MEDIO MIO: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

MIO väliaine on biokemiallinen koe käyttää apuna tunnistamiseen bakteereita, jotka kuuluvat Enterobacteriaceae-perheen. Se on melko ravitsevaa ja koostuu glukoosista, hiivauutteesta, peptonista, tripteinistä, L-ornitiinihydrokloridista, bromikresolipunaisesta ja agarista.

Sen lyhenteen (MIO) merkitys kuvaa kaikkia parametrejä, jotka voidaan havaita tässä väliaineessa; liikkuvuus, indoli ja ornitiin. Motiliteetti on mikro-organismin kyky liikkua flagellan läsnäolon takia. Jotta tätä ominaisuutta voidaan havaita, elatusaineen konsistenssin on oltava puolikiinteää, joten valmiste sisältää vähemmän agaria.

Tulosten tulkinnan pääpiirteet MIO-välineellä. Lähde: Valmistaja kirjoittanut MSc. Marielsa gil

Indolin tuotanto osoittaa tryptofanaasi-entsyymin läsnäolon, joka vaikuttaa aminohappoon tryptofaaniin, edellyttäen paljastavan reagenssin käyttöä indolin tuotannon tekemiseksi näkyväksi.

Lopuksi, ornitiini määrittää kykeneekö bakteere dekarboksyloimaan aminohapon, ts. Jos sillä on entsyymi orinitiinidekarboksylaasi.

Perusta

Peptoni, hiivauute ja triptein

Nämä elementit edistävät tämän väliaineen ravintovoimaa. Ne toimivat ravinteiden ja välttämättömien aminohappojen lähteenä bakteerien kehityksessä.

Lisäksi triptein on tryptofaanilähde osoittaen tryptofanaasi-entsyymin läsnäoloa, joka hajottaa tryptofaania pelkistävällä deaminaatiolla vapauttaen indolia, pyruvihappoa, ammoniakkia ja energiaa.

Indoli on väritön, joten sen läsnäolo paljastetaan lisäämällä viisi tippaa Ehrlichin tai Kovacsin reagenssia, molemmat p-dimetyyliaminobentsaldehydillä.

Tämän yhdisteen aldehydiryhmä reagoi indolin kanssa muodostaen renkaan muotoisen fuksiapunaisen tuotteen agarin pinnalle.

Kaikkia värijälkiä on pidettävä positiivisena testinä. Todiste tulee lukea heti, koska ajan myötä väri heikkenee.

Lisäksi tämä testi tulisi paljastaa sen jälkeen, kun ornitiinin liikkuvuus- ja dekarboksylointitulokset on todettu.

Tulkinta

Positiivinen testi: fuksipunaisen renkaan muodostuminen lisättäessä tippoja Kovacs-reagenssia.

Negatiivinen testi: ei renkaan muodostumista.

Motility

Bakteerien kyky liikkua on ilmeinen, jos havaitaan sameaa väliainetta tai jos alkuperäisen ymppäyksen ympärillä on paksu kasvulinja, joka laajenee.

Negatiivinen liikkuvuustesti todistetaan tarkkailemalla ohutta kasvulinjaa, ja kaikki sen ympärillä on ilman kasvua.

On tärkeää, että liikkuvuus luetaan ennen indolin paljastamista, koska reagenssin lisäys pilvistää koko väliaineen.

Liikkuvissa, mutta hitaasti kasvavissa bakteereissa on vaikea osoittaa niiden liikkuvuutta tällä väliaineella. Tässä tapauksessa on suositeltavaa käyttää muita testejä tai menetelmiä, kuten keskinkertaista liikkuvuutta tai pudotusta odottavaa menetelmää.

Glukoosi

Glukoosi on käymiskelpoinen hiilihydraatti, joka energian tarjoamisen lisäksi hapettaa ympäristöä ja on välttämätön edellytys aminohapon ornitiinin dekarboksyloitumiselle.

Glukoosin käymisen on aina tapahduttava lähtökohdasta, jonka mukaan kaikki Enterobacteriaceae-perheeseen kuuluvat bakteerit käyvät glukoosia.

L-ornitiini

Siinä tapauksessa, että bakteerit tuottavat ornitiinidekarboksylaasi-entsyymiä, tämä voi toimia, kun väliaine on hapotettu glukoosin käymisellä.

Ornitiinidekarboksylaasi-entsyymi vaikuttaa aminohapon karboksyyliryhmään tuottaen amiiniksi nimeltään putresiini, joka alkaloi alustaa uudelleen.

Testi tulisi lukea 24 tunnin inkubaation jälkeen, koska jos yrität lukea ennen kuin voit tulkita testi väärin negatiivisella.

On syytä muistaa, että ensimmäinen tapahtuva reaktio on glukoosin käyminen, joten väliaine muuttuu keltaiseksi alkuvaiheessa (ensimmäiset 10 - 12 tuntia). Jos ornitiinidekarboksylaatio tapahtuu myöhemmin, väliaine muuttuu violetiksi.

On tärkeätä tulkita ornitiinin dekarboksylointikoe ennen indolin paljastamista, koska Kovacs-reagenssin lisääminen muuttaa väliaineen väriä.

Tulkinta

Negatiivinen testi: väliaine keltaisella tai keltaisella taustalla.

Positiivinen testi: keskipitkä täysin violetti.

