VERIAGAR: PERUSTEET, KÄYTÖT JA VALMISTELU - BIOLOGIA - 2025

Veri agar on kiinteän elatusaineen rikastettu ero mutta epäselektiivisen. Sitä käytetään monenlaisten mikro-organismien talteenottoon ja kasvuun kliinisistä näytteistä tai alaviljelmistä.

Klassinen veriagar tulisi sisällyttää useimpien laboratoriossa vastaanotettujen kliinisten näytteiden siementamiseen. lukuun ottamatta ulosteenäytteitä, joissa siitä ei ole hyötyä, ellei sitä ole valmistettu tietyin muutoksin.

Veriagarlevy

Tämä viljelyelatusaine koostuu periaatteessa rikastetusta emäksisestä agarista ja 5% verestä. Agariemäs voi vaihdella tarpeiden mukaan, mutta se koostuu pääasiassa peptoneista, aminohapoista, vitamiineista, lihauutteesta, natriumkloridista, agarista.

Veren suhteen on yleensä oltava kosketuksissa vivariumiin veren saamiseksi eläimiltä, ​​kuten lampailta, kanin tai hevoselta. Tämä ei kuitenkaan ole aina mahdollista ja joskus käytetään ihmisen verta.

Veriagar-elatusainetta voidaan valmistaa laboratoriossa tai ostaa valmiina erikoistuneilta yrityksiltä. Tämän elatusaineen valmistaminen on yksi herkäimmistä, mikä tahansa sen valmistamisen huolimattomuus johtaa saastuneeseen erään.

Siksi on ryhdyttävä kaikkiin mahdollisiin varotoimenpiteisiin, ja lopussa laadunvalvonta on suoritettava inkuboimalla 37 ° C: ssa 1 levy jokaista valmistettua 100: aa kohti.

Perusta

Staphylococcus aureus viljeltiin veriagarissa. Nathanin lukeminen Flickrissä Nathan R. Twitterissä, Wikimedia Commonsin kautta On jo mainittu, että veriagarilla on rikastettu, differentiaalinen ja ei-selektiivinen väliaine. Kunkin näiden ominaisuuksien perusta selitetään alla.

Veriagar on rikastettu väliaine, koska se sisältää 5-10% verta agaripohjassa päälisäaineena. Molemmat yhdisteet sisältävät paljon ravinteita ja tämä ominaisuus antaa useimmille viljeltäville bakteereille kasvaa siinä.

Tämä kasvu tapahtuu ilman rajoituksia; tästä syystä se ei ole valikoiva. Kuitenkin, jos tähän väliaineeseen lisätään yhdisteitä, jotka estävät joidenkin mikro-organismien kasvua ja edistävät toisten kasvua, siitä tulee selektiivinen. Näin on, jos lisätään tietyn tyyppisiä antibiootteja tai sienilääkkeitä.

Samoin veriagar on differentiaalinen väliaine, koska sen avulla voimme erottaa 3 bakteerityyppiä: beeta-hemolyyttiset, alfa-hemolyyttiset ja gamma-hemolyyttiset bakteerit.

Beeta-hemolyyttiset aineet kykenevät pilkkomaan tai hajottamaan punasolut kokonaan muodostaen selkeän halogeenin pesäkkeiden ympärille, siksi ne tuottavat ß- tai ß-hemolyysin ja mikro-organismeja kutsutaan ß-hemolyyttisiksi.

Esimerkkejä ß-hemolyyttisistä bakteereista ovat Streptococcus pyogenes ja Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolyytejä ovat ne, jotka suorittavat osittaisen hemolyysin, jolloin hemoglobiini hapetetaan methemoglobiiniksi muodostaen vihertävän värin pesäkkeiden ympärille. Tämä ilmiö tunnetaan α- tai α-hemolyysinä ja bakteerit luokitellaan α-hemolyyttisiksi.

