH vaihtelee välillä 8,3 - 8,7.

Käyttää

Siirros tehdään asettamalla näyte suoraan.

Sitä käytetään näytteiden laimentamiseen, varsinkin kun epäillään, että vaurioituneita bakteereja voi olla. Yleensä laimennukset ovat 1:10 ja 1: 100.

Inkuboi 24 tuntia aerobioosissa 35-37 ° C: ssa.

Ulosteenäytteet

Salmonellan ulosteenäytteissä suositellaan puskuroidun tai puskuroidun veden käyttöä esirikastusväliaineena.

Toimi seuraavasti:

Jos uloste muodostuu, ota 1 g näytettä. Jos ne ovat nestemäisiä, ota 1 ml ulostetta ja suspendoi putkeen 10 ml: lla puskuroitua peptonivettä. Tyhjennä peräsuolen pyyhkäisynäytteet materiaalista putkeen puskuroidulla peptonivedellä.

Sekoita ja homogenoi näyte kaikissa tapauksissa erittäin hyvin.

Inkuboi 37 ° C: ssa 18 - 24 tuntia. Seuraavaksi aliviljelmä rikastusliemissä, kuten seleniitti kystiiniliemessä tai tetrationaattiliemessä, 37 ° C: ssa vielä 18 - 24 tuntia. Lopuksi viljellään selektiivisissä väliaineissa salmonellaa varten, kuten SS-agar, XLD-agar, Hektoen-agar, mm.

Ruoanäytteet

Peptonivettä käytetään rikastusväliaineena tai yksinkertaisena laimentimena, mutta jos etsitään Salmonella-lajeja, sitä käytetään esirikastusväliaineena, kuten jo on kuvattu.

Ruoassa jatketaan seuraavasti:

Kiinteiden elintarvikkeiden punnitaan 25 g näytettä ja nestemäisten elintarvikkeiden 25 ml näytettä. Sijoita mainittu annos pulloihin, jotka sisältävät 225 ml peptonivettä. Sekoita ja homogenoi näyte.

Jos mikrobikuormituksen epäillään olevan korkea, voidaan sarja- tai desimaalilaimennuksia tehdä pesäkkeitä muodostavien yksiköiden (CFU) laskemisen helpottamiseksi.

Laimennusten lukumäärä riippuu näytteen tyypistä ja analyytikon kokemuksesta.

Jos päinvastoin epäillään, että mikrobikuormitus on erittäin pieni, laimennuksia ei tarvitse suorittaa. Seuraavaksi subkulttuuri selektiivisissä väliaineissa.

Jos kyseessä on merestä peräisin oleva ruoka, kuten äyriäiset, kalat, muun muassa etsiessään Vibrio cholerae -lajia tai muita Vibrio-lajeja, olisi käytettävä peptonivettä, jonka pH on säädetty arvoon 8,5 (alkalinen peptonivesi).

QA

Jokaisesta valmistetusta erästä 1-2 putkea tulisi inkuboida inokuloimatta 24 tunnin ajan aerobioosissa 37 ° C: ssa. Ajan lopussa sameutta tai värin muutosta ei tulisi havaita.

Tunnettuja kontrollikantoja voidaan käyttää myös niiden tehokkuuden arviointiin:

Tätä varten voidaan käyttää seuraavia bakteerikantoja: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Kaikissa tapauksissa odotetaan tyydyttävää mikrobien kehitystä, mikä havaitaan väliaineen sameudella.

rajoitukset

- Kuivattu väliaine on erittäin hygroskooppinen, joten se on pidettävä poissa kosteudesta.

- Väliainetta ei tule käyttää, jos havaitaan minkäänlaista huonontumista.

- Kuivattu kasvualusta tulisi säilyttää lämpötilassa 10 - 35 ° C

- Valmistettu väliaine on pidettävä jäähdytettynä (2–8 ° C).

Viitteet

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B ja Velázquez O. Elintarvikkeiden mikrobiologisen analyysin tekniikat. 2009, 2. painos. Kemian tiedekunta, UNAM. Meksiko. Versio käsikirjojen ja asiakirjojen ylläpitäjälle (AMyD) kemian tiedekunnasta, UNAM 1. Saatavana:
2. Britannia Laboratories. Puskuroitu peptonivesi. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Peptonivettä. Saatavana osoitteessa: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Peptonivettä. 2015.Saatavilla osoitteessa: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Puskuroitu peptonivesi. Saatavana osoitteessa merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Alkalinen peptonivesi. Saatavana osoitteessa: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.