PH-ilmaisin

Tässä tapauksessa käytetään bromikresolipunaista; joka vastaa paljastamisesta, kun väliaineen pH-arvo muuttuu. Happamisessa indikaattori muuttuu keltaiseksi ja alkaloitumisen yhteydessä violetiksi.

Siemennys ja tekniikan kehittäminen

MIO-elatusaineen kylvämiseksi käytetään suoraa silmukkaa tai neulaa ja sen mukana kerätään osa tutkittavasta pesäkkeestä.

MIO: n keskelle tehdään syvä reikä suorassa linjassa. Kaksinkertaista puhkaisua ei ole suositeltavaa suorittaa, koska se voi antaa väärän kuvan liikkuvuudesta, jos puhkaisuja ei suoriteta samassa paikassa.

Inkuboidaan 24 - 48 tuntia 37 ° C: ssa aerobioosissa. Katso tuloksia tässä järjestyksessä: liikkuvuus, ornitiinin dekarboksyloituminen ja paljasta lopulta indoli.

On suositeltavaa poistaa aseptisesti 2 ml väliainetta, siirtää se steriiliin putkeen ja suorittaa indolikoe siellä, jotta loppua alkuperäisestä putkesta voidaan inkuboida vielä 24 tunnin ajan indikaation uudelleen paljastamiseksi, jos se on negatiivinen.

Indolin kehittäminen suoritetaan seuraavasti: 3 - 5 tippaa Kovacs-reagenssia lisätään MIO-väliaineeseen ja sekoitetaan voimakkaasti. Havaitaan, näkyykö punaisen fuksian rengas vai ei.

Valmistautuminen

MIO-alusta

Punnitaan 31 g MIO-alustaa ja liuotetaan litraan tislattua vettä.

Kuumenna, kunnes seos kiehuu minuutin ajan, ravistaen usein, kunnes agar on täysin liuennut. Levitä 4 ml väliainetta 13/100-koeputkiin puuvillakorkkeilla.

Steriloidaan autoklaavissa 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Poista autoklaavista ja anna seistä suoraan telineessä siten, että muodostuu puolijähmeä kappale.

Säilytä jääkaapissa 2-8 ° C. Anna sen lämmetä ennen kylvää bakteerikantaa.

Kuivatun väliaineen väri on beige ja valmistetun väliaineen väri on opaalinhohtoinen purppura.

Valmistetun väliaineen lopullinen pH on 6,5 ± 0,2

Elatusaine muuttuu keltaiseksi happamassa pH: ssa ja violetti alkalisessa pH: ssa.

Kovacs-reagenssi (indolitestauskehittäjä)

Tämä reagenssi valmistetaan seuraavasti:

Mitataan 150 ml amyyli-, isoamyyli- tai butyylialkoholia (mikä tahansa kolmesta). Siihen liuotetaan 10 g p-dimetyyliaminobentsaldehydiä. Sen jälkeen lisätään hitaasti 50 ml väkevää suolahappoa.

Valmistettu reagenssi on väritöntä tai vaaleankeltaista. Se tulisi säilyttää meripihkan pullossa ja jääkaapissa. Tummanruskea väri osoittaa sen huonontumisen.

Myös Kovacs-reagenssi voidaan korvata Ehrlich-reagenssilla. Jälkimmäinen, koska se on herkempi, on edullista paljastaa indoli bakteereissa, jotka tuottavat sitä pieninä määrinä, kuten joissakin käymättömissä gram-negatiivisissa sauvoissa ja tietyissä anaerobissa.

Käyttää

Tämä väliaine on testi, joka täydentää joukko biokemiallisia testejä Enterobacteriaceae-perheeseen kuuluvien bakteerien tunnistamiseksi.

Ornitiinidekarboksylaatiotiedot erottavat Shigella sonnei, joka testaa positiivisesti, Shigella boydii, Shigella flexneri ja S. dysenterieae, jotka testaavat negatiivisia.

Se erottaa myös Klebsiella-suvun, joka osoittaa negatiivisen testin, suvusta Enterobacter, jossa suurin osa sen lajeista on positiivisia.

Lähde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.

QA

Joka kerta kun valmistetaan erä MIO-alustaa, voidaan suorittaa kontrollikoe. Tätä varten käytetään tunnettuja tai sertifioituja kantoja väliaineen käyttäytymisen tarkkailemiseksi.

Kannat, joita voidaan käyttää, ovat Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes ja Proteus mirabilis.

Odotetut tulokset ovat E. coli ja M. morganii. Dan M: +, I: + ja O: +.

Klebsiella pneumoniae on kaikki negatiivinen (M: -, I: -, O:-). Proteus mirabilis ja Enterobacter aerogenes antavat M: + I: - ja O: +.

Viitteet

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemialliset testit kliinisesti tärkeiden bakteerien tunnistamiseksi. 3. toim. Toimituksellinen Panamericana. Buenos Aires. Argentiina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Saatavissa osoitteessa: britanialab.com
5. BD Laboratories. BBL-liikkuvuuden indoli-ornitiini (MIO) -väliaine. 2007. Saatavana osoitteessa: bd.com
6. Valtek Laboratories. Keskimääräinen MIO-liikkuvuus, indoli, ornitiini. 2010.Saatavilla osoitteessa: andinamedica.com