Esimerkkejä a-hemolyyttisistä bakteereista ovat Streptococcus pneumoniae ja viridans-ryhmän Streptococcus.

Lopuksi on niin kutsuttuja gamma-hemolyyttisiä tai ei-hemolyyttisiä bakteereja. Ne kasvavat agarilla aiheuttamatta muutoksia siinä, vaikutus, joka tunnetaan nimellä y-hemolyysi, ja mikro-organismit ovat y-hemolyyttisiä.

Esimerkki y-hemolyyttisistä bakteereista: jotkut ryhmän D Streptococcus-kannot (Streptococcus bovis ja Enterococcus faecalis).

Sovellukset

Veriagar-viljelyväliaine on yksi yleisimmin käytetyistä mikrobiologian laboratorioista.

Mikro-organismeihin, jotka kykenevät kasvamaan veriagar-elatusaineessa, kuuluvat: tiukka aerobinen, fakultatiivinen, mikroaerofiilinen, anaerobinen, gram-positiivinen tai gram-negatiivinen bakteereja, nopeasti kasvava tai hitaasti kasvava bakteeri.

Joitakin ravitsemuksellisia tai vaativia bakteereja kasvaa, samoin kuin sieniä ja hiivoja. Samoin se on hyödyllinen aliviljelyyn tai uudelleenaktivointiin kantoja, jotka ovat metabolisesti erittäin heikkoja.

Veriryhmän ja perus-agarin valinta vaihtelee kuitenkin riippuen todennäköisestä mikro-organismista, jonka epäillään toipuneen, ja levyn käyttöä koskevasta käytöstä (viljely tai antiiogrammi).

Veriryhmän valinta

Veri voi olla lammasta, kania, hevosta tai ihmistä.

Suositeltuin on lampaan veri, joitain poikkeuksia lukuun ottamatta. Esimerkiksi Haemophilus-lajien eristämiseksi, jos suositeltava veri on hevosen tai kanin verta, koska karitsanveri sisältää entsyymejä, jotka estävät tekijää V.

Vähiten suositeltu on ihminen, mutta sitä käytetään eniten, ehkä sen vuoksi, että se on helpoin saada.

Veren on oltava defibribrinoitu, saatu ilman minkäänlaista lisäainetta ja terveiltä eläimiltä. Ihmisen veren käytössä on otettava huomioon useita tekijöitä:

Jos veri tulee henkilöiltä, ​​joilla on ollut bakteeri-infektioita, heillä on spesifisiä vasta-aineita. Näissä olosuhteissa joidenkin bakteerien kasvu estyy todennäköisesti.

Jos se saadaan veripankista, se sisältää sitraattia, ja tietyt bakteerit eivät välttämättä kasva sen läsnäollessa. Toisaalta, jos veri tulee potilailta, jotka käyttävät antibiootteja, alttiiden bakteerien kasvu voidaan estää.

Ja jos veri on peräisin diabeetikolta, ylimääräinen glukoosi häiritsee hemolyysikuvioiden asianmukaista kehitystä.

Perusagar-tyypin valinta

Veriagarin valmistukseen käytetty perus-agar voi olla hyvin leveä. Niitä ovat: ravintoaine-agar, aivojen sydäninfuusio-agar, trypticase-soija-agar, Müeller Hinton-agar, Thayer Martin-agar, Columbia-agar, Brucella-agar, Campylobacter-agar jne.

Käytetään veriagaria sen valmistukseen käytetyn elatusaineen mukaan

Ravinte agar

Tätä emästä käytetään vähiten, koska se kasvattaa pääasiassa vaatimattomia bakteereja, kuten enteerisiä bakteereja, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, mm. Streptococcus -bakteerin eristämistä ei suositella.

Aivosydäninfuusiogagar (BHI)

Se on yksi yleisimmin käytettäväksi veriagar-perusaineena, koska se sisältää useimpien bakteerien, mukaan lukien Streptococcus sp ja muut vaativat bakteerit, kasvuun tarvittavia ravintoaineita. Vaikka hemolyysin rakenteita ei ole tarkoituksenmukaista seurata.

