MEDIUM SIM: PERUSTA, VALMISTELU JA KÄYTTÖ - BIOLOGIA - 2026

SIM-väliaine on puolikiinteä ja ero agar, jotka on erityisesti suunniteltu auttaa tunnistamaan joidenkin bakteerien, erityisesti Enterobacteriaceae. Se koostuu tripteinistä, peptonista, rautasulfaatista, ammoniumsulfaatista, natriumtiosulfaatista ja agarista.

Tämä väliaine mahdollistaa suorittamisen kolme tärkeää testit: tuotannon rikkivedyn (H ₂ S), muodostumista indolia ja liikkuvuuden, siten lyhenne SIM. Suuren hyödyllisyytensä vuoksi sitä ei voida poissa bakteriologialaboratoriosta.

A. Kaupallinen SIM-väliaine B. SIM H2S (-), indoli (-) ja liikkuvuus (+) -testi ja SIM H2S (+), indoli (-), liikkuvuus (+) -testi. Lähde: A. Kuvan kirjoittanut tekijä MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Toisin kuin muut väliaineet, sen on oltava puolikiinteää, jotta joidenkin bakteerien liikkumiskapasiteetti voidaan havaita. Tässä mielessä tämä testi toimii erittäin hyvin enterobakteerien kanssa, mutta ei käymättömissä gramnegatiivisissa sauvoissa, joissa muut menetelmät ovat edullisia, kuten roikkuvat pudotukset.

SIM-väliaine mahdollistaa erottamisen tietyistä spesifisistä ominaisuuksista, jotka karakterisoivat joitain bakteereja suhteessa toisiin. Esimerkiksi Escherichia coli erottuu olemalla H ₂ S (-), Indole (+) ja motiliteetin (+), kun taas Proteus mirabilis on H ₂ S (+), indoli (-), liikkuvuuteen (+).

Perusta

Se on elatusaine, jota pidetään differentiaalisena, koska sen käyttö erottaa mikro-organismit, jotka kykenevät tuottamaan rikkivetyä, niistä, jotka eivät; se korostaa myös niitä, jotka muodostavat indolia tryptofaanista, sellaisista, jotka eivät tee, ja lopuksi erottaa liikkuvat bakteerit liikkumattomista.

Virtalähde

Kuten kaikessa elatusaineessa, siinä on elementtejä, jotka toimittavat tarvittavat ravintoaineet, jotta vaarattomat mikro-organismit voivat kehittyä. Näitä elementtejä edustavat peptonit ja triptein.

Mikro-organismin kehitys elatusaineessa on välttämätöntä, jotta voidaan havaita niiden ominaisuuksien esiintyminen tai puuttuminen, joita tämä väliaine arvioi.

Rikkivetytuotanto

Kirjain S lyhenne SIM viittaa tuotannon rikkivedyn (H ₂ S). Bakteerit, jotka pystyvät muodostamaan rikkivetyä, ottavat rikin natriumtiosulfaatista.

Kun H ₂ S -colourless kaasu- on muodostettu, se reagoi raudan suolaa läsnä väliaineessa, muodostaen rauta sulfidi, selvästi näkyvissä (musta sakka). Bakteerit, jotka eivät ole H ₂ S, jättää väliaine alkuperäisen värin (beige).

Musta saostuma voi estää liikkuvuuden tulkintaa. Kuitenkin useimmat H ₂ S- tuottavat Enterobacteriaceae tiedetään olevan positiivisesti liikkuvia, kuten Salmonella, Proteus, ja Citrobacter. Lisäksi melkein koko väliainetta peittävä musta sakka viittaa positiiviseen liikkuvuuteen.

Indolien muodostuminen

Lyhenteen SIM toinen kirjain on "I", joka edustaa indolin muodostumista.

Tässä mielessä triptein täyttää ravintoaineen lisäksi myös toisen perustavanlaatuisen tehtävän. Tämä peptoni sisältää runsaasti aminohappoa, jota kutsutaan tryptofaaniksi, joten se voi osoittaa bakteereja, jotka tuottavat tryptofanaasia.

Tämä entsyymi on vastuussa aminohapon tryptofaanin pilkkomisesta, jolloin muodostuu indolia (väritöntä ainetta), pyruvihappoa ja ammoniumia.

Siksi tämän reaktion osoittamiseksi on tarpeen lisätä paljastava aine (Ehrlichin reagenssi tai Kovacin reagenssi). Joko reagoi indolin kanssa muodostaen punaisen fuksian renkaan muotoisen aineen agarin pinnalle. Jos fuksiarengas ilmestyy, indolikoe tulkitaan positiiviseksi.

Bakteerit, joissa ei ole tätä entsyymiä, eivät muodosta rengasta, ja se tulkitaan negatiiviseksi indolitestiksi.

On tärkeätä huomata, että indolikokeen tulisi tulkita viimeiseksi, koska kun reagenssi on lisätty, väliaine muuttuu sameaksi, mikä tekee liikkuvuuden visualisoinnin vaikeaksi.

Motility

Lopuksi sanan SIM kirjain "M" tarkoittaa liikkuvuutta. Liikkuvuuden arvioimiseksi tämä väliaine on strategisesti puolikiinteä, koska tämä ominaisuus on välttämätön, jotta voidaan tarkkailla, tapahtuuko bakteerien liikettä vai ei. Bakteerit, joissa on flagellaa, antavat tämän positiivisen testin.