Karitsan verta käytetään yleensä tämän pohjan kanssa.

Veriagar-variantteja voidaan myös valmistaa, joissa lisätään muita yhdisteitä tiettyjen mikro-organismien eristämiseksi. Esimerkiksi aivosydäninfuusiohappoa, johon on lisätty kanin verta, kystiiniä ja glukoosia, voidaan käyttää eristämään Francisella tularensis.

Kystiini-telluriitilla se on käyttökelpoinen Corynebacterium diphteriae -bakteerin eristämiseen. Ihmisen tai lampaan verta voidaan käyttää.

Ensimmäisellä beeta-hemolyysi nähdään kapeana halogeenina, kun taas toisella beeta-hemolyysi on paljon leveämpi.

Samoin tätä emästä yhdessä bakitrasiinin, maissitärkkelyksen, hevosen veren ja muiden rikastamislisäaineiden (IsoVitaleX) kanssa käytetään Haemophilus sp-suvun eristämiseen hengitysnäytteistä.

Lisäksi, jos antibioottien kloramfenikoli - gentamysiini tai penisilliini - streptomysiini yhdistelmää hevosveren kanssa lisätään, se on ihanteellinen vaativien patogeenisten sienten eristämiseen, jopa suuremmalla saannolla kuin Sabouraud-glukoosiagarilla. Se on erityisen hyödyllinen Histoplasma capsulatumin eristämisessä.

Trypticase soija-agar

Tätä emästä suositellaan parhaiten havaittaessa hemolyysikuviota ja diagnostisten testien, kuten optokiini-taksonien ja bacitrasiinin, suorittamiseksi. Se on klassinen veriagar, jota käytetään rutiininomaisesti.

Tämän pohjan avulla voit myös valmistaa erityisen veriagaarin Corynebacterium diphteriae -bakteerille, kystiinit telluriitilla ja karitsan veressä .

Samoin tämän agarin yhdistelmä lampaan verta ja kanamysiini-vankomysiini on ihanteellinen anaerobien, etenkin Bacteroides sp.

Müeller Hinton-agar

Tätä veressä täydennettyä emästä käytetään houkuttavien mikro-organismien, kuten Streptococcus sp.

Se on käyttökelpoinen myös bakteerien, kuten Legionella pneumophila, eristämisessä.

Thayer Martin Agar

Tämä väliaine on ihanteellinen perusta veriagarille, kun epäillään Neisseria-suvun, etenkin Neisseria meningitidis -lajin, koska N. gonorrhoeae ei kasva veriagarissa.

Sitä käytetään myös herkkyyden testaamiseen Neisseria meningitidikselle.

Columbia agar

Tämä pohja on erinomainen mahan biopsianäytteiden siementamiseen Helicobacter pylori -bakteerille.

Elatusaine valmistetaan lisäämällä 7-prosenttista lammasverta, joka on defibrifioitu antibiooteilla (vankomysiini, trimetoprimi, amfoterisiini B ja kefsulodiini), jotta voidaan rajoittaa muun tyyppisten bakteerien kasvua, joita voi olla.

Tämä sama emäs, johon on lisätty ihmisen tai lampaan verta, nalidiksiinihappoa ja kolistiiniä, on käyttökelpoinen Gardnerella vaginalisin eristämiseen. Se on myös ihanteellinen arvioitaessa saman mikro-organismin antimikrobista alttiutta antibioottien antibiooteille.

Lisäksi sitä käytetään veriagarin valmistukseen anaerobien viljelyyn lisäämällä aminoglykosideja ja vankomysiiniä.

Tämä emäs mahdollistaa hemolyysi- kuvioiden oikean tarkkailun.

Brucella-agar

Tämä elatusaine, jota käytetään veriagarin perustana yhdessä K-vitamiinin lisäyksen kanssa, on ihanteellinen anaerobisten bakteerien viljelyyn. Tässä tapauksessa suositellaan lampaan veren käyttöä.

Campylobacter-agar

Campylobacter-agar, johon on lisätty 5% lampaan verta ja viittä antibioottia (kefalotiini, amfoterisiini B, trimetoprimi, polymyksiini B ja vankomysiini), on elatusaine, jota käytetään Campylobacter jejuni -bakteerin eristämiseen ulosteesta.

Valmistautuminen

Jokainen kaupallinen talo tuo ohjeet litran kasvualustan valmistamiseksi säiliön takaosaan. Vastaavat laskelmat voidaan tehdä halutun määrän valmistamiseksi valitusta perus-agarista riippuen.

Punnitaan ja liuotetaan

Pohja-agar on dehydratoitu (jauhe), joten se on liuotettava tislattuun veteen, jonka pH on asetettu arvoon 7,3.

Valitun perus-agarin osoittama määrä punnitaan ja liuotetaan vastaavaan määrään vettä pullossa, sitten kuumennetaan maltillisella lämmöllä ja sekoitetaan pyörivillä liikkeillä, kunnes koko jauhe on liuennut.

Steriloida

Kun se on liuennut, steriloi autoklaavissa 121 ° C: ssa 20 minuutin ajan.

Veren aggregaatti

Autoklaavista poistettaessa pullon annetaan jäähtyä, kunnes lämpötila on välillä 40-50 ° C; Se on lämpötila, jota ihmisen iho tukee, ja samaan aikaan agar ei ole vielä jähmettynyt.

Tätä varten pulloa kosketetaan kädellä ja jos lämpö on siedettävää, on ihanteellinen lämpötila lisätä vastaava määrä defibrinoitua verta (50 ml kutakin litraa agaria kohti). Sekoita varovasti homogeeniseksi.

Veren aggregoitumisen kulku on ratkaisevan tärkeää, koska jos se tehdään, kun väliaine on erittäin kuuma, punasolut hajoavat ja väliainetta ei käytetä tarkkailemaan hemolyysiä.

Jos se lisätään liian kylmäksi, se rypistyy ja alustan pinta ei ole sileä oikean pisteytyksen mahdollistamiseksi.

Kaada Petrimaljoihin

Tarjoa steriileissä Petri-maljoissa heti veren homogenoinnin jälkeen. Jokaiseen Petrimaljaan kaadetaan noin 20 ml. Tämä toimenpide tehdään laminaarivirtauskaapissa tai lähellä poltinta.

Kun tarjoillaan veriagaria Petri-maljoissa, levyn pinnalle ei saa jäädä ilmakuplia. Jos näin tapahtuu, Bunsen-polttimen liekki kulkee nopeasti levyn yli niiden poistamiseksi.

Levyjen annetaan jähmettyä ja niitä varastoidaan jääkaapissa (2 - 8 ° C) käännettynä käyttöön asti. Ennen veriagarlevyjen käyttöä ne on karkaistava (annettava lämmetä huoneenlämpöiseksi), jotta ne voidaan siementtää.

Valmistetut levyt kestävät noin yhden viikon.

Viitteet

1. Bayona M. Mikrobiologiset olosuhteet Helicobacter pylori -viljelmälle. Col Coltro Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Käytännön kliininen mikrobiologia. Cadizin yliopisto, 2. painos. UCA: n julkaisupalvelu.
3. "Veriagar." Wikipedia, ilmainen tietosanakirja. 10. joulukuuta 2018, 14:55 UTC. 27. joulukuuta 2018, 01:49 fi.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott: n mikrobiologinen diagnoosi. 12 toim. Argentiina. Toimituksellinen Panamericana SA
5. CEDIVET-laboratorioeläindiagnostiikkakeskus. Guatemala. Saatavana osoitteessa trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinen diagnoosi. (5. painos). Argentiina, Toimitus Panamericana SA