Positiivinen testi ilmenee, kun sameus havaitaan sekä alkuperäisessä siirrossa että sen ympäristössä. Ei-motiliset bakteerit kehittyvät vain alkuperäisen siirroksen tiellä.

Valmistautuminen

Medium SIM

Punnitaan 30 g dehydratoitua väliainetta ja liuotetaan litraan tislattua vettä. Seoksen annetaan seistä 5 minuuttia ja sitten kuumennetaan kiehuvaksi sekoittaen usein, kunnes se on täysin liuennut.

Levitä seos koeputkiin puuvillakorkkeilla ja autoklaavi 121 ° C: ssa 15 minuutin ajan. Poista putkiteline autoklaavista ja anna sen jähmettyä pystysuorassa asennossa, niin että väliaine on lohkon muotoinen.

Suojaamiseksi sitä pidetään jääkaapissa käyttöönottoon asti. Valmistetun väliaineen lopullisen pH: n on oltava 7,3 ± 0,2.

Väliaineen inokuloinnin aikana sen on oltava huoneenlämpöinen. Keskimmäinen väri on beige.

Kovacin reagenssi

Mittaa 150 ml amyyli-, isoamyyli- tai butyylialkoholia. (Käytä yhtä kolmesta mainitusta).

Liuota 10 g p-dimetyyliaminobentsaldehydiä. Lisää sitten hitaasti 50 ml väkevää suolahappoa.

Käyttövalmis reagenssi on väritöntä tai vaaleankeltaista. Se on pidettävä meripihkan pullossa ja säilytettävä jääkaapissa. Älä käytä, jos se muuttuu tummanruskeaksi; joka osoittaa, että se on vaurioitunut. Tämä reagenssi on edullinen, kun kyse on enterobakteereista.

Erlichin reagenssi

Punnitaan 2 g p-dimetyyliaminobentsaldehydiä ja liuotetaan 190 ml: aan absoluuttista etyylialkoholia ja sekoitetaan hitaasti 40 ml: n kanssa väkevää suolahappoa. Varastoi samalla tavalla Kovacin reagenssia. Ehrlichin reagenssia käytetään eniten käymättömiin ja anaerobisiin bakteereihin.

Sovellukset

SIM-väliainetta käytetään erittäin hyvin bakteriologialaboratorioissa. Sen etuna on, että samassa putkessa voidaan havaita kolme olennaista ominaisuutta enterobakteerien tunnistamisessa.

kylvetty

Oikea tapa kylvätä tämä väliaine on neula, jonka avulla osa tutkittavasta puhdasta pesäkettä otetaan ja asetetaan pystysuoraan kasvualustan keskelle. Yksi kertaus tulee suorittaa. Lävistys ei saa päästä putken pohjaan, oikea asia on peittää vain kaksi kolmasosaa syvyydestä.

Siirron toistamista ei suositella, koska tämä voi johtaa positiivisen liikkuvuuden virheellisiin tulkintoihin. Inokuloitua väliainetta inkuboidaan aerobisesti 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan.

Kun aika on päättynyt, se havaitaan vai ei ollut tuotantoa H ₂ S: n ja liikkuvuuteen luetaan. Lopuksi indoli paljastetaan lisäämällä 3 - 4 tippaa Ehrlichin tai Kovacin reagenssia, sekoitetaan varovasti ja tulkitaan.

Lähde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.

QA

Steriiliyden kontrollina yhtä tai kahta putkea inkuboidaan inokuloimatta uunissa 37 ° C: ssa 24 tunnin ajan. On odotettavissa, että tämän ajan kuluttua ei ole kasvua tai värinmuutosta.

Laadunvalvonnana voidaan käyttää tunnettuja sertifioituja kantoja, kuten: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Odotetut tulokset ovat: Escherichia coli H ₂ S negatiivinen, indoli ja positiivinen liikkuvuus, Enterobacter aerogenes vain positiivinen motiliteettia, Salmonella typhimurium H ₂ S- ja positiivinen liikkuvuus, negatiivinen indoli. Proteus vulgaris ovat kaikki positiivisia, kun taas Klebsiella pneumoniae ja Shigella ovat kaikki negatiivisia.

rajoitukset

- Jotkut Morganella morganii -kannat voivat muun muassa tuottaa ruskehtavaa pigmenttiä tässä väliaineessa melaniinin tuotannon takia. Tätä ei pidä sekoittaa rautasulfidisaostumiseen. Kokematon ammattilaiset tämä tilanne voi tuottaa vääriä positiivisia tulkinnassa H ₂ S -testi.

-Tiukat aerobiset bakteerit kasvavat vain putken pinnalla, mikä tekee liikkuvuuden tulkinnan vaikeaksi.

Viitteet

1. BD Laboratories. BBL SIM Medium. 2008. Saatavana osoitteessa: bd.com
2. Neogen Laboratories. SIM Medium. Saatavana osoitteessa: elintarviketurvallisuus
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009.Saatavilla osoitteessa:
4. Brizuela-Lab-laboratorio. Medium SIM. Saatavana osoitteessa:.brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Medium SIM. 2015.Saatavilla osoitteessa: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. 5. toim. Toimituksellinen Panamericana SA Argentina.